花葉豆瓣綠組培技術(shù)研究

黃靖

摘 要：以花葉豆瓣綠品種的葉片、葉柄、莖段為外植體接種于MS附加不同激素的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織，并進(jìn)一步誘導(dǎo)分化出芽及再生植株，結(jié)果表明：葉柄誘導(dǎo)效果好于葉片及莖段，MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L配方最適宜初代誘導(dǎo)。誘導(dǎo)獲得的愈傷組織在MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L的培養(yǎng)基上進(jìn)一步分化成苗，以無根苗培養(yǎng)在1/2 MS+NAA 0.2mg/L的培養(yǎng)基中，經(jīng)23d培養(yǎng)生根。

關(guān)鍵詞：花葉豆瓣綠；組織培養(yǎng)；生長調(diào)節(jié)劑

中圖分類號(hào) S68 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）06-36-03

花葉豆瓣綠（Peperomia obtusifoli）又名花葉椒草，屬胡椒科豆瓣綠屬變種，多年生草本植物?；ㄈ~型植株無主莖，葉簇生，近肉質(zhì)較肥厚，倒卵形，其葉中部綠色，邊緣為一闊金黃色鑲邊。常用塑料盆、白瓷盆栽培，置于茶幾、裝飾柜、博古架、辦公桌上，十分美麗。多適用于室內(nèi)觀賞，在我國南方亦可作為地被植物栽植。

花葉豆瓣綠很難獲得種子，故以無性繁殖為主。其無性繁殖有2種方法：一種為水插，只要溫度適宜，一年四季均可進(jìn)行繁殖，簡單，成活率較高；另一種為土插，但由于豆瓣綠生長緩慢，采用此法扦插繁殖培養(yǎng)周期長，增殖系數(shù)低[1]。本實(shí)驗(yàn)在前人研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步試驗(yàn)了花葉豆瓣綠組織培養(yǎng)和工廠化快繁程序，以篩選出適合花葉豆瓣綠組織培養(yǎng)快速繁殖的最佳外植體，建立花葉豆瓣綠組培快繁技術(shù)體系，以期探索出利于花葉豆瓣綠工廠化生產(chǎn)的有效途徑[2-3]。

1 材料與方法

1.1 材料 供試材料取自福州建新園藝場(chǎng)，選取生長健壯、無病蟲危害的盆栽花葉豆瓣綠品種。

1.2 材料處理 將剪取的花葉豆瓣綠葉片、葉柄、莖段用自來水流水沖洗，后置于75%酒精中30s，倒去酒精，用無菌水漂洗，轉(zhuǎn)入0.1%HgCl2中分別消毒4min、6min、8min、10min、12min，用無菌水漂洗5～8次，將葉片切為0.5～0.7cm2的方塊，將葉柄、莖段切為0.3～0.5cm的小節(jié)備用。

1.3 培養(yǎng)基配制 以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，不同階段附加不同濃度的BA、NAA等生長調(diào)節(jié)劑（表1～3）。培養(yǎng)基煮沸后調(diào)pH值至5.8，注入容器中，封口后置于高壓鍋中在121℃，1.1kg/cm2下滅菌30min。

1.4 培養(yǎng)條件 將處理好的花葉豆瓣綠葉片切塊與莖段分別接種在不同配方培養(yǎng)基上，置于光照培養(yǎng)室內(nèi)，室溫保持25±2℃，光照強(qiáng)度1 500～2 000lx，光照時(shí)間12h/d的條件下誘導(dǎo)。

1.5 繼代增殖培養(yǎng) 將形成的愈傷組織轉(zhuǎn)移到含⑤、⑥培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每瓶接種3塊，培養(yǎng)25d左右后，將形成的叢生芽繼續(xù)分割接種，進(jìn)一步擴(kuò)大增殖。

1.6 生根培養(yǎng) 選擇生長健壯的小苗移至1/2 MS+NAA 0.2mg/L的生根培養(yǎng)基上，觀察記錄生根和小苗生長狀況，并統(tǒng)計(jì)生根率。

