國(guó)外豬弓形蟲感染的風(fēng)險(xiǎn)因素及基因型研究進(jìn)展

尹志奎，王 東，鄭 斌＊

（1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，河南新鄉(xiāng)453003；2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室，河南新鄉(xiāng)453003）

弓形蟲（Toxoplasma gondii）為世界性分布的專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲，可主動(dòng)入侵多種哺乳動(dòng)物（豬、牛、羊等）和人的細(xì)胞，導(dǎo)致弓形蟲感染或弓形蟲?。═oxoplasmosis）。豬感染弓形蟲后不僅影響其自身的發(fā)育、繁殖，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展造成一定的經(jīng)濟(jì)損失，若以感染豬來(lái)源的肉制品作為食物，還可能威脅到其他動(dòng)物和人的健康。研究發(fā)現(xiàn)豬的弓形蟲感染與某些因素相關(guān)聯(lián)，不同地區(qū)的豬弓形蟲感染的影響因素不同。弓形蟲有3個(gè)主要基因型，即Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型，在全球廣泛分布。基因分析發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)的弓形蟲分離株在遺傳上有不同的多樣性，基因型的不同導(dǎo)致蟲體的致病力及對(duì)藥物的敏感性存在差異。對(duì)弓形蟲的基因型進(jìn)行分析，可以為弓形蟲病的診斷和治療提供依據(jù)［1-2］。下面對(duì)國(guó)外的豬弓形蟲感染的風(fēng)險(xiǎn)因素及基因型的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期對(duì)后續(xù)動(dòng)物的飼養(yǎng)及弓形蟲病的治療提供參考。

1 豬弓形蟲感染檢測(cè)及基因型分析方法

用于檢測(cè)豬弓形蟲感染的方法主要有血清學(xué)和分子生物學(xué)方法。血清學(xué)方法包括乳膠凝集試驗(yàn)（LAT）、改良凝集試驗(yàn)（MAT）、直接凝集試驗(yàn)（DAT）、間接血凝試驗(yàn)（IHA）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和間接熒光抗體試驗(yàn)（IFAT）等。分子生物學(xué)方法包括聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和脫氧核糖核酸（DNA）探針技術(shù)等。不同檢測(cè)方法的敏感性和特異性不同，采用不同檢測(cè)方法得到的結(jié)果不具可比性。弓形蟲基因型分析方法有限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性PCR（PCR-RFLP）、多重PCR（multiplex PCR）、套式PCR（nested PCR）和PCR-DNA 測(cè)序法等，不同的研究選用的遺傳標(biāo)記可能不同。

