• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    以環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷為“假載體”印跡識別蛋白質(zhì)的研究

    2014-03-04 21:21:53張蕓郭敏杰等
    分析化學(xué) 2014年2期
    關(guān)鍵詞:聚乙烯醇

    張蕓 郭敏杰等

    摘要 實驗以聚乙烯醇分子為客體分子,與γ環(huán)糊精(γCD)分子組裝制備環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷(CDPPRs);在金屬離子存在下,以丙烯酰胺(AM)為單體,N,N亞甲基雙丙烯酰胺為交聯(lián)劑,以CDPPRs為“假載體”,制備了以牛血清白蛋白(BSA)為模板的分子印跡聚合物(cpMIP)。結(jié)果表明,隨著功能基化CDPPRs(CDPPRsAc)用量增加,印跡聚合物吸附量先增加后減小,當(dāng)CDPPRsAc與AM的質(zhì)量比為0.55時,印跡聚合物的吸附量最大;在Cu2+共存時,吸附量最高可達5.16 mg/g;將cpMIP用于4種混合蛋白溶液吸附,結(jié)果表明, 引入CDPPRs使印跡聚合物的特異性吸附能力明顯提高,特異性吸附量可提高約6倍。

    關(guān)鍵詞 分子印跡聚合物; 聚乙烯醇; 環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷; 假載體; 蛋白質(zhì)吸附

    1引言

    蛋白質(zhì)分子印跡聚合物(MIPs)是在模板蛋白存在下通過功能單體交聯(lián)聚合而成[1,2],MIPs可以選擇性地從混合物中吸附分離模板蛋白,其制備方法主要有包埋法[3]、表面印跡法[4],抗原決定基法[5]、輔助識別鏈輔助法[6,7]、碳納米管為載體法[8]及借助某些物質(zhì)或載體在二維或三維空間上進行蛋白質(zhì)印跡[9]方法等。環(huán)糊精(CD)與鏈狀大分子通過非共價鍵相互作用組裝超分子聚集體,可形成準(zhǔn)聚輪烷或者聚輪烷(CDPPRs)[10]。目前,CD用于印跡氨基酸、多肽的研究較多[11],用于蛋白質(zhì)分子印跡的研究很少[12]。 Zhang等[13]以硅膠為載體,將βCD與丙烯酰胺進行鍵合制備MIPs。Nagaoka等[14]將環(huán)糊精引入印跡體系,以三肽為模板分子,分別在硅膠、氧化鋁薄膜及聚羥乙基丙烯酸甲酯表面制備了印跡聚合物。

    本實驗將環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷充當(dāng)“假載體”,參與交聯(lián)聚合過程而被固定在聚合物網(wǎng)絡(luò)中,以實現(xiàn)功能單體與目標(biāo)分子良好的空間匹配,從而達到對模板蛋白的專一性識別[15]。印跡吸附過程見圖1。本實驗提出的環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷這種“假載體”有別于小分子單體,由于CD是低聚環(huán)狀物,結(jié)構(gòu)類似一截頂圓錐,它能夠在體系聚合過程中在橫向和縱向空間上較好的維持與蛋白質(zhì)匹配的空間結(jié)構(gòu)而區(qū)別于普通的包埋法印跡。CD的空腔直徑約為1 nm,其縱向尺寸也不超過10 nm, 因此對多數(shù)三維線長在10 nm這個數(shù)量級上的蛋白質(zhì)而言, CDPPRs并不提供一個真正的載體作用,因而稱之為“假載體”。

    2實驗部分

    2.1儀器與試劑

    DYCZ24DN型電泳儀(北京市六一儀器廠); TU1800PC紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司); MIPAⅡXMU/H掃描電鏡(美國SIRION公司)。

    聚乙烯醇(PVA,醇解度80%,MW=9000~10000,日本Kuraray公司); γ環(huán)糊精(γCD, 藥品級, 德國Wacker公司); 牛血清白蛋白第V組分(BSA)、大豆蛋白酶抑制劑(SBTL)、卵清蛋白(OVA)、溶菌酶(LYS),天津博迪化工有限公司;其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

    2.2實驗方法

    2.2.1CDPPRs的制備稱1.00 g PVA于100 mL圓底燒瓶中,用20.0 mL水溶解;加入3.00 g γCD, 80 ℃下回流12 h,在室溫下靜置12 h,循環(huán)5次。將反應(yīng)物用乙醇沉淀,經(jīng)水洗、分離、真空干燥,制得CDPPRs。稱2.00 g CDPPRs,溶于40.0 mL二甲基亞砜中,逐滴加入2.00 mL 丙烯酰氯(AC)。4 h后,用乙醇沉淀,用乙醚洗滌,真空干燥后得到CDPPRsAc。

    2.2.2印跡聚合物MIPs的制備依次將丙烯酰胺AM、N,N′亞甲基雙丙烯酰胺MBA、CDPPRsAc、模板蛋白BSA加入到裝有20.0 mL去離子水的三口燒瓶中,冰水浴中攪拌1 h,通氮氣,加入過硫酸銨(APS),繼續(xù)攪拌0.5 h后加入Na2SO3溶液,40℃反應(yīng)4 h,得到cpMIPs。空白印跡聚合物NMIP的合成,除不加入模板分子外,其它與制備cpMIPs印跡聚合物的方法相同;對比組印跡聚合物aMIP的合成,除不加CDPPRsAc外,其它與制備cpMIPs印跡聚合物的方法相同。