1.7 小苗移栽 為了使小苗適應(yīng)盆載環(huán)境，可將已經(jīng)生根的試管苗在室溫下開瓶練苗3～5d。取出試管苗，將小苗根部附著的培養(yǎng)基用清水洗凈，移入育苗盆中，培養(yǎng)土用消毒過的蛭石及泥炭土。

1.8 觀察記載 接種后每隔10d觀察一次，記錄成活數(shù)、污染率、出愈綠、萌芽率、生根率等情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 消毒時(shí)間對(duì)花葉豆瓣綠無菌系建立的影響 外植體不同消毒時(shí)間處理效果如表3所示。通過表3數(shù)據(jù)可見，消毒時(shí)間不宜少于8min，消毒4min和消毒6min的外植體的污染率顯著高于其他消毒時(shí)間的外植體的污染率。而消毒12min，HgCl2殘留難以清洗，外植體全部死亡。經(jīng)比較可知，消毒時(shí)間在8～10min為最優(yōu)。

2.2 不同外植體的選擇 外植體接入時(shí)采用了葉片、葉柄與莖段3個(gè)部分，經(jīng)過觀察記錄如表4所示。在相同條件下，葉柄分化速度較快，葉片其次，莖段較慢。但葉片褐化問題較其他部位嚴(yán)重。因此，從外植體來源上看，以葉柄效果最好，且誘導(dǎo)時(shí)間短，增殖率高。

2.3不同激素配比對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響 將消毒后的豆瓣綠葉柄外植體分別接入培養(yǎng)基①、②、③、④中，培養(yǎng)25d以后葉柄切口及基部周圍產(chǎn)生黃綠色愈傷組織。具體情況如表5所示。由表5可見，在不同激素配比和添加物情況下，花葉豆瓣綠葉柄的成芽率不同。在①、②、③培養(yǎng)基配比中，隨著BA與NAA使用比例提高，出愈率有顯著提升，但在④號(hào)培養(yǎng)基中BA用量超過一定比例時(shí)，出愈率顯著下降。因此，花葉豆瓣綠誘導(dǎo)最適配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L。

2.4 不同培養(yǎng)基對(duì)芽增殖的影響 外植體產(chǎn)生小苗以后，繼續(xù)采用同樣的培養(yǎng)基做繼代增殖，小苗高2～3cm時(shí)將轉(zhuǎn)移的叢生小苗切成較小的叢，或?qū)⑤^大的苗再切碎，分別在⑤、⑥、⑦培養(yǎng)基上培養(yǎng)30～40d，愈傷組織開始分化出芽，后增殖得到更多的叢生苗。三組激素配比中以⑥號(hào)效果最優(yōu)。因此，花葉豆瓣綠最佳增殖配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。

2.5 根的誘導(dǎo) 選取生長健壯的2～3cm小苗，移植到生根培養(yǎng)基1/2 MS+ NAA 0.2mg/L上。一般在23d左右便可生根，根長度多為1～2cm。

2.6 移栽 選擇生長健壯、無玻璃化現(xiàn)象、根長2～3cm、高4～5cm的生根苗進(jìn)行移栽。移栽前把培養(yǎng)瓶打開后于室溫下煉苗。一周后將苗從培養(yǎng)基中拔起，將根部培養(yǎng)基清除干凈后再移植入培養(yǎng)土中。培養(yǎng)土選用消毒過的泥炭土+蛭石，加強(qiáng)溫濕管理，通常情況下移栽成活率可達(dá)100%。

3 結(jié)論與討論

（1）花葉豆瓣綠的葉片、葉柄、莖段等均可作為外植體培養(yǎng)成功，在誘導(dǎo)時(shí)間上，各部位外植體差異并不大，誘導(dǎo)效果上葉柄較好，同等條件下葉片作為外植體雖然褐化率較高，但其為相對(duì)值，絕對(duì)值尚在可接受范圍?？紤]到葉片最易獲取，在工廠化快繁中也可用葉片代替葉柄。

