Zn2+、Mn7+對(duì)刺參幼參的急性毒性及富集作用研究

李 斌，馬元慶，邢紅艷，靳 洋，劉愛英，白艷艷，孫 珊，張 娟，何 鑫

（山東省海洋水產(chǎn)研究所，山東省海洋生態(tài)修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東煙臺(tái) 264006）

Zn2+、Mn7+對(duì)刺參幼參的急性毒性及富集作用研究

李 斌，馬元慶，邢紅艷，靳 洋，劉愛英，白艷艷，孫 珊，張 娟，何 鑫

（山東省海洋水產(chǎn)研究所，山東省海洋生態(tài)修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東煙臺(tái) 264006）

在靜水條件下，研究了Zn2+、Mn7+兩種重金屬離子對(duì)刺參幼參行為及其存活狀況的影響，并分析了其在幼參體內(nèi)的富集狀況。結(jié)果表明：Zn2+、Mn7+單獨(dú)處理時(shí)，幼參在Zn2+濃度低于0.4 mg/L或Mn7+濃度低于0.5 mg/L條件下暴露96 h后死亡率均為0.0%，表明在此對(duì)應(yīng)濃度范圍內(nèi)兩種金屬離子均無(wú)明顯的急性毒性作用；隨濃度和暴露時(shí)間增加，幼參死亡率明顯升高，其附壁率呈降低趨勢(shì)。Zn2+對(duì)幼參的24、48、72 h的半致死濃度LC50分別為49.70、1.35、0.82 mg/L，安全濃度（SC）為0.14 mg/L；Mn7+對(duì)幼參的48、72、96 h的半致死濃度LC50分別為31.61、4.24、3.13 mg/L，SC為3.16 mg/L。因此，Zn2+對(duì)幼參的急性毒性作用強(qiáng)于Mn7+。隨著水體中Zn2+與Mn7+濃度的增加，幼參體內(nèi)重金屬元素含量和累積速率總體呈升高趨勢(shì)，而富集系數(shù)呈降低趨勢(shì)，Zn2+的富集作用強(qiáng)于Mn7+。

刺參；Zn2+；Mn7+；急性毒性；富集作用

刺參Apostichopus japonicas Selenka，屬棘皮動(dòng)物門海參綱Holothurioidea，以海底藻類和浮游生物為食。近年來，刺參在我國(guó)北方沿海的人工養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大。然而，由于養(yǎng)殖布局不合理，養(yǎng)殖密度過大以及盲目用藥等使得水環(huán)境負(fù)荷增加[1-3]；近岸水域重金屬污染對(duì)養(yǎng)殖生物的生存環(huán)境造成了較大影響[4]，影響刺參的養(yǎng)殖生產(chǎn)。與其他污染物相比，海洋生物對(duì)Zn(II)的富集能力很強(qiáng)，會(huì)長(zhǎng)期殘存在生物體內(nèi)[5-8]，海水中Zn(II)濃度過高會(huì)對(duì)生物產(chǎn)生一定的毒害作用，影響其生長(zhǎng)和存活；金屬鹽類消毒劑高錳酸鉀在苗種培育和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中應(yīng)用廣泛，其強(qiáng)氧化性對(duì)草魚Ctenopharyngodon idllus[9]、南美白對(duì)蝦Penaeus vannamei[10]等養(yǎng)殖生物都具有一定毒性作用。在以往的研究中，有關(guān)重金屬對(duì)海洋經(jīng)濟(jì)動(dòng)物毒性作用的研究對(duì)象往往以魚蝦類居多[11-14]，對(duì)刺參幼參的毒性作用研究報(bào)道并不多[4,15]尤其是Zn2+、Mn7+對(duì)幼參的聯(lián)合毒性作用及其在幼參體內(nèi)的富集。本文研究了+2價(jià)鋅和+7價(jià)錳兩種海水中常見的重金屬對(duì)刺參幼參的急性毒性作用，并對(duì)其在刺參幼參體內(nèi)的累積與富集狀況進(jìn)行了比較，旨在為評(píng)價(jià)刺參養(yǎng)殖環(huán)境和保護(hù)刺參資源提供科學(xué)依據(jù)，對(duì)改善養(yǎng)殖水環(huán)境、維持養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要的意義。

