CYP11B2基因第2內(nèi)含子轉(zhuǎn)位與醛固酮瘤發(fā)病的關(guān)系

[摘要] 目的 探討醛固酮瘤CYP11B2基因第2內(nèi)含子（intron 2）轉(zhuǎn)位與醛固酮瘤患者發(fā)病之間的關(guān)系。 方法 應(yīng)用PCR檢測(cè)醛固酮瘤（66例）、醛固酮瘤腫瘤旁腺瘤組織（38例）和正常腎上腺組織（14例）CYP11B2基因intron 2多態(tài)性（野生型/轉(zhuǎn)位型）。 結(jié)果 在醛固酮瘤CYP11B2基因intron 2轉(zhuǎn)位發(fā)生率為31.81%，醛固酮瘤腫瘤旁腺瘤組織為20.05%，正常腎上腺組織為14.29%，三者之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論 醛固酮瘤CYP11B2基因intron 2轉(zhuǎn)位與醛固酮瘤的發(fā)生無顯著關(guān)聯(lián)。

[關(guān)鍵詞] CYP11B2；intron 2轉(zhuǎn)位；醛固酮瘤

[中圖分類號(hào)] R736.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2014）05-0129-02

醛固酮瘤是原發(fā)醛固酮增多癥中最常見的一種，共同的特點(diǎn)是醛固酮的自主分泌及腎素被抑制。醛固酮的自主分泌是人們研究的熱點(diǎn)，人們已從基因水平上展開研究，CYP11B2基因的改變可能導(dǎo)致醛固酮瘤的發(fā)生，CYP11B2基因intron 2常常與CYP11B1基因intron 2發(fā)生轉(zhuǎn)位，本實(shí)驗(yàn)就是研究CYP11B2基因intron 2轉(zhuǎn)位與醛固酮瘤發(fā)病之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

2006年5月～2007年11月在武漢同濟(jì)醫(yī)院行手術(shù)切除并有病理證實(shí)為醛固酮瘤患者腺瘤標(biāo)本66例，醛固酮瘤腫瘤旁腺瘤組織38例和正常腎上腺組織（取自腎癌患者腎上腺）14例，-80℃保存。其中醛固酮瘤患者腺瘤標(biāo)本女30例，男36例，年齡16～72歲。腫瘤組織全部取自腺瘤中央部分，每個(gè)標(biāo)本組織重約25 mg。

1.2 DNA提取

用DNeasy試劑盒（德國(guó)Qiagen公司）按照說明提取DNA，用比色法檢測(cè)其濃度，-20℃保存。

1.3 PCR檢測(cè)

Intron 2野生型和轉(zhuǎn)位型基因多態(tài)性檢測(cè)采用2個(gè)獨(dú)立的PCR反應(yīng)。引物均由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成，野生型基因上游引物5TGGAGAAAAGCCCTACCCTGT-3，下游引物5-AGGAACCTCTGCACGGCC-3；轉(zhuǎn)位型基因上游引物5-CAGAAAATCCCTCCCCCCTA-3，下游引物5-AGGAACCTCTGCACGGCC-3。PCR反應(yīng)體系25 μL，按照反應(yīng)體系：Taq酶master mix 12.5 μL，DNA 1 μg，primer 2 μL加水至25 μL。按反應(yīng)條件94℃ 30 s，62℃ 15 s，72℃ 22 s，30個(gè)循環(huán)，72℃延伸5 min擴(kuò)增目的片段。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠及130 V電壓持續(xù)電泳30 min，紫外燈下觀察電泳帶，擴(kuò)增片段大小約為418 bp。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

PCR結(jié)果：野生型和轉(zhuǎn)位型擴(kuò)增片段大小均為418 bp，在Marker的400～500 bp之間靠近400 bp處可見擴(kuò)增片段，只有野生型片段者為WW型，只有轉(zhuǎn)位型片段者為CC型，野生型和轉(zhuǎn)位型片段均有則為WC型。PCR結(jié)果如圖1。

圖1 PCR結(jié)果（C為轉(zhuǎn)位型，W為野生型）

醛固酮瘤患者66例，WW型45例，WC型18例，CC型3例。醛固酮瘤腫瘤旁腺瘤組織38例中WW型30例，WC型8例，CC型0例；正常腎上腺組織（14例）WW型12例，WC型2例，CC型0例。在醛固酮瘤CYP11B2基因intron 2轉(zhuǎn)位發(fā)生率為31.81%，醛固酮瘤腫瘤旁腺瘤組織為20.05%，正常腎上腺組織為14.29%，醛固酮瘤與醛固酮瘤腫瘤旁腺瘤χ2=1.808，醛固酮瘤與正常組織χ2=0.983；醛固酮瘤腫瘤旁腺瘤與正常組織χ2=0.008，P均>0.05。

