• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    以環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷為“假載體”印跡識別蛋白質(zhì)的研究

    2014-03-04 21:21:53張蕓郭敏杰等
    分析化學(xué) 2014年2期
    關(guān)鍵詞:聚乙烯醇

    張蕓 郭敏杰等

    摘要 實驗以聚乙烯醇分子為客體分子,與γ環(huán)糊精(γCD)分子組裝制備環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷(CDPPRs);在金屬離子存在下,以丙烯酰胺(AM)為單體,N,N亞甲基雙丙烯酰胺為交聯(lián)劑,以CDPPRs為“假載體”,制備了以牛血清白蛋白(BSA)為模板的分子印跡聚合物(cpMIP)。結(jié)果表明,隨著功能基化CDPPRs(CDPPRsAc)用量增加,印跡聚合物吸附量先增加后減小,當(dāng)CDPPRsAc與AM的質(zhì)量比為0.55時,印跡聚合物的吸附量最大;在Cu2+共存時,吸附量最高可達5.16 mg/g;將cpMIP用于4種混合蛋白溶液吸附,結(jié)果表明, 引入CDPPRs使印跡聚合物的特異性吸附能力明顯提高,特異性吸附量可提高約6倍。

    關(guān)鍵詞 分子印跡聚合物; 聚乙烯醇; 環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷; 假載體; 蛋白質(zhì)吸附

    1引言

    蛋白質(zhì)分子印跡聚合物(MIPs)是在模板蛋白存在下通過功能單體交聯(lián)聚合而成[1,2],MIPs可以選擇性地從混合物中吸附分離模板蛋白,其制備方法主要有包埋法[3]、表面印跡法[4],抗原決定基法[5]、輔助識別鏈輔助法[6,7]、碳納米管為載體法[8]及借助某些物質(zhì)或載體在二維或三維空間上進行蛋白質(zhì)印跡[9]方法等。環(huán)糊精(CD)與鏈狀大分子通過非共價鍵相互作用組裝超分子聚集體,可形成準(zhǔn)聚輪烷或者聚輪烷(CDPPRs)[10]。目前,CD用于印跡氨基酸、多肽的研究較多[11],用于蛋白質(zhì)分子印跡的研究很少[12]。 Zhang等[13]以硅膠為載體,將βCD與丙烯酰胺進行鍵合制備MIPs。Nagaoka等[14]將環(huán)糊精引入印跡體系,以三肽為模板分子,分別在硅膠、氧化鋁薄膜及聚羥乙基丙烯酸甲酯表面制備了印跡聚合物。

    本實驗將環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷充當(dāng)“假載體”,參與交聯(lián)聚合過程而被固定在聚合物網(wǎng)絡(luò)中,以實現(xiàn)功能單體與目標(biāo)分子良好的空間匹配,從而達到對模板蛋白的專一性識別[15]。印跡吸附過程見圖1。本實驗提出的環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷這種“假載體”有別于小分子單體,由于CD是低聚環(huán)狀物,結(jié)構(gòu)類似一截頂圓錐,它能夠在體系聚合過程中在橫向和縱向空間上較好的維持與蛋白質(zhì)匹配的空間結(jié)構(gòu)而區(qū)別于普通的包埋法印跡。CD的空腔直徑約為1 nm,其縱向尺寸也不超過10 nm, 因此對多數(shù)三維線長在10 nm這個數(shù)量級上的蛋白質(zhì)而言, CDPPRs并不提供一個真正的載體作用,因而稱之為“假載體”。

    2實驗部分

    2.1儀器與試劑

    DYCZ24DN型電泳儀(北京市六一儀器廠); TU1800PC紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司); MIPAⅡXMU/H掃描電鏡(美國SIRION公司)。

    聚乙烯醇(PVA,醇解度80%,MW=9000~10000,日本Kuraray公司); γ環(huán)糊精(γCD, 藥品級, 德國Wacker公司); 牛血清白蛋白第V組分(BSA)、大豆蛋白酶抑制劑(SBTL)、卵清蛋白(OVA)、溶菌酶(LYS),天津博迪化工有限公司;其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

    2.2實驗方法

    2.2.1CDPPRs的制備稱1.00 g PVA于100 mL圓底燒瓶中,用20.0 mL水溶解;加入3.00 g γCD, 80 ℃下回流12 h,在室溫下靜置12 h,循環(huán)5次。將反應(yīng)物用乙醇沉淀,經(jīng)水洗、分離、真空干燥,制得CDPPRs。稱2.00 g CDPPRs,溶于40.0 mL二甲基亞砜中,逐滴加入2.00 mL 丙烯酰氯(AC)。4 h后,用乙醇沉淀,用乙醚洗滌,真空干燥后得到CDPPRsAc。

