蒼術(shù)麩炒后增量成分研究

劉佳鑫 李古月 才謙

1.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，遼寧沈陽(yáng)110000；2.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，遼寧沈陽(yáng)110000；3.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧大連116600

蒼術(shù)麩炒后增量成分研究

劉佳鑫1，2李古月1，2才謙3

1.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，遼寧沈陽(yáng)110000；2.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，遼寧沈陽(yáng)110000；3.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧大連116600

目的明確蒼術(shù)麩炒后的增量成分并建立該成分的含量測(cè)定方法。方法采用高效液相色譜法對(duì)生蒼術(shù)和麩炒蒼術(shù)的色譜圖進(jìn)行比較，并與對(duì)照品進(jìn)行比對(duì)，確定麩炒后的增量成分；增量成分的含量測(cè)定采用高效液相色譜法，色譜條件為Tigerkin C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）色譜柱；流動(dòng)相為乙腈-水（5∶95）；檢測(cè)波長(zhǎng)為284 nm；柱溫為25℃；流速為1.0 mL/min。結(jié)果5-羥甲基糠醛是蒼術(shù)麩炒后的主要增量成分；測(cè)定了14個(gè)不同地區(qū)市售蒼術(shù)片及自制的麩炒蒼術(shù)片中5-羥甲基糠醛的含量，發(fā)現(xiàn)麩炒蒼術(shù)中該成分的量高于生蒼術(shù)片2倍以上。結(jié)論麩炒導(dǎo)致蒼術(shù)中5-羥甲基糠醛的含量增加。

蒼術(shù)；麩炒；5-羥甲基糠醛；含量測(cè)定

蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodeslancea（Thunb.）DC.或北蒼術(shù)Atractylodes Chinensis（DC.）koidz.的干燥根莖。性溫，味辛、苦，歸脾、胃、肝經(jīng)。具有燥濕健脾、祛風(fēng)散寒之功效，用于脘腹脹滿、泄瀉、水腫、腳氣、痿風(fēng)濕痹痛、風(fēng)寒感冒、夜盲等癥[1]?！吨袊?guó)藥典》（2010年版）收載有生蒼術(shù)和麩炒蒼術(shù)。蒼術(shù)中含有5%～9%的揮發(fā)油，由一系列的倍半萜、聚乙烯炔類及少量的酚類、有機(jī)酸類成分組成；非揮發(fā)性成分主要有氨基酸多炔類化合物倍半萜糖苷等水溶性成分以及少量糠醛[2-4]。文獻(xiàn)報(bào)道，由于麥麩的吸附作用導(dǎo)致蒼術(shù)麩炒后揮發(fā)油的含量下降[5]，揮發(fā)油中的聚乙烯炔類成分和倍半萜類成分的含量也有所下降[6]；除揮發(fā)性成分外，有文獻(xiàn)報(bào)道蒼術(shù)中的多糖類成分在麩炒后含量也下降[7]。根據(jù)蒼術(shù)麩炒后健脾作用增強(qiáng)這一傳統(tǒng)理論[8]，筆者推測(cè)蒼術(shù)麩炒后某些成分的含量應(yīng)該有所增加。本文通過對(duì)比蒼術(shù)麩炒前后的高效液相圖譜，明確了蒼術(shù)麩炒后的增量成分為5-羥甲基糠醛，并采用高效液相色譜法建立了麩炒前后5-羥甲基糠醛的含量測(cè)定方法，采用此方法測(cè)定了14個(gè)不同來源的生蒼術(shù)和自行炮制的麩炒蒼術(shù)中5-羥甲基糠醛的含量，初步明確蒼術(shù)麩炒后增量成分的含量變化情況。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100series高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司）；Tigerkin C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）色譜柱（大連思普精工有限公司）；KH-300B型超聲清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；sartoriusCP225D型電子天平（十萬分之一，德國(guó)sartorius公司）。

1.2 試藥

5-羥甲基糠醛對(duì)照品，購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司，經(jīng)液相色譜用歸一化法測(cè)定，純度均大于98%。蒼術(shù)藥材或飲片購(gòu)自全國(guó)14個(gè)地區(qū)，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物教研室王冰教授鑒定為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodes lancea（Thunb.）DC.或北蒼術(shù)Atractylodes Chinensis（DC.）koidz.。麩炒品按《中國(guó)藥典》(2010年版)麩炒方法自行炮制。乙腈（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 蒼術(shù)麩炒后增量成分研究的方法和結(jié)果