（2）植物激素是培養(yǎng)基中關(guān)鍵物質(zhì)，在基本培養(yǎng)基確定的前提下，篩選合適的激素種類和激素配比是組織培養(yǎng)成功與否的關(guān)鍵。綜上所述，花葉豆瓣綠快繁的基本培養(yǎng)基為Ms培養(yǎng)基，誘導(dǎo)愈傷組織的最適配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L；叢生芽增殖的最優(yōu)配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L；生根配方為：1/2 MS+NAA 0.2mg/L。

（3）花葉豆瓣綠的組培快繁潛力很大。理論上，花葉豆瓣綠每次增殖可達(dá)10～20倍，在1a內(nèi)通過組培繁殖出幾十萬株苗是實(shí)際可行的。如能做到培養(yǎng)過程中初代誘導(dǎo)、繼代增殖、生根都可在同一培養(yǎng)基上進(jìn)行，一次成苗將大大提高花葉豆瓣綠大批量商業(yè)生產(chǎn)的效率，從而獲得更好的經(jīng)濟(jì)效益。

參考文獻(xiàn)

[1]王濤，彭立新.豆瓣綠的組織培養(yǎng)與快速繁殖研究[J].天津農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，18（2）：1-5.

[2]蔡明，李樹貴.豆瓣綠葉片再生植株[J].西南園藝，2001，29（4）：43.

[3]蔣澤平，朱鹿鳴.豆瓣綠試管苗快速繁殖 [J].江蘇林業(yè)科技，1990（1）：14-15.

[4]譚文澄，戴策剛.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M].北京：中國林業(yè)出版社，2000. （責(zé)編：施婷婷）endprint

摘 要：以花葉豆瓣綠品種的葉片、葉柄、莖段為外植體接種于MS附加不同激素的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織，并進(jìn)一步誘導(dǎo)分化出芽及再生植株，結(jié)果表明：葉柄誘導(dǎo)效果好于葉片及莖段，MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L配方最適宜初代誘導(dǎo)。誘導(dǎo)獲得的愈傷組織在MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L的培養(yǎng)基上進(jìn)一步分化成苗，以無根苗培養(yǎng)在1/2 MS+NAA 0.2mg/L的培養(yǎng)基中，經(jīng)23d培養(yǎng)生根。

關(guān)鍵詞：花葉豆瓣綠；組織培養(yǎng)；生長調(diào)節(jié)劑

中圖分類號(hào) S68 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）06-36-03

花葉豆瓣綠（Peperomia obtusifoli）又名花葉椒草，屬胡椒科豆瓣綠屬變種，多年生草本植物?；ㄈ~型植株無主莖，葉簇生，近肉質(zhì)較肥厚，倒卵形，其葉中部綠色，邊緣為一闊金黃色鑲邊。常用塑料盆、白瓷盆栽培，置于茶幾、裝飾柜、博古架、辦公桌上，十分美麗。多適用于室內(nèi)觀賞，在我國南方亦可作為地被植物栽植。

花葉豆瓣綠很難獲得種子，故以無性繁殖為主。其無性繁殖有2種方法：一種為水插，只要溫度適宜，一年四季均可進(jìn)行繁殖，簡單，成活率較高；另一種為土插，但由于豆瓣綠生長緩慢，采用此法扦插繁殖培養(yǎng)周期長，增殖系數(shù)低[1]。本實(shí)驗(yàn)在前人研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步試驗(yàn)了花葉豆瓣綠組織培養(yǎng)和工廠化快繁程序，以篩選出適合花葉豆瓣綠組織培養(yǎng)快速繁殖的最佳外植體，建立花葉豆瓣綠組培快繁技術(shù)體系，以期探索出利于花葉豆瓣綠工廠化生產(chǎn)的有效途徑[2-3]。

1 材料與方法

1.1 材料 供試材料取自福州建新園藝場(chǎng)，選取生長健壯、無病蟲危害的盆栽花葉豆瓣綠品種。

1.2 材料處理 將剪取的花葉豆瓣綠葉片、葉柄、莖段用自來水流水沖洗，后置于75%酒精中30s，倒去酒精，用無菌水漂洗，轉(zhuǎn)入0.1%HgCl2中分別消毒4min、6min、8min、10min、12min，用無菌水漂洗5～8次，將葉片切為0.5～0.7cm2的方塊，將葉柄、莖段切為0.3～0.5cm的小節(jié)備用。