3 討論

原發(fā)性醛固酮增多癥（簡(jiǎn)稱原醛）是指由于腎上腺皮質(zhì)分泌過多的醛固酮而引起潴鈉排鉀，血容量增多而抑制了腎素活性的一種病癥，臨床表現(xiàn)為高血壓和低血鉀綜合征群，腎上腺醛固酮瘤（APA，又稱Conn綜合征）是其最常見一種。醛固酮在球狀帶由醛固酮合成酶催化合成，研究發(fā)現(xiàn)醛固酮合成酶基因mRNA在醛固酮瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)[1]。醛固酮合成酶基因的改變可能引起其mRNA在醛固酮瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)。11B羥化酶在束狀帶催化合成皮質(zhì)醇。但是實(shí)驗(yàn)中我們?cè)谌┕掏鲋幸舶l(fā)現(xiàn)了CYP11B1基因的表達(dá)[1]。說明皮質(zhì)醇合成酶在醛固酮合成過程中可能有一定的作用，并且CYP11B1和CYP11B2基因常常發(fā)生聯(lián)系。

有人對(duì)醛固酮瘤組織中和外周血中CYP11B2基因進(jìn)行測(cè)序并沒有發(fā)現(xiàn)在這些基因編碼區(qū)有突變的地方[2]，mRNA是由DNA經(jīng)hnRNA剪接而成，基因表達(dá)時(shí)，其外顯子和內(nèi)含子均轉(zhuǎn)錄到hnRNA，hnRNA在移出細(xì)胞核前將內(nèi)含子等部分剪除轉(zhuǎn)變?yōu)閙RNA?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)含子可影響基因的表達(dá)，也可以增加mRNA的穩(wěn)定性。內(nèi)含子在基因表達(dá)中的作用愈來愈受到人們重視。

CYP11B1和CYP11B2基因位于同一基因，相距很近，高度同源，二者的第二位內(nèi)含子常常發(fā)生轉(zhuǎn)位。CYP11B1基因的二號(hào)內(nèi)含子轉(zhuǎn)位到CYP11B2基因的第二內(nèi)含子上，可能會(huì)引起CYP11B2基因轉(zhuǎn)錄發(fā)生變化，但是具體還不清楚。不是每個(gè)醛固酮瘤患者CYP11B1基因的二號(hào)內(nèi)含子轉(zhuǎn)位都到CYP11B2基因的第二內(nèi)含子上，其發(fā)生率報(bào)道不一，Inglis[3]研究了27例APA中intron 2多態(tài)性在原醛和正常人群中的差異，發(fā)現(xiàn)intron 2轉(zhuǎn)位型基因（約70%）明顯高于正常。Jerome等[4]在高血壓患者中研究發(fā)現(xiàn)在高ARR值[>145 mol/（L·ng）]患者中intron 2轉(zhuǎn)位型基因明顯高與低ARR值患者。但是在我們的實(shí)驗(yàn)中并未發(fā)現(xiàn)APA患者intron 2轉(zhuǎn)位型基因高于正常人，它也與腺瘤旁腎上腺組織無明顯差別，這種結(jié)果差別也可能與人種或研究數(shù)量有關(guān)。在正常人群中也發(fā)現(xiàn)CYP11B2基因intron 2轉(zhuǎn)位，說明CYP11B2基因intron 2轉(zhuǎn)位與CYP11B2基因mRNA高表達(dá)并無必然直接聯(lián)系。CYP11B2基因intron 2轉(zhuǎn)位與其啟動(dòng)子區(qū)-344T/C位點(diǎn)存在連鎖不平衡性。Inglis[3]發(fā)現(xiàn)APA中CYP11B2基因intron 2轉(zhuǎn)位與其啟動(dòng)子區(qū)-344T/C位點(diǎn)有顯著連鎖不平衡性（P < 0.01），Jerome等[4]報(bào)道在高血壓并高ARR患者中CYP11B2基因intron 2轉(zhuǎn)位與其啟動(dòng)子區(qū)-344T/C位點(diǎn)有顯著連鎖不平衡性（P < 0.01）。不排除CYP11B2基因intron 2轉(zhuǎn)位是通過與其有連鎖不平衡性位點(diǎn)即啟動(dòng)子區(qū)-344T/C位點(diǎn)起作用。但是現(xiàn)在關(guān)于-344T/C位點(diǎn)報(bào)道結(jié)果也不一致。我們發(fā)現(xiàn)C等位點(diǎn)與醛固酮瘤患者高醛固酮血癥有關(guān)[5]。有人則認(rèn)為T等位點(diǎn)與高醛固酮血癥有關(guān)[6]；也有人認(rèn)為CYP11B2基因啟動(dòng)區(qū)-344T/C等位點(diǎn)C/T沒有顯著性差別[7]。

所以，雖然CYP11B2基因intron 2轉(zhuǎn)位是CYP11B2基因上常見突變，但是本研究發(fā)現(xiàn)其與APA患者血中高醛固酮無顯著關(guān)聯(lián)。

[參考文獻(xiàn)]

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[5] 鄧西元，張旭. 醛固酮瘤CYP11B2基因C-344T位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與其發(fā)病關(guān)系[J]. 現(xiàn)代泌尿外科雜志，2010， 15（5）：336-337，372.

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（收稿日期：2013-11-18）