1 材料與方法

1.1 供試動(dòng)物

試驗(yàn)用幼參取自煙臺(tái)海益苗業(yè)有限公司，為人工繁殖培育的5個(gè)月齡的幼參，個(gè)體體重為0.48±0.12 g。室內(nèi)水泥池中暫養(yǎng)3 d后用于試驗(yàn)。每日全量換水，適量投喂配合飼料。試驗(yàn)時(shí)選擇刺突明顯、無(wú)化皮、無(wú)外傷、伸展自如的幼參隨機(jī)分組。

1.2 試劑與海水

試驗(yàn)用硫酸鋅(ZnSO4·7H2O)、高錳酸鉀(KMnO4)均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭扔贸兯涑珊琙n2+和Mn7+分別為5 g/L和10 g/L的母液(以元素計(jì))，試驗(yàn)時(shí)稀釋成所需要的各濃度。對(duì)照組不加試劑，其他條件與處理組相同。試驗(yàn)用海水取自煙臺(tái)海益苗業(yè)有限公司，pH為7.9～8.1，鹽度范圍為33.6～34.6。

1.3 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)設(shè)Zn2+、Mn7+濃度試驗(yàn)組各6個(gè)和1個(gè)空白對(duì)照組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)。Zn2+：0.2、0.4、0.8、1.0、2.5、5.0 mg/L；Mn7+：0.1、0.5、1.5、3.0、5.0、6.5 mg/L；聯(lián)合毒性效應(yīng)試驗(yàn)各組中Zn2+濃度設(shè)定為0.4 mg/L，將其混合添加到上述6個(gè)濃度梯度的Mn7+試驗(yàn)水體中。試驗(yàn)采用96 h靜水實(shí)驗(yàn)法。試驗(yàn)容器為2 000 mL的玻璃燒杯，每個(gè)燒杯中放30只幼參。試驗(yàn)期間不投喂餌料、不充氧，水溫為19.5～20.3℃，每隔24 h全量換水1次，換水后將各燒杯中的試劑調(diào)整到原始濃度。觀察記錄幼參暴露24 h、48 h、72 h和96 h的活動(dòng)狀況和附著在燒杯壁的個(gè)體數(shù)，計(jì)算附壁率；隨時(shí)取出死亡個(gè)體，并記錄各組的死亡個(gè)體數(shù)，計(jì)算死亡率。96 h，取低濃度組水樣及存活的幼參個(gè)體測(cè)定其中的Zn2+、Mn7+含量，方法均采用原子吸收分光光度法。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)組取平行樣結(jié)果的值計(jì)算死亡率和附壁率，按公式P=（p′-C）/（100-C）進(jìn)行校正，式中：p′為試驗(yàn)組取雙樣平行結(jié)果的均值計(jì)算的死亡百分?jǐn)?shù)，C為空白組死亡百分?jǐn)?shù)，P為經(jīng)校正后的試驗(yàn)組的死亡率；附壁率（AR）用以評(píng)價(jià)幼參的附著與活動(dòng)能力，其計(jì)算公式為AR=100%×NA/30，式中：NA為附著在杯壁上的幼參個(gè)體數(shù)。

采用SPSS17.0作回歸分析和顯著性分析，并求得濃度-死亡率直線回歸方程；采用概率單位法，根據(jù)死亡百分?jǐn)?shù)-概率單位換算表，將死亡百分?jǐn)?shù)換算成死亡概率單位，分別求出各種重金屬對(duì)幼參48 h、72 h、96 h的半致死濃度（LC50）及其95%置信區(qū)間，并計(jì)算安全濃度(SC)，SC=48 h LC50×0.1[16]。

重金屬的富集系數(shù)（BCF）和累積速率（RA）[17]的計(jì)算公式分別為：BCF=(Ce-Ci)/Cs，其中，Ce為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)幼參體內(nèi)的重金屬的含量，Ci為試驗(yàn)開始前幼參中重金屬的背景值，Cs指水體中重金屬的試驗(yàn)濃度；RA=(Ce-Ci)/t，t為暴露時(shí)間。