    2.2.3 印跡聚合物吸附性能測試(1)吸附動力學(xué)實驗將各組MIPs加入到0.50 g/L BSA溶液中,于4 ℃吸附,分別于0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,6.0,12.0和24.0 h取上層清液1.0 mL,檢測MIPs對模板蛋白BSA的吸附量Q。(2)競爭吸附實驗稱取1.00 g 各組MIPs,加入到10 mL蛋白質(zhì)混合溶液(BSA,LYS,OVA和SBTL濃度均為0.50 g/L)中,4 ℃吸附12 h。取聚合物各0.10 g,依次用1.0 mL的0.15, 0.50和2.0 mol/L的KCl溶液洗滌。取洗脫蛋白液各10 μL上樣,恒流條件下進行十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE),用考馬斯藍染色進行分析。

    3結(jié)果與討論

    3.1CDPPRs結(jié)構(gòu)分析

    CD為高旋光性物質(zhì),PVA旋光度為零,當(dāng)兩者形成組裝體后,分子的空間形象及分子對稱性發(fā)生了較大的改變。兩者混合物的比旋光度與γCD的比旋光度相同,均為+175°;而組裝體的比旋光度為+85°,初步證明聚乙烯醇與γ環(huán)糊精進行了包結(jié)。

    CDPPRs的核磁譜圖(圖2c)進一步證明主客體間的各種弱作用相互疊加形成了較強的超分子作用。3.7~3.9 ppm的峰是γCD的3,5位的質(zhì)子和PVA分子鏈上與羥基相連碳上的質(zhì)子的共同貢獻,對比圖2b與2c可見,該部分貢獻并不是γCD與聚乙烯醇兩種物質(zhì)質(zhì)子的簡單物理加和,峰形已經(jīng)發(fā)生變化。

    3.2蛋白質(zhì)印跡聚合物的制備

    3.2.1CDPPRsAc的含量對MIPs吸附量的影響在實驗范圍內(nèi),隨著CDPPRsAc用量的增加,印跡聚合物的吸附量增大(圖4),這應(yīng)歸因于環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷的引入使識別位點增多。當(dāng)CDPPRsAc用量繼續(xù)增加時,印跡聚合物的吸附量下降,這可能是因為過多的環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷使得印跡聚合物的交聯(lián)過于密集,不利于印跡聚合物的識別。在實驗范圍內(nèi),當(dāng)CDPPRsAc與AM的質(zhì)量比為1.1時,此時的印跡聚合物的吸附量最大,為3.54 mg/g。

    3.2.2金屬離子用量對MIPs吸附量的影響金屬離子可以特異性地鍵合蛋白質(zhì)的某些官能團。分別使用Ni2+和Cu2+輔助蛋白質(zhì)印跡識別過程,金屬離子與模板所形成的空間取向,在環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷所在的聚合網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中能夠被較好地保留下來,因此可提高對模板分子的選擇性識別(表1)。加入金屬離子的MIPs比未加入金屬離子的MIPs吸附量高,這可能是因為加入金屬離子后,CDPPRAc、功能單體與模板蛋白之間可以通過金屬離子形成穩(wěn)定的配位作用,從而產(chǎn)生了更多的有效識別位點,提高對模板蛋白的識別能力。實驗范圍內(nèi),引入Cu2+的MIPs對模板蛋白的吸附量比引入Ni2+的MIPs要高一些。

    摘要 實驗以聚乙烯醇分子為客體分子,與γ環(huán)糊精(γCD)分子組裝制備環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷(CDPPRs);在金屬離子存在下,以丙烯酰胺(AM)為單體,N,N亞甲基雙丙烯酰胺為交聯(lián)劑,以CDPPRs為“假載體”,制備了以牛血清白蛋白(BSA)為模板的分子印跡聚合物(cpMIP)。結(jié)果表明,隨著功能基化CDPPRs(CDPPRsAc)用量增加,印跡聚合物吸附量先增加后減小,當(dāng)CDPPRsAc與AM的質(zhì)量比為0.55時,印跡聚合物的吸附量最大;在Cu2+共存時,吸附量最高可達5.16 mg/g;將cpMIP用于4種混合蛋白溶液吸附,結(jié)果表明, 引入CDPPRs使印跡聚合物的特異性吸附能力明顯提高,特異性吸附量可提高約6倍。

    關(guān)鍵詞 分子印跡聚合物; 聚乙烯醇; 環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷; 假載體; 蛋白質(zhì)吸附