    2.2.2印跡聚合物MIPs的制備依次將丙烯酰胺AM、N,N′亞甲基雙丙烯酰胺MBA、CDPPRsAc、模板蛋白BSA加入到裝有20.0 mL去離子水的三口燒瓶中,冰水浴中攪拌1 h,通氮氣,加入過硫酸銨(APS),繼續(xù)攪拌0.5 h后加入Na2SO3溶液,40℃反應(yīng)4 h,得到cpMIPs。空白印跡聚合物NMIP的合成,除不加入模板分子外,其它與制備cpMIPs印跡聚合物的方法相同;對比組印跡聚合物aMIP的合成,除不加CDPPRsAc外,其它與制備cpMIPs印跡聚合物的方法相同。

    2.2.3 印跡聚合物吸附性能測試(1)吸附動力學(xué)實驗將各組MIPs加入到0.50 g/L BSA溶液中,于4 ℃吸附,分別于0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,6.0,12.0和24.0 h取上層清液1.0 mL,檢測MIPs對模板蛋白BSA的吸附量Q。(2)競爭吸附實驗稱取1.00 g 各組MIPs,加入到10 mL蛋白質(zhì)混合溶液(BSA,LYS,OVA和SBTL濃度均為0.50 g/L)中,4 ℃吸附12 h。取聚合物各0.10 g,依次用1.0 mL的0.15, 0.50和2.0 mol/L的KCl溶液洗滌。取洗脫蛋白液各10 μL上樣,恒流條件下進行十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE),用考馬斯藍染色進行分析。

    3結(jié)果與討論

    3.1CDPPRs結(jié)構(gòu)分析

    CD為高旋光性物質(zhì),PVA旋光度為零,當(dāng)兩者形成組裝體后,分子的空間形象及分子對稱性發(fā)生了較大的改變。兩者混合物的比旋光度與γCD的比旋光度相同,均為+175°;而組裝體的比旋光度為+85°,初步證明聚乙烯醇與γ環(huán)糊精進行了包結(jié)。

    CDPPRs的核磁譜圖(圖2c)進一步證明主客體間的各種弱作用相互疊加形成了較強的超分子作用。3.7~3.9 ppm的峰是γCD的3,5位的質(zhì)子和PVA分子鏈上與羥基相連碳上的質(zhì)子的共同貢獻,對比圖2b與2c可見,該部分貢獻并不是γCD與聚乙烯醇兩種物質(zhì)質(zhì)子的簡單物理加和,峰形已經(jīng)發(fā)生變化。

    3.2蛋白質(zhì)印跡聚合物的制備

    3.2.1CDPPRsAc的含量對MIPs吸附量的影響在實驗范圍內(nèi),隨著CDPPRsAc用量的增加,印跡聚合物的吸附量增大(圖4),這應(yīng)歸因于環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷的引入使識別位點增多。當(dāng)CDPPRsAc用量繼續(xù)增加時,印跡聚合物的吸附量下降,這可能是因為過多的環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷使得印跡聚合物的交聯(lián)過于密集,不利于印跡聚合物的識別。在實驗范圍內(nèi),當(dāng)CDPPRsAc與AM的質(zhì)量比為1.1時,此時的印跡聚合物的吸附量最大,為3.54 mg/g。

    3.2.2金屬離子用量對MIPs吸附量的影響金屬離子可以特異性地鍵合蛋白質(zhì)的某些官能團。分別使用Ni2+和Cu2+輔助蛋白質(zhì)印跡識別過程,金屬離子與模板所形成的空間取向,在環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷所在的聚合網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中能夠被較好地保留下來,因此可提高對模板分子的選擇性識別(表1)。加入金屬離子的MIPs比未加入金屬離子的MIPs吸附量高,這可能是因為加入金屬離子后,CDPPRAc、功能單體與模板蛋白之間可以通過金屬離子形成穩(wěn)定的配位作用,從而產(chǎn)生了更多的有效識別位點,提高對模板蛋白的識別能力。實驗范圍內(nèi),引入Cu2+的MIPs對模板蛋白的吸附量比引入Ni2+的MIPs要高一些。

    摘要 實驗以聚乙烯醇分子為客體分子,與γ環(huán)糊精(γCD)分子組裝制備環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷(CDPPRs);在金屬離子存在下,以丙烯酰胺(AM)為單體,N,N亞甲基雙丙烯酰胺為交聯(lián)劑,以CDPPRs為“假載體”,制備了以牛血清白蛋白(BSA)為模板的分子印跡聚合物(cpMIP)。結(jié)果表明,隨著功能基化CDPPRs(CDPPRsAc)用量增加,印跡聚合物吸附量先增加后減小,當(dāng)CDPPRsAc與AM的質(zhì)量比為0.55時,印跡聚合物的吸附量最大;在Cu2+共存時,吸附量最高可達5.16 mg/g;將cpMIP用于4種混合蛋白溶液吸附,結(jié)果表明, 引入CDPPRs使印跡聚合物的特異性吸附能力明顯提高,特異性吸附量可提高約6倍。