2 結(jié)果與討論

2.1 Zn2+對(duì)幼參的急性毒性分析

從幼參的附壁率上可以看出，對(duì)照組高于試驗(yàn)組；隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，附壁率呈先升高后降低的趨勢(shì)，在0.4 mg/L濃度組附壁率值其他濃度組高（P＜0.01），在96 h時(shí)附壁率達(dá)到最低；對(duì)比各處理濃度下，空白對(duì)照組附壁率值最大，濃度高于2.5 mg/L處理時(shí)間超過24 h時(shí)，附壁率將為0.0%，表現(xiàn)出對(duì)幼參活動(dòng)能力的抑制作用（圖1）。

圖1 Zn2+對(duì)幼參附壁率的影響Fig.1 Effect of Zn2+on adhesion rate in A.japonicas

圖2 Zn2+對(duì)幼參死亡率的影響Fig.2 Effect of Zn2+on mortality rate in A.japonicas

圖2為Zn2+對(duì)幼參死亡率的影響，可以看出：對(duì)照組、0.2 mg/L和0.4 mg/L Zn2+濃度組在暴露試驗(yàn)的96 h中均沒有出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，死亡率為0%；而0.8 mg/L濃度組幼參在試驗(yàn)的前48 h中出現(xiàn)個(gè)別死亡現(xiàn)象，處于一個(gè)緩慢生長(zhǎng)的狀態(tài)；試驗(yàn)進(jìn)行到72 h時(shí)，幼參死亡數(shù)量不斷增多；至96 h時(shí)出現(xiàn)明顯的中毒癥狀，死亡率達(dá)到76.7%。表明Zn2+在低于0.4 mg/L的濃度范圍內(nèi)對(duì)幼參無(wú)明顯急性毒性作用。隨著Zn2+濃度的增大及暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，幼參死亡率呈現(xiàn)明顯的升高趨勢(shì)，急性毒性效應(yīng)增強(qiáng)。

2.2 Mn7+對(duì)幼參的急性毒性

試驗(yàn)中，設(shè)置Mn7+的濃度范圍為0.1～6.5 mg/L，幼參附壁率為空白對(duì)照組高于各處理組，隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)附壁率基本呈下降趨勢(shì)（圖3）。在暴露24 h、48 h時(shí)，低濃度組附壁率先升高后降低，即0.5 mg/L濃度組較0.1 mg/L有所升高，濃度高于1.5 mg/L后，附壁率；在濃度大于3 mg/L時(shí)，附壁率急劇下降，表現(xiàn)出對(duì)幼參活動(dòng)能力的抑制作用；濃度大于5 mg/L，暴露時(shí)間超過24 h時(shí)附壁率降為0%（P＜0.01）。

圖4 Mn7+對(duì)幼參死亡率的影響Fig.4 Effect of Mn7+on mortality rate in A.japonicas

幼參的死亡率隨Mn7+濃度和暴露時(shí)間增加而呈明顯的升高趨勢(shì)。濃度低于0.5 mg/L的試驗(yàn)組在暴露96 h時(shí)，幼參均未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象；1.5 mg/L組死亡率96 h時(shí)才明顯升高，且高濃度組死亡率隨暴露時(shí)間變化明顯。暴露24 h時(shí)，6.5 mg/L濃度組死亡率最高，為6.7%；48 h時(shí)，1.5～3.0 mg/L兩濃度組的Mn7+對(duì)幼參死亡率的影響差異不顯著（P>0.01）；當(dāng)濃度高于3.0 mg/L時(shí)，幼參死亡率明顯升高，6.5 mg/L組（20.0%）最高（P>0.01）；72 h和96 h時(shí)，當(dāng)Mn7+濃度大于1.5 mg/L時(shí)，幼參死亡率明顯升高。72 h時(shí)，5.0 mg/L濃度組幼參的死亡率最高，達(dá)70.0%；而96 h時(shí)，5.0 mg/L和6.5 mg/L兩組死亡率均達(dá)到100%。