2 豬弓形蟲感染的風(fēng)險(xiǎn)因素

泰國(guó)南部小豬弓形蟲血清陽(yáng)性率為71.43%（LAT），同時(shí)還檢測(cè)到農(nóng)場(chǎng)的一只貓的血清弓形蟲抗體為陽(yáng)性。推測(cè)該農(nóng)場(chǎng)豬弓形蟲感染途徑為經(jīng)胎盤垂直傳播及貓糞中的弓形蟲卵囊污染豬的食物和飲用水等［3］。芬蘭野豬場(chǎng)野豬弓形蟲血清陽(yáng)性率為33.0%（DAT），雌性、2歲以上及小豬群的豬弓形蟲陽(yáng)性率較高［4］。2007年檢測(cè)荷蘭豬弓形蟲抗體陽(yáng)性率 為2.6% （ELISA），其中散養(yǎng)豬的陽(yáng)性率（33%）明顯高于農(nóng)場(chǎng)豬（4%）；2008年報(bào)道荷蘭3個(gè)豬場(chǎng)豬弓形蟲血清陽(yáng)性率為8% ～17%（ELISA），經(jīng)過為期4個(gè)月的捕鼠運(yùn)動(dòng)后，弓形蟲血清陽(yáng)性率下降至0～10%，提示控制鼠類可以降低豬的弓形蟲感染；Opsteegh M 等［5］研究發(fā)現(xiàn)荷蘭的野豬弓形蟲抗體陽(yáng)性率為24.4%（ELISA），隨年齡的增加而增高。拉脫維亞（Latvia）野豬弓形蟲抗體陽(yáng)性率（33.2%）明顯高于家豬（4.2%，ELISA），散養(yǎng)豬的陽(yáng)性率（6.2%）明顯高于豬場(chǎng)飼養(yǎng)的豬（0.4%），接觸野生動(dòng)物和外界環(huán)境的豬弓形蟲陽(yáng)性率明顯高于其他豬［6］。2004年報(bào)道德國(guó)Hesse地區(qū)母豬弓形蟲抗體陽(yáng)性率為19%（ELISA ＆IFAT），陽(yáng)性率與年齡相關(guān)。法國(guó)Corsica島野豬肉汁弓形蟲血清陽(yáng)性率為0.55%（MAT），與野豬年齡和生長(zhǎng)地區(qū)相關(guān)［7］；Beral M 等［8］報(bào)道法國(guó)野豬弓形蟲血清陽(yáng)性率為23%（MAT），與野貓存在及氣溫相關(guān)。瑞士家豬弓形蟲抗體陽(yáng)性率為23.3%（ELISA），隨年齡增加而增高，且高于10年前的陽(yáng)性率［9］。意大利西西里島豬弓形蟲抗體陽(yáng)性率為16.3%（ELISA），與豬年齡、養(yǎng)殖場(chǎng)規(guī)模（＜50頭）、飲用水安全及鼠類的控制等相關(guān)［10］；Veronesi F等［11］報(bào)道意大利豬弓形蟲IgG 陽(yáng)性率為16.14%（IFAT），與豬飼養(yǎng)條件及環(huán)境衛(wèi)生相關(guān)。葡萄牙北部豬弓形蟲血清陽(yáng)性率為9.8%（MAT），與年齡相關(guān)［12］。2005年報(bào)道西班牙野豬弓形蟲血清陽(yáng)性率為38.4%（MAT），南方地區(qū)野豬陽(yáng)性率較高；西班牙東北部豬弓形蟲血清陽(yáng)性率為19.0%（MAT），影響因素有豬年齡、斷奶期病死率、貓的出現(xiàn)和豬場(chǎng)的戶外設(shè)施等［13］；García-Bocanegra I等［14］報(bào)道西班牙豬弓形蟲血清陽(yáng)性率為16.6%（MAT），與豬年齡、鼠類控制及貓的出現(xiàn)等相關(guān)。羅馬尼亞家豬弓形蟲抗體陽(yáng)性率為23.1%（IFAT），野豬陽(yáng)性率為16%，與豬飼養(yǎng)環(huán)境相關(guān)［15］。

美國(guó)豬弓形蟲抗體陽(yáng)性率為2.6%（ELISA），與鼠類控制和動(dòng)物尸體的處理方式等相關(guān)［16］；美國(guó)北卡羅來(lái)納州野豬弓形蟲IgG陽(yáng)性率為27.7%（MAT），與豬的年齡相關(guān)［17］。墨西哥Durango州豬弓形蟲血清陽(yáng)性率為12.7%（MAT），本地豬的陽(yáng)性率（16.0%）高于外地豬（9.1%），雜種豬陽(yáng)性率（15.7%）高于純種豬（10.3%），陽(yáng)性率與豬的年齡、豬場(chǎng)管理及豬場(chǎng)所處的地理位置等相關(guān)［18］；美國(guó)Oaxaca州家豬弓形蟲血清陽(yáng)性率為17.2%（MAT），陽(yáng)性率與豬的年齡、性別、豬場(chǎng)地理位置、氣候和海拔高度等相關(guān)［19］。

