山桐子幼根離體培養(yǎng)技術(shù)研究

李緒友　汪焱軍　王海東等

摘 要：以山桐子（Idesia polycarpa）的幼根為外植體，采用改良的MS培養(yǎng)基（除鈣鹽外，其余大量元素用MS的2/3量）附加不同濃度激素組合研究山桐子離體培養(yǎng)技術(shù)。結(jié)果表明，以改良的MS+TDZ0.02mg·L-1（單位下同）+ NAA0.5+6-BA0.1誘導(dǎo)愈傷組織為最佳；以改良的MS+TDZ0.05+NAA0.1+6-BA1.0進(jìn)行芽的分化與增殖為最佳；以改良的MS+TDZ0.02+NAA0.2+6-BA1.0進(jìn)行壯苗培養(yǎng)為最佳；在1/2MS+NAA0.8+IBA0.3培養(yǎng)基上生根，最終再生成完整植株。

關(guān)鍵詞：山桐子；幼根；組織培養(yǎng)

中圖分類號 S79 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）03-04-22-02

山桐子（Idesia polycarpa）是重要的經(jīng)濟(jì)林樹木，具有很好的開發(fā)價值和應(yīng)用前景。筆者于2013年對山桐子進(jìn)行了組織培養(yǎng)與快繁研究，以期為促進(jìn)山桐子的規(guī)?；a(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)于2013年在湖北生態(tài)工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院植物組織培養(yǎng)室進(jìn)行，材料選自山桐子種子萌發(fā)15d的無菌苗離體幼根。

1.2 外植體消毒 消毒處理前，將選好的幼根切成3～5mm大小，然后用流水沖洗30min。把處理好的幼根在超凈工作臺上用70%的酒精溶液浸泡30s，無菌水沖洗3～5次，然后轉(zhuǎn)移至0.1%的HgCl2溶液中，浸泡消毒5～8min，最后用無菌水沖洗3～5次，接種到培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。

1.3 愈傷組織的誘導(dǎo) 將消毒好的外植體分別接種到以下8種培養(yǎng)基，每個處理20瓶，重復(fù)3次。每3d觀察1次，30d統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率。每處理接種10個外植體，3次重復(fù)。8種培養(yǎng)基如下：（1）改良的MS（除鈣鹽外，其余大量元素用MS的2/3量，以下同此）+TDZ0.02mg·L -1（單位下同）+2，4-D0.3；（2）改良的MS+TDZ0.02+2，4-D0.5；（3）改良的MS+TDZ0.02+2，4-D1.0；（4）改良的MS+TDZ0.02+2，4-D0.5+6-BA0.1；（5）改良的MS+TDZ0.02+2，4-D0.3+6-BA0.3；（6）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.3+6-BA0.1；（7）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.5+6-BA0.1；（8）改良的MS +TDZ0.02+NAA0.5+6-BA0.3。以上培養(yǎng)基含3%食用白糖、0.7%瓊脂，pH5.8～6.0。培養(yǎng)溫度25～28℃，光照12h·d-1，光強(qiáng)40μmol·m-2·s-1。

1.4 芽的分化與增殖 將生長良好的愈傷組織塊切成5mm×5mm大小在無菌條件下轉(zhuǎn)接到下列4種新鮮的分化培養(yǎng)基中，每個處理20瓶，重復(fù)3次。每3d觀察芽的分化、增殖以及生長狀況，并統(tǒng)計(jì)芽的分化率和增殖系數(shù)，記錄生長狀況。4種培養(yǎng)基如下：（1）改良的MS+TDZ0.05+NAA0.1+6-BA1.5；（2）改良的MS+TDZ0.08+NAA0.1+6-BA1.5；（3）改良的MS+TDZ0.05+NAA0.1+6-BA2.0；（4）改良的MS+TDZ0.08+NAA0.1+6-BA2.0。以上培養(yǎng)基均含3%食用白糖、0.7%瓊脂，pH5.8～6.0。培養(yǎng)溫度25～28℃，光照12h·d-1，光強(qiáng)40μmol·m-2·s-1。

1.5 壯苗培養(yǎng) 將上述培養(yǎng)的芽苗切割分別接種在以下4種培養(yǎng)基上培養(yǎng)。每處理接種20瓶，每瓶接種15苗，培養(yǎng)容器為350mL罐頭瓶，每個處理重復(fù)3次。接種后20d，從各處理中隨機(jī)抽取10瓶試管苗測定株高、葉數(shù)、單株重量等生理指標(biāo)。4種培養(yǎng)基如下：（1）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.2+6-BA0.6；（2）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.2+6-BA0.8；（3）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.2+6-BA1.0；（4）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.2+6-BA1.2。以上培養(yǎng)基均含3%食用白糖、0.7%瓊脂，pH5.8～6.0。培養(yǎng)溫度25～28℃，光照12h·d-1，光強(qiáng)40μmol·m-2·s-1。