    1引言

    蛋白質(zhì)分子印跡聚合物(MIPs)是在模板蛋白存在下通過功能單體交聯(lián)聚合而成[1,2],MIPs可以選擇性地從混合物中吸附分離模板蛋白,其制備方法主要有包埋法[3]、表面印跡法[4],抗原決定基法[5]、輔助識別鏈輔助法[6,7]、碳納米管為載體法[8]及借助某些物質(zhì)或載體在二維或三維空間上進行蛋白質(zhì)印跡[9]方法等。環(huán)糊精(CD)與鏈狀大分子通過非共價鍵相互作用組裝超分子聚集體,可形成準(zhǔn)聚輪烷或者聚輪烷(CDPPRs)[10]。目前,CD用于印跡氨基酸、多肽的研究較多[11],用于蛋白質(zhì)分子印跡的研究很少[12]。 Zhang等[13]以硅膠為載體,將βCD與丙烯酰胺進行鍵合制備MIPs。Nagaoka等[14]將環(huán)糊精引入印跡體系,以三肽為模板分子,分別在硅膠、氧化鋁薄膜及聚羥乙基丙烯酸甲酯表面制備了印跡聚合物。

    本實驗將環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷充當(dāng)“假載體”,參與交聯(lián)聚合過程而被固定在聚合物網(wǎng)絡(luò)中,以實現(xiàn)功能單體與目標(biāo)分子良好的空間匹配,從而達到對模板蛋白的專一性識別[15]。印跡吸附過程見圖1。本實驗提出的環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷這種“假載體”有別于小分子單體,由于CD是低聚環(huán)狀物,結(jié)構(gòu)類似一截頂圓錐,它能夠在體系聚合過程中在橫向和縱向空間上較好的維持與蛋白質(zhì)匹配的空間結(jié)構(gòu)而區(qū)別于普通的包埋法印跡。CD的空腔直徑約為1 nm,其縱向尺寸也不超過10 nm, 因此對多數(shù)三維線長在10 nm這個數(shù)量級上的蛋白質(zhì)而言, CDPPRs并不提供一個真正的載體作用,因而稱之為“假載體”。

    2實驗部分

    2.1儀器與試劑

    DYCZ24DN型電泳儀(北京市六一儀器廠); TU1800PC紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司); MIPAⅡXMU/H掃描電鏡(美國SIRION公司)。

    聚乙烯醇(PVA,醇解度80%,MW=9000~10000,日本Kuraray公司); γ環(huán)糊精(γCD, 藥品級, 德國Wacker公司); 牛血清白蛋白第V組分(BSA)、大豆蛋白酶抑制劑(SBTL)、卵清蛋白(OVA)、溶菌酶(LYS),天津博迪化工有限公司;其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

    2.2實驗方法

    2.2.1CDPPRs的制備稱1.00 g PVA于100 mL圓底燒瓶中,用20.0 mL水溶解;加入3.00 g γCD, 80 ℃下回流12 h,在室溫下靜置12 h,循環(huán)5次。將反應(yīng)物用乙醇沉淀,經(jīng)水洗、分離、真空干燥,制得CDPPRs。稱2.00 g CDPPRs,溶于40.0 mL二甲基亞砜中,逐滴加入2.00 mL 丙烯酰氯(AC)。4 h后,用乙醇沉淀,用乙醚洗滌,真空干燥后得到CDPPRsAc。

    2.2.2印跡聚合物MIPs的制備依次將丙烯酰胺AM、N,N′亞甲基雙丙烯酰胺MBA、CDPPRsAc、模板蛋白BSA加入到裝有20.0 mL去離子水的三口燒瓶中,冰水浴中攪拌1 h,通氮氣,加入過硫酸銨(APS),繼續(xù)攪拌0.5 h后加入Na2SO3溶液,40℃反應(yīng)4 h,得到cpMIPs??瞻子≯E聚合物NMIP的合成,除不加入模板分子外,其它與制備cpMIPs印跡聚合物的方法相同;對比組印跡聚合物aMIP的合成,除不加CDPPRsAc外,其它與制備cpMIPs印跡聚合物的方法相同。

    2.2.3 印跡聚合物吸附性能測試(1)吸附動力學(xué)實驗將各組MIPs加入到0.50 g/L BSA溶液中,于4 ℃吸附,分別于0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,6.0,12.0和24.0 h取上層清液1.0 mL,檢測MIPs對模板蛋白BSA的吸附量Q。(2)競爭吸附實驗稱取1.00 g 各組MIPs,加入到10 mL蛋白質(zhì)混合溶液(BSA,LYS,OVA和SBTL濃度均為0.50 g/L)中,4 ℃吸附12 h。取聚合物各0.10 g,依次用1.0 mL的0.15, 0.50和2.0 mol/L的KCl溶液洗滌。取洗脫蛋白液各10 μL上樣,恒流條件下進行十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE),用考馬斯藍染色進行分析。

    3結(jié)果與討論

    3.1CDPPRs結(jié)構(gòu)分析

    CD為高旋光性物質(zhì),PVA旋光度為零,當(dāng)兩者形成組裝體后,分子的空間形象及分子對稱性發(fā)生了較大的改變。兩者混合物的比旋光度與γCD的比旋光度相同,均為+175°;而組裝體的比旋光度為+85°,初步證明聚乙烯醇與γ環(huán)糊精進行了包結(jié)。

    CDPPRs的核磁譜圖(圖2c)進一步證明主客體間的各種弱作用相互疊加形成了較強的超分子作用。3.7~3.9 ppm的峰是γCD的3,5位的質(zhì)子和PVA分子鏈上與羥基相連碳上的質(zhì)子的共同貢獻,對比圖2b與2c可見,該部分貢獻并不是γCD與聚乙烯醇兩種物質(zhì)質(zhì)子的簡單物理加和,峰形已經(jīng)發(fā)生變化。

