鍵合纖維素衍生物手性固定相拆分酮洛芬對映體

邵 紅

（鄭州人民醫(yī)院，河南 鄭州 450000）

鍵合纖維素衍生物手性固定相拆分酮洛芬對映體

邵 紅

（鄭州人民醫(yī)院，河南 鄭州 450000）

目的建立用鍵合纖維素衍生物手性固定相拆分酮洛芬對映體的高效液相色譜法。方法采用Chiralpak IB色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）在正相條件下拆分酮洛芬對映體，流動(dòng)相為正己烷-異丙醇（95∶5），流速0.8 mL/min，檢測波長254 nm，柱溫25 ℃。結(jié)果酮洛芬對映體在鍵合纖維素衍生物手性固定相上能夠基線分離，分離度為5.44。結(jié)論本法簡便、快速、重復(fù)性好，適用于酮洛芬對映體的分離。

高效液相色譜；鍵合纖維素衍生物手性固定相；酮洛芬；對映體拆分

酮洛芬是非甾體抗炎藥（NSAIDs），具有解熱鎮(zhèn)痛和抗炎作 用，用于治療骨節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。酮洛芬分子結(jié)構(gòu)中含有1個(gè)手性中心，存在1對對映體。藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，只有S-型對映體才具有抗炎抗風(fēng)濕和鎮(zhèn)痛作用，若以S-型對映體給藥可減少給藥劑量，降低毒副作用[1]。對酮洛芬對映體的拆分主要有手性柱法[2,3]，手性流動(dòng)相添加劑法[4]，柱前衍生化法[5]和毛細(xì)管電泳法[6]。但未見采用鍵合纖維素-三（3，5-二甲苯基氨基甲酸酯）色譜柱，即Chiralpak IB色譜柱進(jìn)行拆分的報(bào)道。因此，本文采用Chiralpak IB色譜柱對酮洛芬對映體進(jìn)行拆分，并考察了流動(dòng)相組成、流速和柱溫對分離的影響。

1 儀器與試藥

Agilent HΡ1100高效液相色譜儀（1100VWD紫外可見檢測器，1100自動(dòng)進(jìn)樣器，HΡ化學(xué)工作站）；Chiralpak IB色譜柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm；日本大賽璐公司）；BΡ211D1/10萬天平（德國Sartorius公司）；酮洛芬（外消旋體，中國食品藥品檢定研究院）；正己烷、異丙醇、乙醇和三氯甲烷（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Chiralpak IB柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：正己烷-異丙醇（95∶5）；流速：0.8 mL/min；檢測波長：254 nm；柱溫：25 ℃。

2.2 樣品溶液的制備與測定

精密稱取酮洛芬1.0 mg置10 mL容量瓶中用異丙醇溶解并定容至刻度，得濃度為0.1 mg/mL的樣品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾并超聲脫氣后取10 μL進(jìn)樣，按所選色譜條件操作，色譜結(jié)果見圖1。

圖1 酮洛芬對映體手性拆分色譜圖

3 討 論

3.1 流動(dòng)相改性劑種類對分離的影響

在以正己烷為流動(dòng)相的正相體系中，固定流速為0.8 mL/min，柱溫為25 ℃，分別以乙醇和異丙醇為流動(dòng)相改性劑考察了醇的種類對拆分的影響（表1），其中乙醇和異丙醇量均為5%。結(jié)果表明，與使用乙醇為流動(dòng)相改性劑相比，異丙醇有更強(qiáng)的選擇性，分離度高于乙醇。流動(dòng)相中醇分子能夠以氫鍵形式在固定相表面與酮洛芬對映體發(fā)生吸附性競爭，減弱酮洛芬對映體的過強(qiáng)吸附，使其得到分離。當(dāng)由乙醇更換為異丙醇，醇碳鏈長度增加，流動(dòng)相與固定相作用的能力降低，從而使酮洛芬對映體與固定相的作用增強(qiáng)，表現(xiàn)為保留增強(qiáng)，分離度增加，而出峰時(shí)間相差不大。因此，選擇異丙醇為流動(dòng)相改性劑。

表1 醇的種類對分離的影響

3.2 流動(dòng)相改性劑比例對分離的影響

在流速為0.8 mL/min，柱溫為25 ℃的條件下，通過改變流動(dòng)相正己烷和異丙醇的比例，考察醇的比例對拆分的影響（表2）。結(jié)果表明，異丙醇量為5%時(shí)，分離度最好，隨著異丙醇量的增加，出峰時(shí)間變短，分離度降低。隨著異丙醇量的增加，流動(dòng)相和固定相的分子作用增強(qiáng)，從而使酮洛芬對映體的柱保留作用減弱，洗脫速度加快，同時(shí)分離度和分離因子隨之降低，分離能力下降。故選擇流動(dòng)相正己烷-異丙醇（95∶5）。

表2 醇的比例對分離的影響

3.3 流速對分離的影響

在流動(dòng)相為正己烷-異丙醇（95∶5），柱溫為25 ℃的條件下，考察流速對酮洛芬對映體分離的影響（表3）。結(jié)果表明，隨著流速的增加，酮洛芬對映體的分離因子沒有變化，這說明流速對手性空穴的空間構(gòu)型沒有影響。酮洛芬對映體的分離度在流速為0.6 mL/min時(shí)達(dá)到最大，流速＜0.6 mL/min，由于出峰時(shí)間延長，峰形擴(kuò)展，導(dǎo)致分離度降低。流速＞0.6 mL/min，隨著流速的增加，使藥物對映體與固定相的作用時(shí)間減少，從而不利于分離，且流速越大，柱壓越高。綜合考慮分離度、出峰時(shí)間和柱壓等因素，選擇流速為0.8 mL/min。

表3 流速對分離的影響

3.4 柱溫對分離的影響

在流動(dòng)相為正己烷-異丙醇（95∶5），流速為0.8 mL/min的條件下，考察柱溫（20～35 ℃）對對映體出峰時(shí)間和分離度的影響。結(jié)果表明，隨著溫度的升高，出峰時(shí)間加快，對映體分離度減小。這是由于溫度降低，對映體與固定相之間有充分的時(shí)間形成非對映體結(jié)合物，使分離度增加。但溫度過低，使出峰時(shí)間延長，峰形擴(kuò)展，分離度下降。25 ℃接近室溫，且低溫有利于延長色譜柱的壽命，因此選擇25 ℃作為柱溫。

4 結(jié) 論

使用Chiralpak IB色譜柱對酮洛芬對映體進(jìn)行拆分，考察了流動(dòng)相組成、流速和柱溫對拆分的影響，確立了最佳拆分條件：流動(dòng)相為正己烷-異丙醇（95∶5），流速0.8 mL/min，檢測波長254 nm，柱溫25 ℃。

[1] 梅之南,裴小平,蔡鴻生.右旋酮洛芬的藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)性質(zhì)[J].中國新藥雜志,1998,7(5):339-341.

[2] Boisvert J,Caillé G,McGilveray IJ,et al.Quantification of ketoprofen enantiomers in human plasma based on solid-phase extraction and enantioselective column chromatography[J].J Chromatogr B,1997,690(1-2):189-193.

[3] 李小梅,周鳳,趙華,等.酮洛芬對映體的分離、分析方法的研究及其應(yīng)用[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2010,35(4):586-590.

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[6] 張智超,張鍇,高如瑜.以高取代磺酸基環(huán)糊精為手性選擇劑毛細(xì)管電泳法拆分4種藥物對映體[J].藥物分析雜志,2000,20(6):363-366.

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1671-8194（2014）10-0057-03