巴西Toledo 地區(qū)的豬弓形蟲血清陽(yáng)性率為13.4%（MAT），與豬的食物及飲用水的衛(wèi)生、鼠類的控制及斷奶小豬的體重等相關(guān)［20］；該國(guó)Rio de Janeiro州北部豬弓形蟲抗體陽(yáng)性率為11.5%（ELISA），散養(yǎng)豬陽(yáng)性率為20.6%，而室內(nèi)飼養(yǎng)豬無(wú)一例陽(yáng)性，陽(yáng)性率與豬飼養(yǎng)環(huán)境相關(guān)［21］。2004年報(bào)道阿根廷母豬弓形蟲抗體陽(yáng)性率為37.8%（MAT），室內(nèi)農(nóng)場(chǎng)豬弓形蟲陽(yáng)性率為4.5%，而同期檢測(cè)室外農(nóng)場(chǎng)的豬陽(yáng)性率則高達(dá)40.5%，豬弓形蟲感染與飼養(yǎng)環(huán)境相關(guān)。

3 豬弓形蟲感染的基因型

日本Okinawa地區(qū)豬弓形蟲檢出率為56.4%（PCR），分離得到49個(gè)蟲株，RFLP分析（遺傳標(biāo)記：SAG2）揭示其中22株弓形蟲基因型為Ⅰ型，23株為Ⅱ型，4株為Ⅲ型［22］；該地區(qū)另一批豬的弓形蟲DNA 檢出率為36.3%（PCR），分離得到29個(gè)弓形蟲株，套式PCR，RFLP分析（遺傳標(biāo)記：GRA6），其中13株弓形蟲基因型為Ⅰ型，14株為Ⅱ型，其余2株為Ⅲ型［23］。

葡萄牙豬弓形蟲血清陽(yáng)性率為15.6%（MAT），接種、分離得到15 個(gè)分離株，PCR-RFLP（遺傳標(biāo)記：SAG2）分析揭示其中11株基因型為Ⅱ型，其余4株為Ⅲ型［24］。法國(guó)野豬弓形蟲血清陽(yáng)性率為17.6%（MAT），接種、分離得到21株弓形蟲，PCR-RFLP（遺傳標(biāo)記：SAG1、SAG2 和GRA7）揭示弓形蟲基因型為Ⅱ型［25］。

2008年Dubey等檢測(cè)美國(guó)馬里蘭豬弓形蟲抗體陽(yáng)性率分別為25%（ELISA）和71%（MAT），接種、分離得到14 個(gè)弓形蟲株，PCR-RFLP（遺傳標(biāo)記：SAG1、SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、c22-8、c29-2、L358、PK1和Apico）分析發(fā)現(xiàn)其中10株基因型為Ⅱ型，3株為Ⅲ型，1株為Ⅳ型；2012年檢測(cè)美國(guó)北部豬弓形蟲血清陽(yáng)性率為 91%（ELISA＆MAT），PCR-RFLP分析（遺傳標(biāo)記：SAG1、SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、c22-8、c29-2、L358、PK1 和Apico）揭示弓形蟲基因型為Ⅱ、Ⅲ型［26］。2007年報(bào)道巴西Erechim 地區(qū)豬弓形蟲DNA 檢出率分別為34%（豬舌）和66%（膈?。≒CR），RFLP分析（遺傳標(biāo)記：SAG2、BTUB、SAG3和GRA6）揭示弓形蟲基因型大部分為Ⅰ型，少部分為Ⅲ或Ⅱ／Ⅲ重組型；Bezerra R A等［27］報(bào)道巴西東北部地區(qū)豬弓形蟲基因型為TgPgBr 06、08、11、12、14和15等6個(gè)新型（PCR-RFLP，遺傳標(biāo)記：SAG1、SAG2、SAG3、BTUB、C22-8、PK1 和Apico）。

4 結(jié)語(yǔ)