    3.2蛋白質(zhì)印跡聚合物的制備

    3.2.1CDPPRsAc的含量對MIPs吸附量的影響在實驗范圍內(nèi),隨著CDPPRsAc用量的增加,印跡聚合物的吸附量增大(圖4),這應(yīng)歸因于環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷的引入使識別位點增多。當(dāng)CDPPRsAc用量繼續(xù)增加時,印跡聚合物的吸附量下降,這可能是因為過多的環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷使得印跡聚合物的交聯(lián)過于密集,不利于印跡聚合物的識別。在實驗范圍內(nèi),當(dāng)CDPPRsAc與AM的質(zhì)量比為1.1時,此時的印跡聚合物的吸附量最大,為3.54 mg/g。

    3.2.2金屬離子用量對MIPs吸附量的影響金屬離子可以特異性地鍵合蛋白質(zhì)的某些官能團。分別使用Ni2+和Cu2+輔助蛋白質(zhì)印跡識別過程,金屬離子與模板所形成的空間取向,在環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷所在的聚合網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中能夠被較好地保留下來,因此可提高對模板分子的選擇性識別(表1)。加入金屬離子的MIPs比未加入金屬離子的MIPs吸附量高,這可能是因為加入金屬離子后,CDPPRAc、功能單體與模板蛋白之間可以通過金屬離子形成穩(wěn)定的配位作用,從而產(chǎn)生了更多的有效識別位點,提高對模板蛋白的識別能力。實驗范圍內(nèi),引入Cu2+的MIPs對模板蛋白的吸附量比引入Ni2+的MIPs要高一些。

    摘要 實驗以聚乙烯醇分子為客體分子,與γ環(huán)糊精(γCD)分子組裝制備環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷(CDPPRs);在金屬離子存在下,以丙烯酰胺(AM)為單體,N,N亞甲基雙丙烯酰胺為交聯(lián)劑,以CDPPRs為“假載體”,制備了以牛血清白蛋白(BSA)為模板的分子印跡聚合物(cpMIP)。結(jié)果表明,隨著功能基化CDPPRs(CDPPRsAc)用量增加,印跡聚合物吸附量先增加后減小,當(dāng)CDPPRsAc與AM的質(zhì)量比為0.55時,印跡聚合物的吸附量最大;在Cu2+共存時,吸附量最高可達5.16 mg/g;將cpMIP用于4種混合蛋白溶液吸附,結(jié)果表明, 引入CDPPRs使印跡聚合物的特異性吸附能力明顯提高,特異性吸附量可提高約6倍。

    關(guān)鍵詞 分子印跡聚合物; 聚乙烯醇; 環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷; 假載體; 蛋白質(zhì)吸附

    1引言

    蛋白質(zhì)分子印跡聚合物(MIPs)是在模板蛋白存在下通過功能單體交聯(lián)聚合而成[1,2],MIPs可以選擇性地從混合物中吸附分離模板蛋白,其制備方法主要有包埋法[3]、表面印跡法[4],抗原決定基法[5]、輔助識別鏈輔助法[6,7]、碳納米管為載體法[8]及借助某些物質(zhì)或載體在二維或三維空間上進行蛋白質(zhì)印跡[9]方法等。環(huán)糊精(CD)與鏈狀大分子通過非共價鍵相互作用組裝超分子聚集體,可形成準(zhǔn)聚輪烷或者聚輪烷(CDPPRs)[10]。目前,CD用于印跡氨基酸、多肽的研究較多[11],用于蛋白質(zhì)分子印跡的研究很少[12]。 Zhang等[13]以硅膠為載體,將βCD與丙烯酰胺進行鍵合制備MIPs。Nagaoka等[14]將環(huán)糊精引入印跡體系,以三肽為模板分子,分別在硅膠、氧化鋁薄膜及聚羥乙基丙烯酸甲酯表面制備了印跡聚合物。

    本實驗將環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷充當(dāng)“假載體”,參與交聯(lián)聚合過程而被固定在聚合物網(wǎng)絡(luò)中,以實現(xiàn)功能單體與目標(biāo)分子良好的空間匹配,從而達到對模板蛋白的專一性識別[15]。印跡吸附過程見圖1。本實驗提出的環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷這種“假載體”有別于小分子單體,由于CD是低聚環(huán)狀物,結(jié)構(gòu)類似一截頂圓錐,它能夠在體系聚合過程中在橫向和縱向空間上較好的維持與蛋白質(zhì)匹配的空間結(jié)構(gòu)而區(qū)別于普通的包埋法印跡。CD的空腔直徑約為1 nm,其縱向尺寸也不超過10 nm, 因此對多數(shù)三維線長在10 nm這個數(shù)量級上的蛋白質(zhì)而言, CDPPRs并不提供一個真正的載體作用,因而稱之為“假載體”。

    2實驗部分

    2.1儀器與試劑

    DYCZ24DN型電泳儀(北京市六一儀器廠); TU1800PC紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司); MIPAⅡXMU/H掃描電鏡(美國SIRION公司)。