2.1.1 色譜條件Tigerkin C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，流動(dòng)相（乙腈-0.25%磷酸水）梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為257 nm，柱溫25℃，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量10 μL，按表1梯度進(jìn)行洗脫。

2.1.2 生蒼術(shù)和麩炒蒼術(shù)供試品溶液的制備分別取

生蒼術(shù)和麩炒蒼術(shù)飲片粉碎過篩（60目），各精密稱取2.0 g，置于250 mL圓底燒瓶中，加入80 mL水，加熱回流提取2 h，過濾，濃縮濾液，再用石油醚（60～90℃）連續(xù)萃取兩次，棄去石油醚層，濃縮水層定容至5 mL容量瓶中，過0.22 μm微孔水膜，備用。

2.1.3 5-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液的制備取5-羥甲基糠醛對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.01 mg的溶液，即得。

表1 二元梯度洗脫表

圖1 生蒼術(shù)和麩炒蒼術(shù)供試品溶液高效液相色譜圖（波長(zhǎng)=257 nm）

2.1.4 結(jié)果生蒼術(shù)和麩炒蒼術(shù)供試品溶液的高效液相色譜見圖1。由生蒼術(shù)和麩炒蒼術(shù)的高效液相色譜圖對(duì)比結(jié)果可知，麩炒后保留時(shí)間約為21 min的色譜峰的峰面積明顯增加，推測(cè)其為蒼術(shù)麩炒后的增量成分。

圖2 麩炒蒼術(shù)色譜峰紫外吸收?qǐng)D（保留時(shí)間為21 min）

筆者進(jìn)一步采用DAD檢測(cè)器測(cè)定保留時(shí)間為21 min色譜峰的紫外圖譜，見圖2。從圖2中可以看出該吸收峰的最大吸收波長(zhǎng)是284 nm，在230 nm也有吸收峰，根據(jù)該化合物吸收峰所在的波長(zhǎng)和兩個(gè)吸收峰強(qiáng)度之間關(guān)系，推測(cè)此紫外圖譜所對(duì)應(yīng)的化合物可能是5-羥甲基糠醛。

為證實(shí)21 min的吸收峰對(duì)應(yīng)的化合物就是5-羥甲基糠醛，按上述色譜條件，將蒼術(shù)供試品溶液和5-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液各進(jìn)樣10 μL，得液相色譜圖。見圖3、4。從圖3和圖4可以看出，5-羥甲基糠醛對(duì)照品的保留時(shí)間就是21 min，與蒼術(shù)麩炒后含量增加較大的色譜峰的保留時(shí)間一致，因此確定5-羥甲基糠醛為蒼術(shù)麩炒后增量成分。

圖3 蒼術(shù)供試品的高效液相色譜圖

圖4 5-羥甲基糠醛對(duì)照品的高效液相色譜圖

圖6 供試品的高效液相色譜圖

2.2 5-羥甲基糠醛含量測(cè)定的方法和結(jié)果

2.2.1 色譜條件Tigerkin C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；流動(dòng)相為乙腈-水（5∶95）；檢測(cè)波長(zhǎng)為284 nm；柱溫為25℃；流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣量為10 μL。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取5-羥甲基糠醛對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.01 mg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備取本品粉末（過60目篩）約0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇溶液10 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W，頻率50 KHz），放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，定容至25 mL棕色量瓶中，過0.45 μm微孔濾膜即得。譜圖見圖5、6。