豬是弓形蟲感染和傳播的重要宿主。豬年齡、性別、飼養(yǎng)條件、外界環(huán)境中貓、鼠類的存在等等多種因素都可影響豬的弓形蟲感染。日本、葡萄牙、法國(guó)和美國(guó)北部豬感染弓形蟲的基因型為全球廣泛分布的典型的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型，巴西東北部豬弓形蟲基因型為6個(gè)新型。各地的豬弓形蟲感染的基因型的研究結(jié)果印證了南美洲動(dòng)物感染的弓形蟲基因型的遺傳多態(tài)性共識(shí)。關(guān)于國(guó)內(nèi)動(dòng)物弓形蟲感染的基因型的研究始于2007年，國(guó)內(nèi)豬弓形蟲感染的基因型研究揭示多數(shù)分離株的基因型為ToxoDB＃9 型，少數(shù)為ToxoDB＃213 型、ToxoDB＃204 型或ToxoDB＃205型。ToxoDB＃9型為中國(guó)動(dòng)物的優(yōu)勢(shì)基因型，又稱Chinese Ⅰ型［28-29］。不同地區(qū)豬感染弓形蟲的風(fēng)險(xiǎn)因素、基因型各不相同，不同基因型弓形蟲致病性及藥物敏感性不同。因此，各地區(qū)應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)貙?shí)際情況制定相應(yīng)的養(yǎng)殖及動(dòng)物疾病檢疫措施，做好豬弓形蟲感染檢測(cè)及預(yù)防工作，加強(qiáng)對(duì)病豬肉管理和處理，以減少食品公共衛(wèi)生安全隱患，降低動(dòng)物和人弓形蟲感染和弓形蟲病的發(fā)生。

［1］Ajzenberg D，CognéN，Paris L，et al.Genotype of 86Toxoplasma gondiiisolates associated with human congenital toxoplasmosis，and correlation with clinical findings［J］.J Infect Dis，2002，186（5）：684-689.

［2］Meneceur P，Bouldouyre M A，Aubert D，et al.In vitrosusceptibility of various genotypic strains ofToxoplasma gondiito pyrimethamine，sulfadiazine，and atovaquone［J］.Antim A-gent Chem，2008，52（4）：1269-1277.

［3］Thiptara A，Kongkaew W，Bilmad U，et al.Toxoplasmosis in piglets［J］.Ann N Y Acad Sci，2006，1081：336-338.

［4］Jokelainen P，N?reaho A，H?lli O，et al.Farmed wild boars exposed toToxoplasma gondiiandTrichinellaspp［J］.Vet Parasitol，2012，187（1-2）：323-327.

［5］Opsteegh M，Swart A，F(xiàn)onville M，et al.Age-relatedToxoplasma gondiiseroprevalence in Dutch wild boar inconsistent with lifelong persistence of antibodies［J］.PLoS One，2011，6（1）：e16240.

［6］Deksne G，Kirju?ina M.Seroprevalence ofToxoplasma gondiiin domestic pigs（Sus scrofa domestica）and wild boars（Sus scrofa）in Latvia［J］.J Parasitol，2013，99（1）：44-47.

［7］Richomme C，Afonso E，Tolon V，et al.Seroprevalence and factors associated withToxoplasma gondiiinfection in wild boar（Sus scrofa）in a Mediterranean island［J］.Epidemiol Infect，2010，138（9）：1257-1266.

［8］Beral M，Rossi S，Aubert D，et al.Environmental factors associated with the seroprevalence ofToxoplasma gondiiin wild boars（Sus scrofa），F(xiàn)rance［J］.Ecohealth，2012，9（3）：303-309.

［9］Berger-Schoch A E，Bernet D，Doherr M G，et al.Toxoplasma gondiiin Switzerland：a serosurvey based on meat juice analysis of slaughtered pigs，wild boar，sheep and cattle［J］.Zoonoses Public Health，2011，58（7）：472-478.

［10］Villari S，Vesco G，Petersen E，et al.Risk factors for toxoplasmosis in pigs bred in Sicily，Southern Italy［J］.Vet Parasitol，2009，161（1-2）：1-8.

［11］Veronesi F，Ranucci D，Branciari R，et al.Seroprevalence and risk factors forToxoplasma gondiiinfection on finishing swine reared in the Umbria region，central Italy［J］.Zoonoses Public Health，2011，58（3）：178-184.

［12］Lopes A P，Dubey J P，Neto F，et al.Seroprevalence ofToxoplasma gondiiinfection in cattle，sheep，goats and pigs from the North of Portugal for human consumption［J］.Vet Parasitol，2013，193（1-3）：266-269.

［13］García-Bocanegra I，Dubey J P，Simon-GriféM，et al.Seroprevalence and risk factors associated withToxoplasma gondiiinfection in pig farms from Catalonia，north-eastern Spain［J］.Res Vet Sci，2010，89（1）：85-87.