1.3 培養(yǎng)基配制 以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，不同階段附加不同濃度的BA、NAA等生長調(diào)節(jié)劑（表1～3）。培養(yǎng)基煮沸后調(diào)pH值至5.8，注入容器中，封口后置于高壓鍋中在121℃，1.1kg/cm2下滅菌30min。

1.4 培養(yǎng)條件 將處理好的花葉豆瓣綠葉片切塊與莖段分別接種在不同配方培養(yǎng)基上，置于光照培養(yǎng)室內(nèi)，室溫保持25±2℃，光照強(qiáng)度1 500～2 000lx，光照時(shí)間12h/d的條件下誘導(dǎo)。

1.5 繼代增殖培養(yǎng) 將形成的愈傷組織轉(zhuǎn)移到含⑤、⑥培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每瓶接種3塊，培養(yǎng)25d左右后，將形成的叢生芽繼續(xù)分割接種，進(jìn)一步擴(kuò)大增殖。

1.6 生根培養(yǎng) 選擇生長健壯的小苗移至1/2 MS+NAA 0.2mg/L的生根培養(yǎng)基上，觀察記錄生根和小苗生長狀況，并統(tǒng)計(jì)生根率。

1.7 小苗移栽 為了使小苗適應(yīng)盆載環(huán)境，可將已經(jīng)生根的試管苗在室溫下開瓶練苗3～5d。取出試管苗，將小苗根部附著的培養(yǎng)基用清水洗凈，移入育苗盆中，培養(yǎng)土用消毒過的蛭石及泥炭土。

1.8 觀察記載 接種后每隔10d觀察一次，記錄成活數(shù)、污染率、出愈綠、萌芽率、生根率等情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 消毒時(shí)間對(duì)花葉豆瓣綠無菌系建立的影響 外植體不同消毒時(shí)間處理效果如表3所示。通過表3數(shù)據(jù)可見，消毒時(shí)間不宜少于8min，消毒4min和消毒6min的外植體的污染率顯著高于其他消毒時(shí)間的外植體的污染率。而消毒12min，HgCl2殘留難以清洗，外植體全部死亡。經(jīng)比較可知，消毒時(shí)間在8～10min為最優(yōu)。

2.2 不同外植體的選擇 外植體接入時(shí)采用了葉片、葉柄與莖段3個(gè)部分，經(jīng)過觀察記錄如表4所示。在相同條件下，葉柄分化速度較快，葉片其次，莖段較慢。但葉片褐化問題較其他部位嚴(yán)重。因此，從外植體來源上看，以葉柄效果最好，且誘導(dǎo)時(shí)間短，增殖率高。

2.3不同激素配比對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響 將消毒后的豆瓣綠葉柄外植體分別接入培養(yǎng)基①、②、③、④中，培養(yǎng)25d以后葉柄切口及基部周圍產(chǎn)生黃綠色愈傷組織。具體情況如表5所示。由表5可見，在不同激素配比和添加物情況下，花葉豆瓣綠葉柄的成芽率不同。在①、②、③培養(yǎng)基配比中，隨著BA與NAA使用比例提高，出愈率有顯著提升，但在④號(hào)培養(yǎng)基中BA用量超過一定比例時(shí)，出愈率顯著下降。因此，花葉豆瓣綠誘導(dǎo)最適配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L。

2.4 不同培養(yǎng)基對(duì)芽增殖的影響 外植體產(chǎn)生小苗以后，繼續(xù)采用同樣的培養(yǎng)基做繼代增殖，小苗高2～3cm時(shí)將轉(zhuǎn)移的叢生小苗切成較小的叢，或?qū)⑤^大的苗再切碎，分別在⑤、⑥、⑦培養(yǎng)基上培養(yǎng)30～40d，愈傷組織開始分化出芽，后增殖得到更多的叢生苗。三組激素配比中以⑥號(hào)效果最優(yōu)。因此，花葉豆瓣綠最佳增殖配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。