2.3 Zn2+-Mn7+對(duì)幼參的聯(lián)合致毒效應(yīng)

0.4 mg/L Zn2+分別與0.1 mg/L、0.5 mg/L、1.5 mg/L、3 mg/L、5 mg/L、6.5 mg/L Mn7+混合后，Zn2+-Mn7+的聯(lián)合致毒效應(yīng)表現(xiàn)為：隨著Mn7+試驗(yàn)濃度的增大，幼參的附壁率總體呈降低趨勢(shì)，且暴露時(shí)間越長(zhǎng)，附壁率值越小（圖5）。在暴露24 h、48 h時(shí)，低濃度組附壁率先升高后降低，均為0.4 mg/L Zn2+-0.5 mg/L Mn7+濃度組最大，與Mn7+獨(dú)立試驗(yàn)的結(jié)果規(guī)律基本相同；在濃度大于3 mg/L時(shí)，附壁率急劇下降，暴露時(shí)間超過24 h時(shí)附壁率降為0。表現(xiàn)出Zn2+-Mn7+對(duì)幼參的聯(lián)合效應(yīng)在抑制幼參的活動(dòng)能力方面較單獨(dú)Zn2+或Mn7+作用更強(qiáng)。

從圖6可以看出，幼參的死亡率隨Mn7+濃度和暴露時(shí)間的增加而呈升高趨勢(shì)。在試驗(yàn)期間，0.1 mg/L和0.5 mg/L濃度組內(nèi)幼參均未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象；1.5 mg/L濃度組在暴露96 h時(shí)6.7%的幼參出現(xiàn)死亡；濃度高于3.0 mg/L的高M(jìn)n7+濃度組死亡率隨暴露時(shí)間變化明顯，暴露時(shí)間延長(zhǎng)，死亡率明顯增大。暴露24 h時(shí)，僅在5.0 mg/L和6.5 mg/L濃度組內(nèi)出現(xiàn)幼參死亡現(xiàn)象；48 h時(shí)，5.0 mg/L濃度組內(nèi)幼參的死亡率最高，為33.3%；72 h和96 h時(shí)，5.0 mg/L和6.5 mg/L濃度組內(nèi)幼參死亡率達(dá)到100%。

圖5 Zn2+-Mn7+聯(lián)合作用下幼參的附壁率Fig.5 The adhesion rate of A.japonicas exposed in Zn2+-Mn7+

圖6 Zn2+-Mn7+聯(lián)合作用下幼參的死亡率Fig.6 The mortality rate of A.japonicas exposed in Zn2+-Mn7+

環(huán)境因子對(duì)刺參的生長(zhǎng)和行為會(huì)產(chǎn)生或大或小的影響，而其研究報(bào)道卻不多[18]，特別是Zn2+-Mn7+的聯(lián)合效應(yīng)對(duì)刺參幼參存活與行為影響的研究鮮見報(bào)道。本研究通過分析發(fā)現(xiàn)，在獨(dú)立Zn2+、Mn7+及Zn2+-Mn7+試驗(yàn)中，隨處理時(shí)間的延長(zhǎng)附壁率基本均呈先升高后降低的趨勢(shì)，高值均出現(xiàn)在0.4 mg/L Zn2+和0.5 mg/L Mn7+濃度組內(nèi)，試驗(yàn)期間內(nèi)表現(xiàn)為一定的活動(dòng)能力減弱，未出現(xiàn)急性致死現(xiàn)象。表明幼參對(duì)實(shí)驗(yàn)濃度下的Zn2+、Mn7+暴露具有一定的適應(yīng)性，對(duì)低濃度的Zn2+、Mn7+可能存在某種程度上的毒物興奮效應(yīng)[19]，但這種效應(yīng)的生物學(xué)機(jī)理及其影響因素等有待深入研究。且Zn2+-Mn7+的聯(lián)合毒性效應(yīng)較Zn2+、Mn7+的單獨(dú)作用明顯增強(qiáng)。