    聚乙烯醇(PVA,醇解度80%,MW=9000~10000,日本Kuraray公司); γ環(huán)糊精(γCD, 藥品級, 德國Wacker公司); 牛血清白蛋白第V組分(BSA)、大豆蛋白酶抑制劑(SBTL)、卵清蛋白(OVA)、溶菌酶(LYS),天津博迪化工有限公司;其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

    2.2實驗方法

    2.2.1CDPPRs的制備稱1.00 g PVA于100 mL圓底燒瓶中,用20.0 mL水溶解;加入3.00 g γCD, 80 ℃下回流12 h,在室溫下靜置12 h,循環(huán)5次。將反應(yīng)物用乙醇沉淀,經(jīng)水洗、分離、真空干燥,制得CDPPRs。稱2.00 g CDPPRs,溶于40.0 mL二甲基亞砜中,逐滴加入2.00 mL 丙烯酰氯(AC)。4 h后,用乙醇沉淀,用乙醚洗滌,真空干燥后得到CDPPRsAc。

    2.2.2印跡聚合物MIPs的制備依次將丙烯酰胺AM、N,N′亞甲基雙丙烯酰胺MBA、CDPPRsAc、模板蛋白BSA加入到裝有20.0 mL去離子水的三口燒瓶中,冰水浴中攪拌1 h,通氮氣,加入過硫酸銨(APS),繼續(xù)攪拌0.5 h后加入Na2SO3溶液,40℃反應(yīng)4 h,得到cpMIPs??瞻子≯E聚合物NMIP的合成,除不加入模板分子外,其它與制備cpMIPs印跡聚合物的方法相同;對比組印跡聚合物aMIP的合成,除不加CDPPRsAc外,其它與制備cpMIPs印跡聚合物的方法相同。

    2.2.3 印跡聚合物吸附性能測試(1)吸附動力學(xué)實驗將各組MIPs加入到0.50 g/L BSA溶液中,于4 ℃吸附,分別于0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,6.0,12.0和24.0 h取上層清液1.0 mL,檢測MIPs對模板蛋白BSA的吸附量Q。(2)競爭吸附實驗稱取1.00 g 各組MIPs,加入到10 mL蛋白質(zhì)混合溶液(BSA,LYS,OVA和SBTL濃度均為0.50 g/L)中,4 ℃吸附12 h。取聚合物各0.10 g,依次用1.0 mL的0.15, 0.50和2.0 mol/L的KCl溶液洗滌。取洗脫蛋白液各10 μL上樣,恒流條件下進行十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE),用考馬斯藍染色進行分析。

    3結(jié)果與討論

    3.1CDPPRs結(jié)構(gòu)分析

    CD為高旋光性物質(zhì),PVA旋光度為零,當(dāng)兩者形成組裝體后,分子的空間形象及分子對稱性發(fā)生了較大的改變。兩者混合物的比旋光度與γCD的比旋光度相同,均為+175°;而組裝體的比旋光度為+85°,初步證明聚乙烯醇與γ環(huán)糊精進行了包結(jié)。

    CDPPRs的核磁譜圖(圖2c)進一步證明主客體間的各種弱作用相互疊加形成了較強的超分子作用。3.7~3.9 ppm的峰是γCD的3,5位的質(zhì)子和PVA分子鏈上與羥基相連碳上的質(zhì)子的共同貢獻,對比圖2b與2c可見,該部分貢獻并不是γCD與聚乙烯醇兩種物質(zhì)質(zhì)子的簡單物理加和,峰形已經(jīng)發(fā)生變化。

    3.2蛋白質(zhì)印跡聚合物的制備

    3.2.1CDPPRsAc的含量對MIPs吸附量的影響在實驗范圍內(nèi),隨著CDPPRsAc用量的增加,印跡聚合物的吸附量增大(圖4),這應(yīng)歸因于環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷的引入使識別位點增多。當(dāng)CDPPRsAc用量繼續(xù)增加時,印跡聚合物的吸附量下降,這可能是因為過多的環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷使得印跡聚合物的交聯(lián)過于密集,不利于印跡聚合物的識別。在實驗范圍內(nèi),當(dāng)CDPPRsAc與AM的質(zhì)量比為1.1時,此時的印跡聚合物的吸附量最大,為3.54 mg/g。

    3.2.2金屬離子用量對MIPs吸附量的影響金屬離子可以特異性地鍵合蛋白質(zhì)的某些官能團。分別使用Ni2+和Cu2+輔助蛋白質(zhì)印跡識別過程,金屬離子與模板所形成的空間取向,在環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷所在的聚合網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中能夠被較好地保留下來,因此可提高對模板分子的選擇性識別(表1)。加入金屬離子的MIPs比未加入金屬離子的MIPs吸附量高,這可能是因為加入金屬離子后,CDPPRAc、功能單體與模板蛋白之間可以通過金屬離子形成穩(wěn)定的配位作用,從而產(chǎn)生了更多的有效識別位點,提高對模板蛋白的識別能力。實驗范圍內(nèi),引入Cu2+的MIPs對模板蛋白的吸附量比引入Ni2+的MIPs要高一些。