［14］García-Bocanegra I，Simon-GriféM，Dubey J P，et al.Seroprevalence and risk factors associated withToxoplasma gondiiin domestic pigs from Spain［J］.Parasitol Int，2010，59（3）：421-426.

［15］Pa?tiu AI，Gyōrke A，Blaga R，et al.In Romania，exposure toToxoplasma gondiioccurs twice as often in swine raised for familial consumption as in hunted wild boar，but occurs rarely，if ever，among fattening pigs raised in confinement［J］.Parasitol Res，2013，112（6）：2403-2407.

［16］Hill DE，Haley C，Wagner B，et al.Seroprevalence of and risk factors forToxoplasma gondiiin the US swine herd using sera collected during the National Animal Health Monitoring Survey（Swine 2006）［J］.Zoonoses Public Health，2010，57（1）：53-59.

［17］Sandfoss M，De Perno C，Patton S，et al.Prevalence of antibody toToxoplasma gondiiandTrichinellaspp.in feral pigs（Sus scrofa）of eastern North Carolina［J］.J Wildl Dis.2011，47（2）：338-343.

［18］Alvarado-Esquivel C，García-Machado C，Alvarado-Esquivel D，et al.Seroprevalence ofToxoplasma gondiiinfection in domestic pigs in Durango State，Mexico［J］.J Parasitol.2011，97（4）：616-619.

［19］Alvarado-Esquivel C，Estrada-Malacón M A，Reyes-Hernández S O，et al.High prevalence ofToxoplasma gondiiantibodies in domestic pigs in Oaxaca State，Mexico［J］.J Parasitol，2012，98（6）：1248-1250.

［20］Piassa F R，de Araújo J B，da Rosa R C，et al.Prevalence and risk factors forToxoplasma gondiiinfection in certified and non-certified pig breeding farms in the Toledo microregion，PR，Brazil［J］.Rev Bras Parasitol Vet，2010，19（3）：152-156.

［21］Frazǎo-Teixeira E，de Oliveira F C.Anti-Toxoplasma gondiiantibodies in cattle and pigs in a highly endemic area for human toxoplasmosis in Brazil［J］.J Parasitol，2011，97（1）：44-47.

［22］Zakimi S，Kyan H，Oshiro M，et al.PCR-based discrimination ofToxoplasma gondiifrom pigs at an abattoir in Okinawa，Japan［J］.J Vet Med Sci，2006，68（4）：401-404.

［23］Zakimi S，Kyan H，Oshiro M，et al.Genetic characterization of GRA6genes fromToxoplasma gondiifrom pigs in Okinawa，Japan［J］.J Vet Med Sci，2006，68（10）：1105-1107.

［24］de Sousa S，Ajzenberg D，Canada N，et al.Biologic and molecular characterization ofToxoplasma gondiiisolates from pigs from Portugal［J］.Vet Parasitol，2006，135（2）：133-136.

［25］Richomme C，Aubert D，Gilot-Fromont E，et al.Genetic characterization ofToxoplasma gondiifrom wild boar（Sus scrofa）in France［J］.Vet Parasitol，2009，164（2-4）：296-300.

［26］Dubey J P，Hill D E，Rozeboom D W，et al.High prevalence and genotypes ofToxoplasma gondiiisolated from organic pigs in northern USA［J］.Vet Parasitol，2012，188（1-2）：14-18.

［27］Bezerra R A，Carvalho F S，Guimarǎes L A，et al.Genetic characterization ofToxoplasma gondiiisolates from pigs intended for human consumption in Brazil［J］.Vet Parasitol，2012，189（2-4）：153-161.

［28］Zhou P，Sun X T，Yin C C，et al.Genetic characterization ofToxoplasma gondiiisolates from pigs in southwestern China［J］.J Parasitol，2011，97（6）：1193-1195.

［29］Wang L，Chen H，Liu D，et al.Genotypes and mouse virulence ofToxoplasma gondiiisolates from animals and humans in China［J］.PLoS One，2013，8（1）：e53483.