2.5 根的誘導(dǎo) 選取生長健壯的2～3cm小苗，移植到生根培養(yǎng)基1/2 MS+ NAA 0.2mg/L上。一般在23d左右便可生根，根長度多為1～2cm。

2.6 移栽 選擇生長健壯、無玻璃化現(xiàn)象、根長2～3cm、高4～5cm的生根苗進(jìn)行移栽。移栽前把培養(yǎng)瓶打開后于室溫下煉苗。一周后將苗從培養(yǎng)基中拔起，將根部培養(yǎng)基清除干凈后再移植入培養(yǎng)土中。培養(yǎng)土選用消毒過的泥炭土+蛭石，加強(qiáng)溫濕管理，通常情況下移栽成活率可達(dá)100%。

3 結(jié)論與討論

（1）花葉豆瓣綠的葉片、葉柄、莖段等均可作為外植體培養(yǎng)成功，在誘導(dǎo)時(shí)間上，各部位外植體差異并不大，誘導(dǎo)效果上葉柄較好，同等條件下葉片作為外植體雖然褐化率較高，但其為相對(duì)值，絕對(duì)值尚在可接受范圍。考慮到葉片最易獲取，在工廠化快繁中也可用葉片代替葉柄。

（2）植物激素是培養(yǎng)基中關(guān)鍵物質(zhì)，在基本培養(yǎng)基確定的前提下，篩選合適的激素種類和激素配比是組織培養(yǎng)成功與否的關(guān)鍵。綜上所述，花葉豆瓣綠快繁的基本培養(yǎng)基為Ms培養(yǎng)基，誘導(dǎo)愈傷組織的最適配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L；叢生芽增殖的最優(yōu)配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L；生根配方為：1/2 MS+NAA 0.2mg/L。

（3）花葉豆瓣綠的組培快繁潛力很大。理論上，花葉豆瓣綠每次增殖可達(dá)10～20倍，在1a內(nèi)通過組培繁殖出幾十萬株苗是實(shí)際可行的。如能做到培養(yǎng)過程中初代誘導(dǎo)、繼代增殖、生根都可在同一培養(yǎng)基上進(jìn)行，一次成苗將大大提高花葉豆瓣綠大批量商業(yè)生產(chǎn)的效率，從而獲得更好的經(jīng)濟(jì)效益。

參考文獻(xiàn)

[1]王濤，彭立新.豆瓣綠的組織培養(yǎng)與快速繁殖研究[J].天津農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，18（2）：1-5.

[2]蔡明，李樹貴.豆瓣綠葉片再生植株[J].西南園藝，2001，29（4）：43.

[3]蔣澤平，朱鹿鳴.豆瓣綠試管苗快速繁殖 [J].江蘇林業(yè)科技，1990（1）：14-15.

[4]譚文澄，戴策剛.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M].北京：中國林業(yè)出版社，2000. （責(zé)編：施婷婷）endprint

摘 要：以花葉豆瓣綠品種的葉片、葉柄、莖段為外植體接種于MS附加不同激素的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織，并進(jìn)一步誘導(dǎo)分化出芽及再生植株，結(jié)果表明：葉柄誘導(dǎo)效果好于葉片及莖段，MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L配方最適宜初代誘導(dǎo)。誘導(dǎo)獲得的愈傷組織在MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L的培養(yǎng)基上進(jìn)一步分化成苗，以無根苗培養(yǎng)在1/2 MS+NAA 0.2mg/L的培養(yǎng)基中，經(jīng)23d培養(yǎng)生根。