    猜你喜歡
    聚乙烯醇
    海藻酸鈉/聚乙烯醇基復(fù)合凝膠材料的制備及對Pb2+吸附性能研究
    改性復(fù)合聚乙烯醇食品包裝膜研究進展
    聚乙烯醇中紅外光譜研究
    一種阻燃型聚乙烯醇氣凝膠及其制備方法
    聚乙烯醇膠粘劑在育秧紙缽中的應(yīng)用
    天津造紙(2016年1期)2017-01-15 14:03:28
    聚乙烯醇/二氧化鈦復(fù)合納米纖維膜的制備和改性
    聚乙烯醇/綠原酸共混物的制備及性能
    中國塑料(2016年7期)2016-04-16 05:25:46
    聚乙烯醇/淀粉納米晶復(fù)合膜的制備及表征
    中國塑料(2015年3期)2015-11-27 03:42:15
    聚乙烯醇對過氧化銀電極分解和電性能的影響
    發(fā)泡聚乙烯醇的制備及性能研究
    河南科技(2014年7期)2014-02-27 14:11:19
    男女边摸边吃奶| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 99久久综合免费| 欧美久久黑人一区二区| www.精华液| 中文字幕色久视频| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产成人欧美在线观看 | 亚洲成av片中文字幕在线观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲国产精品国产精品| 国产在线一区二区三区精| 韩国精品一区二区三区| 999精品在线视频| 亚洲中文字幕日韩| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 一级毛片我不卡| 欧美乱码精品一区二区三区| 99国产精品一区二区三区| 老司机影院成人| 在线 av 中文字幕| 无限看片的www在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 日日夜夜操网爽| 精品少妇内射三级| 日日夜夜操网爽| 高清不卡的av网站| av在线播放精品| 国产1区2区3区精品| 久久国产亚洲av麻豆专区| 99国产精品99久久久久| 国产精品久久久久成人av| 一区二区三区乱码不卡18| 中文字幕av电影在线播放| 久久99热这里只频精品6学生| 精品第一国产精品| xxxhd国产人妻xxx| 青春草亚洲视频在线观看| www.熟女人妻精品国产| 国产高清videossex| 国产精品欧美亚洲77777| 婷婷丁香在线五月| 首页视频小说图片口味搜索 | 成年人午夜在线观看视频| 高清欧美精品videossex| 久久精品国产综合久久久| 在线观看免费高清a一片| 国产av国产精品国产| 亚洲,一卡二卡三卡| 精品少妇久久久久久888优播| 我的亚洲天堂| 亚洲精品av麻豆狂野| 欧美久久黑人一区二区| 日日夜夜操网爽| 午夜福利视频精品| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 老司机在亚洲福利影院| 一级黄色大片毛片| 狂野欧美激情性bbbbbb| 一级黄色大片毛片| 在线观看www视频免费| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久久久久久国产电影| 蜜桃国产av成人99| 飞空精品影院首页| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 97在线人人人人妻| 91成人精品电影| 丝袜喷水一区| 男女午夜视频在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 成年动漫av网址| 男女无遮挡免费网站观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 人妻 亚洲 视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产一区二区激情短视频 | 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 在线天堂中文资源库| 丝袜美腿诱惑在线| 人成视频在线观看免费观看| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲精品自拍成人| 国产av一区二区精品久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产成人一区二区在线| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲 欧美一区二区三区| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 久久久久久久久免费视频了| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲欧美激情在线| 午夜精品国产一区二区电影| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 久久亚洲精品不卡| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 久久精品国产a三级三级三级| av在线老鸭窝| 两个人免费观看高清视频| kizo精华| 国产精品一区二区在线观看99| 国产免费福利视频在线观看| 国产黄色免费在线视频| 一区二区三区精品91| 少妇人妻 视频| 亚洲国产精品一区三区| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 欧美 日韩 精品 国产| 精品人妻在线不人妻| 午夜福利免费观看在线| 国产成人精品久久久久久| 免费人妻精品一区二区三区视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲精品乱久久久久久| 男女边吃奶边做爰视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 美国免费a级毛片| 丰满饥渴人妻一区二区三| 极品少妇高潮喷水抽搐| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲成人国产一区在线观看 | 国产精品一区二区免费欧美 | 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲专区国产一区二区| 纯流量卡能插随身wifi吗| av在线app专区| 男女床上黄色一级片免费看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产精品亚洲av一区麻豆| 日日夜夜操网爽| 亚洲熟女毛片儿| 国产又爽黄色视频| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲国产日韩一区二区| 香蕉丝袜av| 国产精品 国内视频| 亚洲天堂av无毛| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 中国国产av一级| 一级毛片我不卡| 一边摸一边做爽爽视频免费| 18禁观看日本| 黄片小视频在线播放| 国产熟女欧美一区二区| 久久性视频一级片| 精品久久久久久电影网| 久久ye,这里只有精品| 老司机深夜福利视频在线观看 | 激情视频va一区二区三区| 国产深夜福利视频在线观看| 国产淫语在线视频| 国产精品一区二区在线观看99| 久久久亚洲精品成人影院| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 两个人看的免费小视频| 老司机亚洲免费影院| 亚洲精品中文字幕在线视频| 精品一区二区三卡| 十八禁网站网址无遮挡| 成人亚洲精品一区在线观看| 麻豆av在线久日| 欧美黄色淫秽网站| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲图色成人| 国产精品国产av在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 欧美日韩福利视频一区二区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲色图综合在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡| av在线app专区| 