圖5 5-羥甲基糠醛對(duì)照品的高效液相色譜圖

2.2.4 線性關(guān)系考察精密吸取5-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為0.0091 mg/mL）2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 μL注入高效液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=5924.8X+3.7667，r=0.9991，提示5-羥甲基糠醛在0.0182～0.1092 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn)取同一供試品溶液（產(chǎn)地：湖北衡陽(yáng)），連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，測(cè)得5-羥甲基糠醛峰面積的RSD為1.9%，表明該方法的精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液（產(chǎn)地：湖北衡陽(yáng)），分別于0、2、4、8、12、48 h進(jìn)樣，測(cè)得5-羥甲基糠醛色譜峰面積的RSD為2.5%，表明該供試品溶液在配制后48 h內(nèi)測(cè)定，穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)取本品（產(chǎn)地：湖北衡陽(yáng)），精密稱定，共6份。按前述方法測(cè)定5-羥甲基糠醛的含量，結(jié)果平均含有量為0.011%，RSD為2.9%，重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn)精密稱取本品（產(chǎn)地：湖北衡陽(yáng)，5-羥甲基糠醛含有量為0.011%）0.25 g，共6份，加入質(zhì)量濃度為0.0091 mg/mL的5-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液3 mL，按前述方法制備和測(cè)定。測(cè)定結(jié)果提示：本方法回收率在98.3%～99.8%之間，RSD為2.1%，符合有關(guān)規(guī)定。

2.2.9樣品測(cè)定結(jié)果分別測(cè)定了14個(gè)地區(qū)生蒼術(shù)片及自制的麩炒蒼術(shù)片中5-羥甲基糠醛的含量，結(jié)果見表2。

表2 生蒼術(shù)和麩炒蒼術(shù)中5-羥甲基糠醛含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

3 討論

3.1 蒼術(shù)麩炒前后5-羥甲基糠醛的含量變化情況

本文在通過高效液相色譜法對(duì)比生蒼術(shù)和麩炒蒼術(shù)的色譜圖，并與對(duì)照品進(jìn)行比對(duì)，確定了蒼術(shù)麩炒后5-羥甲基糠醛的含量增加較大，是蒼術(shù)麩炒的主要增量成分之一。在此基礎(chǔ)上，建立生蒼術(shù)和麩炒蒼術(shù)中5-羥甲基糠醛的含量測(cè)定方法，通過測(cè)定不同地區(qū)收集的生蒼術(shù)和自行炮制的麩炒蒼術(shù)中5-羥甲基糠醛的含量可以看出，雖然不同地區(qū)的蒼術(shù)中5-羥甲基糠醛的含量有差異，但麩炒后5-羥甲基糠醛的含量均有所增加[9-11]。

3.2 5-羥甲基糠醛含量增加的原因

結(jié)合蒼術(shù)麩炒前后多糖的含量下降的測(cè)定結(jié)果，分析5-羥甲基糠醛含量增加的原因可能是蒼術(shù)在麩炒加熱過程中所含有的糖類成分和氨基酸發(fā)生了Maillard反應(yīng)[12-13]，導(dǎo)致該反應(yīng)的產(chǎn)物之一5-羥甲基糠醛的含量增加。

3.3 5-羥甲基糠醛的藥理作用

5-羥甲基糠醛是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產(chǎn)生的一個(gè)醛類化合物，一般經(jīng)炮制或加熱后含量會(huì)升高?，F(xiàn)階段對(duì)于5-羥甲基糠醛探討存在著很大的爭(zhēng)論。有報(bào)道稱該化合物對(duì)人體橫紋肌和內(nèi)臟有毒副作用等。但近年來有研究發(fā)現(xiàn)，5-羥甲基糠醛具有抗氧化、抗心肌缺血、Ca2+拮抗活性以及改善血液流變學(xué)等對(duì)人體有益的作用[14-15]。本文發(fā)現(xiàn)蒼術(shù)麩炒后5-羥甲基糠醛的含量增加，但其是否是蒼術(shù)麩炒后健脾作用增強(qiáng)的原因還需進(jìn)行進(jìn)一步的研究。

3.4 檢測(cè)波長(zhǎng)和洗脫方式的確定

本文在進(jìn)行生蒼術(shù)和麩炒蒼術(shù)高效液相色譜圖比較時(shí)，發(fā)現(xiàn)波長(zhǎng)為257 nm時(shí)色譜峰較多，故采用此波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。同時(shí)為使各色譜峰較好地分離，流動(dòng)相采用梯度洗脫的方式；而在進(jìn)行5-羥甲基糠醛的含量測(cè)定時(shí)，則采用該化合物的最大吸收波長(zhǎng)284 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，同時(shí)為了操作簡(jiǎn)便，在保證5-羥甲基糠醛良好分離度的前提下，流動(dòng)相采用等度洗脫的方式。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：150-151.