關(guān)鍵詞：花葉豆瓣綠；組織培養(yǎng)；生長調(diào)節(jié)劑

中圖分類號(hào) S68 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）06-36-03

花葉豆瓣綠（Peperomia obtusifoli）又名花葉椒草，屬胡椒科豆瓣綠屬變種，多年生草本植物?；ㄈ~型植株無主莖，葉簇生，近肉質(zhì)較肥厚，倒卵形，其葉中部綠色，邊緣為一闊金黃色鑲邊。常用塑料盆、白瓷盆栽培，置于茶幾、裝飾柜、博古架、辦公桌上，十分美麗。多適用于室內(nèi)觀賞，在我國南方亦可作為地被植物栽植。

花葉豆瓣綠很難獲得種子，故以無性繁殖為主。其無性繁殖有2種方法：一種為水插，只要溫度適宜，一年四季均可進(jìn)行繁殖，簡單，成活率較高；另一種為土插，但由于豆瓣綠生長緩慢，采用此法扦插繁殖培養(yǎng)周期長，增殖系數(shù)低[1]。本實(shí)驗(yàn)在前人研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步試驗(yàn)了花葉豆瓣綠組織培養(yǎng)和工廠化快繁程序，以篩選出適合花葉豆瓣綠組織培養(yǎng)快速繁殖的最佳外植體，建立花葉豆瓣綠組培快繁技術(shù)體系，以期探索出利于花葉豆瓣綠工廠化生產(chǎn)的有效途徑[2-3]。

1 材料與方法

1.1 材料 供試材料取自福州建新園藝場(chǎng)，選取生長健壯、無病蟲危害的盆栽花葉豆瓣綠品種。

1.2 材料處理 將剪取的花葉豆瓣綠葉片、葉柄、莖段用自來水流水沖洗，后置于75%酒精中30s，倒去酒精，用無菌水漂洗，轉(zhuǎn)入0.1%HgCl2中分別消毒4min、6min、8min、10min、12min，用無菌水漂洗5～8次，將葉片切為0.5～0.7cm2的方塊，將葉柄、莖段切為0.3～0.5cm的小節(jié)備用。

1.3 培養(yǎng)基配制 以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，不同階段附加不同濃度的BA、NAA等生長調(diào)節(jié)劑（表1～3）。培養(yǎng)基煮沸后調(diào)pH值至5.8，注入容器中，封口后置于高壓鍋中在121℃，1.1kg/cm2下滅菌30min。

1.4 培養(yǎng)條件 將處理好的花葉豆瓣綠葉片切塊與莖段分別接種在不同配方培養(yǎng)基上，置于光照培養(yǎng)室內(nèi)，室溫保持25±2℃，光照強(qiáng)度1 500～2 000lx，光照時(shí)間12h/d的條件下誘導(dǎo)。

1.5 繼代增殖培養(yǎng) 將形成的愈傷組織轉(zhuǎn)移到含⑤、⑥培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每瓶接種3塊，培養(yǎng)25d左右后，將形成的叢生芽繼續(xù)分割接種，進(jìn)一步擴(kuò)大增殖。

1.6 生根培養(yǎng) 選擇生長健壯的小苗移至1/2 MS+NAA 0.2mg/L的生根培養(yǎng)基上，觀察記錄生根和小苗生長狀況，并統(tǒng)計(jì)生根率。

1.7 小苗移栽 為了使小苗適應(yīng)盆載環(huán)境，可將已經(jīng)生根的試管苗在室溫下開瓶練苗3～5d。取出試管苗，將小苗根部附著的培養(yǎng)基用清水洗凈，移入育苗盆中，培養(yǎng)土用消毒過的蛭石及泥炭土。

1.8 觀察記載 接種后每隔10d觀察一次，記錄成活數(shù)、污染率、出愈綠、萌芽率、生根率等情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 消毒時(shí)間對(duì)花葉豆瓣綠無菌系建立的影響 外植體不同消毒時(shí)間處理效果如表3所示。通過表3數(shù)據(jù)可見，消毒時(shí)間不宜少于8min，消毒4min和消毒6min的外植體的污染率顯著高于其他消毒時(shí)間的外植體的污染率。而消毒12min，HgCl2殘留難以清洗，外植體全部死亡。經(jīng)比較可知，消毒時(shí)間在8～10min為最優(yōu)。