2.4 Zn2+和Mn7+對(duì)幼參的急性毒性特征

通過計(jì)算得出，Zn2+對(duì)幼參的24 h、48 h、72 h半致死濃度分別49.70 mg/L、1.35 mg/L、0.82 mg/L，其安全濃度（SC）為0.14 mg/L；Mn7+的48 h、72 h、96 h半致死濃度分別為31.61 mg/L、4.24 mg/L、3.13 mg/L，SC為3.16 mg/L（表1）。

表1 重金屬Zn2+、Mn7+對(duì)刺參幼參的急性毒性特征分析Tab.1 Analysis of acute toxicity of Zn2+,Mn7+on A.japonicas

在相同暴露時(shí)間下，Zn2+對(duì)幼參的半致死濃度較Mn7+小，急性毒性效應(yīng)更為明顯，故兩種重金屬對(duì)幼參的急性毒性強(qiáng)弱為：Zn2+＞Mn7+。李君豐等[20]研究中采用Zn2+對(duì)仿刺參幼參的SC為0.15 mg/L，與本文計(jì)算結(jié)果相差不大，高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(GB11607-1989)[21]中規(guī)定的0.100 mg/L；Mn7+的48 h SC低于呂耀平等人[22]研究青蝦Macrobrachium nipponense的SC(3.42 mg/L)，而高于徐鎮(zhèn)等[23]研究秀麗白蝦Palaemon modestus的SC(0.070 mg/L)，說明刺參幼參對(duì)錳耐性強(qiáng)于秀麗白蝦，稍弱于青蝦。

2.5 Zn2+和Mn7+在幼參體內(nèi)的富集

本研究認(rèn)為幼參體內(nèi)的背景含量Mn忽略不計(jì)，Zn含量為4.22 mg/kg。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，幼參對(duì)Zn2+的蓄積量與暴露時(shí)間、海水中Zn2+的濃度呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)，即暴露時(shí)間越長(zhǎng)，海水中Zn2+濃度越高，幼參對(duì)Zn2+的蓄積就越多。

隨著水體中Zn2+和Mn7+濃度的不斷增加，兩種重金屬離子在幼參體內(nèi)的含量和累積速率RA基本呈逐漸升高趨勢(shì)，而富集系數(shù)的變化趨勢(shì)較之相反。暴露96 h，0.4 mg/L Zn2+濃度組和0.5 mg/L Mn7+濃度組組幼參體內(nèi)對(duì)應(yīng)金屬離子累積含量、RA和BCF均為最低（表2）。0.8 mg/L的最高Zn2+濃度組幼參體內(nèi)Zn2+含量和RA分別高達(dá)13.90 mg/kg和2.42 mg/(kg·d)（P＜0.01），而BCF則為12.10；而在1.5 mg/L的最高M(jìn)n7+濃度組內(nèi)，幼參體內(nèi)Mn7+含量和RA分別達(dá)到7.60 mg/kg和1.90 mg/(kg·d)（P＜0.01），而BCF則為5.07。

表2 96 h時(shí)Zn2+和Mn7+在幼參體內(nèi)的富集Tab.2 Accumulation of Zn2+and Mn7+in A.japonicas at 96 h