91精品三级在线观看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲国产av新网站| 青青草视频在线视频观看| 最近手机中文字幕大全| 亚洲图色成人| 久久鲁丝午夜福利片| 国产免费福利视频在线观看| 国产成人av教育| 看免费av毛片| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久久久精品人妻al黑| 国产野战对白在线观看| a级片在线免费高清观看视频| 国产男女超爽视频在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 日本欧美视频一区| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| √禁漫天堂资源中文www| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 97在线人人人人妻| 亚洲成色77777| 日本午夜av视频| 91老司机精品| 老司机在亚洲福利影院| 97在线人人人人妻| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产精品人妻久久久影院| 午夜91福利影院| 晚上一个人看的免费电影| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 一级片免费观看大全| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 精品少妇内射三级| 美女视频免费永久观看网站| 深夜精品福利| 黑丝袜美女国产一区| 老鸭窝网址在线观看| 中文字幕色久视频| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 精品亚洲成国产av| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产一区二区在线观看av| 久久 成人 亚洲| 亚洲伊人色综图| 美女高潮到喷水免费观看| 久久性视频一级片| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 成年人午夜在线观看视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 中文字幕最新亚洲高清| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 久热这里只有精品99| cao死你这个sao货| 国产男人的电影天堂91| 亚洲国产最新在线播放| 成年av动漫网址| 女人久久www免费人成看片| 国产国语露脸激情在线看| av国产精品久久久久影院| 免费在线观看影片大全网站 | 麻豆国产av国片精品| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| avwww免费| 欧美在线一区亚洲| av网站在线播放免费| 老司机影院成人| 午夜影院在线不卡| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 日本vs欧美在线观看视频| 好男人视频免费观看在线| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 高清视频免费观看一区二区| 后天国语完整版免费观看| 91老司机精品| 欧美日韩黄片免| 男女床上黄色一级片免费看| 制服诱惑二区| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 精品国产一区二区久久| 91精品伊人久久大香线蕉| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲av电影在线进入| 精品久久久久久电影网| 欧美性长视频在线观看| 在线观看一区二区三区激情| 性色av乱码一区二区三区2| 狂野欧美激情性xxxx| 99国产精品一区二区三区| 国产又爽黄色视频| 老鸭窝网址在线观看| 啦啦啦在线观看免费高清www| 亚洲精品日本国产第一区| 国产午夜精品一二区理论片| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产高清国产精品国产三级| 久久久精品区二区三区| 美女高潮到喷水免费观看| 日韩制服骚丝袜av| 超碰成人久久| 国产淫语在线视频| 丝袜人妻中文字幕| 人人澡人人妻人| 欧美亚洲日本最大视频资源| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 啦啦啦 在线观看视频| bbb黄色大片| 国产成人a∨麻豆精品| 日本91视频免费播放| 男女下面插进去视频免费观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 久久毛片免费看一区二区三区| 久久免费观看电影| 我的亚洲天堂| 男人舔女人的私密视频| 免费高清在线观看日韩| 国产一区二区在线观看av| 中文字幕精品免费在线观看视频| 自线自在国产av| 天堂中文最新版在线下载| 在线观看免费午夜福利视频| 高清不卡的av网站| 丝瓜视频免费看黄片| 国产有黄有色有爽视频| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲天堂av无毛| 在线观看免费高清a一片| 精品人妻一区二区三区麻豆| 大陆偷拍与自拍| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 黄色视频不卡| 日韩制服骚丝袜av| 不卡av一区二区三区| 亚洲精品一二三| 99香蕉大伊视频| 91九色精品人成在线观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 老司机影院成人| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 久久狼人影院| 制服诱惑二区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 久久久国产欧美日韩av| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产精品一区二区免费欧美 | 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 麻豆av在线久日| av在线播放精品| 午夜福利视频在线观看免费| 久久久亚洲精品成人影院| 久久久久久久精品精品| 久久久国产欧美日韩av| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 国产91精品成人一区二区三区 | 丁香六月天网| 亚洲av欧美aⅴ国产| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 美女视频免费永久观看网站| 老司机影院毛片| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲成人国产一区在线观看 | 欧美成人精品欧美一级黄| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲欧洲日产国产| 激情视频va一区二区三区| 黄色一级大片看看| 日韩大片免费观看网站| 国产精品免费视频内射| 亚洲,欧美,日韩| 99久久精品国产亚洲精品| 国产片特级美女逼逼视频| 宅男免费午夜| 日本wwww免费看| 曰老女人黄片| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美成狂野欧美在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲人成网站在线观看播放| 中文欧美无线码| 好男人视频免费观看在线| 久久久精品免费免费高清| 久久九九热精品免费| 丝袜美足系列| avwww免费| 免费观看a级毛片全部| 婷婷色综合www| avwww免费| 久久性视频一级片| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲国产看品久久| 国产精品一国产av| 欧美乱码精品一区二区三区| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产免费一区二区三区四区乱码| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 