2.2 不同外植體的選擇 外植體接入時(shí)采用了葉片、葉柄與莖段3個(gè)部分，經(jīng)過觀察記錄如表4所示。在相同條件下，葉柄分化速度較快，葉片其次，莖段較慢。但葉片褐化問題較其他部位嚴(yán)重。因此，從外植體來源上看，以葉柄效果最好，且誘導(dǎo)時(shí)間短，增殖率高。

2.3不同激素配比對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響 將消毒后的豆瓣綠葉柄外植體分別接入培養(yǎng)基①、②、③、④中，培養(yǎng)25d以后葉柄切口及基部周圍產(chǎn)生黃綠色愈傷組織。具體情況如表5所示。由表5可見，在不同激素配比和添加物情況下，花葉豆瓣綠葉柄的成芽率不同。在①、②、③培養(yǎng)基配比中，隨著BA與NAA使用比例提高，出愈率有顯著提升，但在④號(hào)培養(yǎng)基中BA用量超過一定比例時(shí)，出愈率顯著下降。因此，花葉豆瓣綠誘導(dǎo)最適配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L。

2.4 不同培養(yǎng)基對(duì)芽增殖的影響 外植體產(chǎn)生小苗以后，繼續(xù)采用同樣的培養(yǎng)基做繼代增殖，小苗高2～3cm時(shí)將轉(zhuǎn)移的叢生小苗切成較小的叢，或?qū)⑤^大的苗再切碎，分別在⑤、⑥、⑦培養(yǎng)基上培養(yǎng)30～40d，愈傷組織開始分化出芽，后增殖得到更多的叢生苗。三組激素配比中以⑥號(hào)效果最優(yōu)。因此，花葉豆瓣綠最佳增殖配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。

2.5 根的誘導(dǎo) 選取生長健壯的2～3cm小苗，移植到生根培養(yǎng)基1/2 MS+ NAA 0.2mg/L上。一般在23d左右便可生根，根長度多為1～2cm。

2.6 移栽 選擇生長健壯、無玻璃化現(xiàn)象、根長2～3cm、高4～5cm的生根苗進(jìn)行移栽。移栽前把培養(yǎng)瓶打開后于室溫下煉苗。一周后將苗從培養(yǎng)基中拔起，將根部培養(yǎng)基清除干凈后再移植入培養(yǎng)土中。培養(yǎng)土選用消毒過的泥炭土+蛭石，加強(qiáng)溫濕管理，通常情況下移栽成活率可達(dá)100%。

3 結(jié)論與討論

（1）花葉豆瓣綠的葉片、葉柄、莖段等均可作為外植體培養(yǎng)成功，在誘導(dǎo)時(shí)間上，各部位外植體差異并不大，誘導(dǎo)效果上葉柄較好，同等條件下葉片作為外植體雖然褐化率較高，但其為相對(duì)值，絕對(duì)值尚在可接受范圍。考慮到葉片最易獲取，在工廠化快繁中也可用葉片代替葉柄。

（2）植物激素是培養(yǎng)基中關(guān)鍵物質(zhì)，在基本培養(yǎng)基確定的前提下，篩選合適的激素種類和激素配比是組織培養(yǎng)成功與否的關(guān)鍵。綜上所述，花葉豆瓣綠快繁的基本培養(yǎng)基為Ms培養(yǎng)基，誘導(dǎo)愈傷組織的最適配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L；叢生芽增殖的最優(yōu)配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L；生根配方為：1/2 MS+NAA 0.2mg/L。

（3）花葉豆瓣綠的組培快繁潛力很大。理論上，花葉豆瓣綠每次增殖可達(dá)10～20倍，在1a內(nèi)通過組培繁殖出幾十萬株苗是實(shí)際可行的。如能做到培養(yǎng)過程中初代誘導(dǎo)、繼代增殖、生根都可在同一培養(yǎng)基上進(jìn)行，一次成苗將大大提高花葉豆瓣綠大批量商業(yè)生產(chǎn)的效率，從而獲得更好的經(jīng)濟(jì)效益。

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