金屬元素對(duì)海洋生物的毒性因生物種類及其個(gè)體大小而異，還與海水環(huán)境的理化因子、生物體對(duì)重金屬的適應(yīng)程度和重金屬的存在形式等有關(guān)[24]。趙元鳳等[25]發(fā)現(xiàn)幼參內(nèi)臟是鉛蓄積的主要部位，而餌料中添加海藻多糖對(duì)鉛的排放有明顯促進(jìn)作用；丁君等[26]研究表明，刺參消化道對(duì)Zn2+的蓄積大于體壁的蓄積，刺參呼吸樹對(duì)Cu2+的蓄積大于消化道和體壁的蓄積；同時(shí)，溫度顯著影響重金屬離子的蓄積。本文發(fā)現(xiàn)，幼參體內(nèi)Zn2+的含量、RA和BCF與Mn7+間均存在較大差異?？傮w上，在相似的暴露濃度下，Zn2+在幼參中的含量、RA和BCF均高于Mn7+；但Mn7+在幼參中的BCF隨暴露濃度升高而顯著降低，而Zn2+呈先降低后升高的變化趨勢(shì)（表2）。綜上所述，Zn2+在幼參體內(nèi)的富集作用強(qiáng)于Mn7+，且其對(duì)幼參活動(dòng)能力的抑制與致死作用也比Mn7+明顯。但Zn2+和Mn7+兩者之間的聯(lián)合毒性既可能是毒性的相加作用，也可能是小于相加作用的拮抗作用，或者是大于相加作用的協(xié)同作用，相關(guān)研究還有待進(jìn)行下一步的驗(yàn)證。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)對(duì)比了不同濃度的Zn2+和Mn7+對(duì)幼參的急性毒性與富集作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：（1）暴露96 h時(shí)，濃度為1 mg/L的Zn2+組和5 mg/L的Mn7+組幼參死亡率達(dá)到100%；而在Zn2+濃度低于0.4 mg/L或Mn7+濃度低于0.5 mg/L條件下，兩種金屬離子均無(wú)明顯的急性毒性作用；Mn7+濃度在3.0 mg/L時(shí)附壁率較低，而Zn2+在0.8 mg/L就已經(jīng)達(dá)到相當(dāng)?shù)妮^低水平。Zn2+的SC為0.14 mg/L，而Mn7+為3.16 mg/L。Zn2+對(duì)幼參活動(dòng)能力的抑制與致死作用較Mn7+明顯。(2)Zn2+在幼參體內(nèi)的富集作用強(qiáng)于Mn7+。隨著水體中Zn2+和Mn7+濃度的不斷增加，兩種重金屬離子在幼參體內(nèi)的含量和累積速率RA也逐漸升高，富集系數(shù)總體呈降低趨勢(shì)。在相似的暴露濃度下，Zn2+在幼參中的含量、RA和BCF基本均較Mn7+高。

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Study on the Acute Toxicity and Accumulation of Zn2+,Mn7+on the Juvenile Sea Cucumber Apostichopus japonicas

LI Bin,MA Yuan-qing,XING Hong-yan,et al
（Shandong Marine Fisheries Research Institute,Shandong Key Lab of Marine Ecological Restoration,Yantai 264006,China）

Using static bioassay test,this paper studied the acute toxicity of Zn2+and Mn7+on behavior and survival status of the juvenile sea cucumber Apostichopus japonicas,furthermore,the accumulation in A. japonicas was also analyzed.The results showed that 96 h separating exposure to Zn2+or Mn7+,the mortality rates of A.japonicas in Zn2+under 0.4 mg/L and Mn7+under 0.5 mg/L were 0.0%,and no obvious acute toxicity was found within the above experimental concentration;The mortality rate increased with the increase of concentration and exposure time,but the adhesion rate decreased.The median lethal concentrations(LC50)of Zn2+in 24 h,48 h and 72 h were 49.70,1.35 and 0.82 mg/L respectively,and its safety concentration(SC)was 0.14 mg/L;The median lethal concentrations(LC50)of Mn7+in 48 h,72 h and 96 h were 31.61,4.24 and 3.13 mg/L,and the SC was 3.16 mg/L.Therefore,it was concluded that Zn2+had a stronger acute toxicity than Mn7+on A.japonicas.With increasing concentrations of Zn2+and Mn7+,the contents of hmetals and accumulationrates gradually increased,but the change of enrichment coefficient wsa contrary.It was indicated that Zn2+showed the stronger accumulating process than Mn7+on the juvenile sea cucumber.

Apostichopus japonicas;Zn2+;Mn7+;acute toxicity;enrichment

S912

A

1008－830X(2014)04－0298－06

2014-03-15

煙臺(tái)市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（2011457）；水生動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料“泰山學(xué)者”崗位經(jīng)費(fèi)

李斌(1980-),男,山東樂陵人,助理研究員,研究方向:海洋環(huán)境毒理.E-mail:albert0722@163.com

邢紅艷(1970-),女,高級(jí)工程師,研究方向:海洋環(huán)境評(píng)價(jià).Tel:0535-6939828;E-mail:xinghongyan08@126.com