[2]關(guān)穎麗.蒼術(shù)化學(xué)成分的現(xiàn)代研究進(jìn)展[J].人參研究，2007，（1）：28-33.

[3]歐陽(yáng)臻，江濤濤，繆亞東，等.蒼術(shù)的化學(xué)成分、道地性和藥理活性研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，10（17）：1936-1938.

[4]李霞，王金輝，李銑，等.北蒼術(shù)化學(xué)成分的研究[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，9（3）：178.

[5]王愛武，田景奎，耿暉，等.蒼術(shù)炒制前后揮發(fā)油成分的研究[J].華西藥學(xué)雜志，2004，19（6）：417-418.

[6]劉玉強(qiáng)，才謙，賈天柱.麩炒前后蒼術(shù)中3種成分的HPLC測(cè)定[J].中成藥，2013，35（1）：131-135.

[7]霍巖，劉玉強(qiáng)，才謙.不同來源的蒼術(shù)麩炒前后多糖的含量測(cè)定[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（9）：96-98.

[8]樸盛樹，樸鐘旭，原思通.中藥蒼術(shù)炮制歷史沿革研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2000，35（6）：87.

[9]傅春升，王琰，李玥，等.黃柏-蒼術(shù)藥對(duì)不同比例配伍中生物堿含量的變化[J].中國(guó)藥房，2013，24（27）：2549-2551.

[10]王慶慶，龐謙，趙明，等.茅蒼術(shù)水提液及其不同極性部位對(duì)幽門螺桿菌的體外抑制作用研究[J].中國(guó)藥房，2012，23（43）：4042-4044.

[11]刁繼紅，楊紹群，劉爽，等.關(guān)蒼術(shù)HPLC指紋圖譜研究及白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和Ⅲ的含量分析[J].中國(guó)藥房，2012，23（39）：3714-3717.

[12]劉振麗，巢志茂.何首烏炮制后化學(xué)成分的變化及中藥中的Maillard反應(yīng)[D].北京：中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院，2006.

[13]魏征，曹玉娜，曾林燕.Maillard反應(yīng)產(chǎn)物的提取、分離及分析方法研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2013，24（23）：2194-2196

[14]傅紫琴，王明艷，蔡寶昌.5-羥甲基糠醛（5-HMF）在中藥中的研究現(xiàn)狀探討[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2008，26（3）：508-510

[15]趙玲，張?zhí)m，李雅莉，等.5-羥甲基糠醛對(duì)腦缺血再灌注模型小鼠學(xué)習(xí)記憶及腦部自由基的影響[J].中國(guó)藥房，2007，18（13）：974-976.

Study on the incremental composition in Atractylodis Rhizoma after being stir-fried with wheat bran

LIU Jiaxin1,2LI Guyue1,2CAI Qian31.The First Affiliated Hospital of China Medical University,Liaoning Province,Shenyang110000,China;2.Pharmacy College of China Medical University,Liaoning Province,Shenyang110000,China;3.Pharmacy College of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Liaoning Province,Dalian116600,China

Objective To clarify the incremental composition in Atractylodis Rhizoma after being stir-fried with wheatbran and establish the methods of determining the content of 5-HMF in crude and processed Atractylodis Rhizoma. Methods By comparing the HPLC chromatography of crude and processed Atractylodis Rhizoma,the incremental composition was clear.The content determination was carried out using a Tigerkin C18column(5 μm,4.6 mm×250 mm)with the mobile phase of acetonitrile-water(5∶95).The detection wavelength was set at 284 nm.Column temperature was maintained at 25℃.Flow rate was 1.0 mL/min.Results 5-HMF was the incremental composition;the contents of 5-HMF in crude and processed Atractylodis Rhizoma collected from different regions were determined and the contents of 5-HMF in processed Atractylodis Rhizoma were higher over two times than crude ones.Conclusion Processing Atractylodis Rhizoma with wheat bran can increase the content of 5-HMF.

Atractylodis Rhizoma;Process with wheat bran;5-HMF;Content determination

R284.1

A

1673-7210（2014）02（b）-0105-04

2013-09-25本文編輯：衛(wèi)軻）

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（編號(hào)81202919）；國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(xiàng)項(xiàng)目（編號(hào)201107 00712）。