1.6 生根培養(yǎng) 將高2～3cm的無根芽苗分別接種在以下4種生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)。每處理接種20瓶，每個處理重復(fù)3次。20d后調(diào)查生根數(shù)、根長，生根率等指標(biāo)。4種培養(yǎng)基如下：（1）1/2MS+NAA0.5+IBA1.0；（2）1/2MS+ NAA0.8+IBA0.1；（3）1/2MS+NAA0.8+IBA0.3；（4）1/2MS +NAA0.8+IBA0.5。以上培養(yǎng)基含2%食用白糖、0.7%瓊脂，pH5.8～6.0。培養(yǎng)溫度25～28℃，光照12h·d-1，光強(qiáng)40μmol·m-2·s-1。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同激素組合對愈傷組織誘導(dǎo)的影響 設(shè)計(jì)的8種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生，但不同培養(yǎng)基的出愈率和愈傷組織狀態(tài)有所不同。統(tǒng)計(jì)表明，愈傷組織誘導(dǎo)率最高的是（7）培養(yǎng)基（79.3%），（4）培養(yǎng)基次之（66.8%），（1）、（2）、（3）培養(yǎng)基培養(yǎng)效果不理想（出愈率都低于50%）。由此可知，山桐子對生長素種類有一定的選擇性，NAA的效果比2，4-D好，添加低濃度的6-BA對山桐子愈傷組織的誘導(dǎo)有重要影響。有研究表明，低濃度的6-BA（0.1mg·L-1）水平下，愈傷組織誘導(dǎo)率變化趨勢隨生長素濃度的遞增而增加，反之而減少。

2.2 不同激素組合對芽的分化與增殖的影響 20d后4種培養(yǎng)基上都有側(cè)芽發(fā)生并正常生長。培養(yǎng)基（1）上增殖較少；培養(yǎng)基（4）上雖然增殖多，但芽苗細(xì)弱有部分玻璃苗；培養(yǎng)基（2）、（3）上增殖都較好，但培養(yǎng)基（3）上芽苗形態(tài)生長更正常，其側(cè)芽30d增殖達(dá)4.6倍，芽苗生長快而整齊。

2.3 不同激素組合對壯苗培養(yǎng)的影響 4種培養(yǎng)基都能進(jìn)行壯苗培養(yǎng)。但培養(yǎng)基（1）、（2）和（4）上的芽苗基部愈傷組織較大，培養(yǎng)基（3）更適合壯苗培養(yǎng)，30d芽苗生長平均高度達(dá)3.6cm以上，且苗莖粗壯，此種培養(yǎng)基上的芽苗非常適宜生根培養(yǎng)。

2.4 不同激素組合對生根培養(yǎng)的影響 20d后4種培養(yǎng)基均有不定根產(chǎn)生，其生根率無明顯差異，但生根量有差異。40d統(tǒng)計(jì)結(jié)果是培養(yǎng)基（3）較好，平均每試管苗生根4～7條，且生根均勻整齊，生根率達(dá)87%以上。

3 結(jié)論與討論

在植物愈傷組織誘導(dǎo)中，雖然對NAA的利用不是很多，但NAA對愈傷組織的誘導(dǎo)也有很重要的作用。林婭等研究表明，NAA誘導(dǎo)愈傷組織的效果優(yōu)于2，4-D，NAA與任何細(xì)胞分裂素類物質(zhì)結(jié)合使用，愈傷組織的誘導(dǎo)率都為100%。龍雯虹等對蘿卜愈傷組織的誘導(dǎo)研究也指出，不同的生長素對蘿卜愈傷組織的誘導(dǎo)效果為：NAA>2，4-D>IBA。本研究結(jié)果表明，通過使用NAA，添加極微量TDZ（具有生長素和細(xì)胞分裂素雙重作用）和微量6-BA，誘導(dǎo)山桐子的愈傷組織效果優(yōu)于2，4-D。

在對山桐子芽的分化與增殖研究中，所選的最佳培養(yǎng)基單獨(dú)對分化、增殖兩個過程來講并不是最佳，而是從經(jīng)濟(jì)角度和縮短培養(yǎng)時間而言的。

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（責(zé)編：張宏民）