91国产中文字幕| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产一区有黄有色的免费视频| 中国美女看黄片| 91精品国产国语对白视频| av欧美777| 99精品久久久久人妻精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 欧美老熟妇乱子伦牲交| bbb黄色大片| 精品一区二区三区av网在线观看 | 黑丝袜美女国产一区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 久久久久久免费高清国产稀缺| 性高湖久久久久久久久免费观看| 婷婷丁香在线五月| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产免费现黄频在线看| 国产亚洲欧美精品永久| 999精品在线视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| xxxhd国产人妻xxx| 一区福利在线观看| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲精品成人av观看孕妇| 波野结衣二区三区在线| 国产亚洲欧美精品永久| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲精品久久午夜乱码| 免费少妇av软件| 香蕉国产在线看| 久久久久网色| 在线天堂中文资源库| 男女国产视频网站| 亚洲av在线观看美女高潮| 久久九九热精品免费| 免费日韩欧美在线观看| 国产一区二区激情短视频 | 丰满迷人的少妇在线观看| 国产成人系列免费观看| 亚洲五月婷婷丁香| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲专区中文字幕在线| 黄色一级大片看看| 亚洲欧洲国产日韩| 午夜日韩欧美国产| 国产在线观看jvid| 日韩av不卡免费在线播放| 国产97色在线日韩免费| xxxhd国产人妻xxx| 妹子高潮喷水视频| 宅男免费午夜| 这个男人来自地球电影免费观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 国产日韩欧美视频二区| 精品少妇黑人巨大在线播放| www.熟女人妻精品国产| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 秋霞在线观看毛片| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产成人av教育| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲七黄色美女视频| 精品少妇内射三级| 在线精品无人区一区二区三| √禁漫天堂资源中文www| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲五月婷婷丁香| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲av电影在线进入| 看免费av毛片| 亚洲第一青青草原| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 乱人伦中国视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产免费福利视频在线观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 十八禁人妻一区二区| 老司机亚洲免费影院| 国产亚洲精品久久久久5区| 热re99久久国产66热| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲成人免费av在线播放| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 欧美成人午夜精品| 交换朋友夫妻互换小说| 午夜福利影视在线免费观看| av有码第一页| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产成人91sexporn| 久久久久久人人人人人| 两性夫妻黄色片| 日韩一区二区三区影片| 久久久久久久久久久久大奶| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 99国产精品一区二区三区| 久久国产精品大桥未久av| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产欧美日韩一区二区三 | 久久九九热精品免费| 一边摸一边做爽爽视频免费| 高清黄色对白视频在线免费看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 久久久国产精品麻豆| 精品少妇久久久久久888优播| 久久久欧美国产精品| 欧美少妇被猛烈插入视频| 人妻 亚洲 视频| 激情五月婷婷亚洲| 午夜免费观看性视频| 国产精品三级大全| 少妇精品久久久久久久| 两人在一起打扑克的视频| 蜜桃国产av成人99| 亚洲美女黄色视频免费看| 在线观看www视频免费| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 高清黄色对白视频在线免费看| 欧美乱码精品一区二区三区| 午夜福利在线免费观看网站| 亚洲成人手机| 国产在线免费精品| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲国产精品999| 中国国产av一级| 宅男免费午夜| 欧美大码av| 精品一区二区三卡| 国产一区亚洲一区在线观看| tube8黄色片| 久久久久视频综合| tube8黄色片| 精品欧美一区二区三区在线| 国产在线观看jvid| 精品欧美一区二区三区在线| 极品少妇高潮喷水抽搐| 桃花免费在线播放| 在线观看人妻少妇| 日韩大片免费观看网站| 免费黄频网站在线观看国产| 两人在一起打扑克的视频| 丁香六月天网| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 桃花免费在线播放| 国产一区有黄有色的免费视频| av片东京热男人的天堂| 极品少妇高潮喷水抽搐| 成人国语在线视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| av网站在线播放免费| 男人添女人高潮全过程视频| 国产亚洲欧美精品永久| av欧美777| 欧美另类一区| 国产不卡av网站在线观看| 成人影院久久| 国产欧美日韩一区二区三 | 69精品国产乱码久久久| 久久精品久久久久久久性| 国产一区二区三区av在线| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久9热在线精品视频| 超碰97精品在线观看| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久人人97超碰香蕉20202| 操出白浆在线播放| 成人国产一区最新在线观看 | 成人国产一区最新在线观看 | 亚洲精品一区蜜桃| 最新在线观看一区二区三区 | 亚洲av日韩在线播放| 久久久久网色| 1024视频免费在线观看| 在线观看www视频免费| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产在线一区二区三区精| 国产成人欧美在线观看 | 看十八女毛片水多多多| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 成人国产一区最新在线观看 | 自线自在国产av| 在线av久久热| 国产真人三级小视频在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 国产91精品成人一区二区三区 | av有码第一页| 国产在视频线精品| 亚洲黑人精品在线| 精品福利观看| 欧美日韩成人在线一区二区| 黄色 视频免费看| bbb黄色大片| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 中国国产av一级| 久久久久精品人妻al黑| 高清不卡的av网站| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产片特级美女逼逼视频| 又大又爽又粗| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产深夜福利视频在线观看| 日韩大片免费观看网站| 久久狼人影院|