    關(guān)鍵詞 分子印跡聚合物; 聚乙烯醇; 環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷; 假載體; 蛋白質(zhì)吸附

    1引言

    蛋白質(zhì)分子印跡聚合物(MIPs)是在模板蛋白存在下通過功能單體交聯(lián)聚合而成[1,2],MIPs可以選擇性地從混合物中吸附分離模板蛋白,其制備方法主要有包埋法[3]、表面印跡法[4],抗原決定基法[5]、輔助識別鏈輔助法[6,7]、碳納米管為載體法[8]及借助某些物質(zhì)或載體在二維或三維空間上進行蛋白質(zhì)印跡[9]方法等。環(huán)糊精(CD)與鏈狀大分子通過非共價鍵相互作用組裝超分子聚集體,可形成準(zhǔn)聚輪烷或者聚輪烷(CDPPRs)[10]。目前,CD用于印跡氨基酸、多肽的研究較多[11],用于蛋白質(zhì)分子印跡的研究很少[12]。 Zhang等[13]以硅膠為載體,將βCD與丙烯酰胺進行鍵合制備MIPs。Nagaoka等[14]將環(huán)糊精引入印跡體系,以三肽為模板分子,分別在硅膠、氧化鋁薄膜及聚羥乙基丙烯酸甲酯表面制備了印跡聚合物。

    本實驗將環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷充當(dāng)“假載體”,參與交聯(lián)聚合過程而被固定在聚合物網(wǎng)絡(luò)中,以實現(xiàn)功能單體與目標(biāo)分子良好的空間匹配,從而達到對模板蛋白的專一性識別[15]。印跡吸附過程見圖1。本實驗提出的環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷這種“假載體”有別于小分子單體,由于CD是低聚環(huán)狀物,結(jié)構(gòu)類似一截頂圓錐,它能夠在體系聚合過程中在橫向和縱向空間上較好的維持與蛋白質(zhì)匹配的空間結(jié)構(gòu)而區(qū)別于普通的包埋法印跡。CD的空腔直徑約為1 nm,其縱向尺寸也不超過10 nm, 因此對多數(shù)三維線長在10 nm這個數(shù)量級上的蛋白質(zhì)而言, CDPPRs并不提供一個真正的載體作用,因而稱之為“假載體”。

    2實驗部分

    2.1儀器與試劑

    DYCZ24DN型電泳儀(北京市六一儀器廠); TU1800PC紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司); MIPAⅡXMU/H掃描電鏡(美國SIRION公司)。

    聚乙烯醇(PVA,醇解度80%,MW=9000~10000,日本Kuraray公司); γ環(huán)糊精(γCD, 藥品級, 德國Wacker公司); 牛血清白蛋白第V組分(BSA)、大豆蛋白酶抑制劑(SBTL)、卵清蛋白(OVA)、溶菌酶(LYS),天津博迪化工有限公司;其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

    2.2實驗方法

    2.2.1CDPPRs的制備稱1.00 g PVA于100 mL圓底燒瓶中,用20.0 mL水溶解;加入3.00 g γCD, 80 ℃下回流12 h,在室溫下靜置12 h,循環(huán)5次。將反應(yīng)物用乙醇沉淀,經(jīng)水洗、分離、真空干燥,制得CDPPRs。稱2.00 g CDPPRs,溶于40.0 mL二甲基亞砜中,逐滴加入2.00 mL 丙烯酰氯(AC)。4 h后,用乙醇沉淀,用乙醚洗滌,真空干燥后得到CDPPRsAc。

    2.2.2印跡聚合物MIPs的制備依次將丙烯酰胺AM、N,N′亞甲基雙丙烯酰胺MBA、CDPPRsAc、模板蛋白BSA加入到裝有20.0 mL去離子水的三口燒瓶中,冰水浴中攪拌1 h,通氮氣,加入過硫酸銨(APS),繼續(xù)攪拌0.5 h后加入Na2SO3溶液,40℃反應(yīng)4 h,得到cpMIPs??瞻子≯E聚合物NMIP的合成,除不加入模板分子外,其它與制備cpMIPs印跡聚合物的方法相同;對比組印跡聚合物aMIP的合成,除不加CDPPRsAc外,其它與制備cpMIPs印跡聚合物的方法相同。

    2.2.3 印跡聚合物吸附性能測試(1)吸附動力學(xué)實驗將各組MIPs加入到0.50 g/L BSA溶液中,于4 ℃吸附,分別于0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,6.0,12.0和24.0 h取上層清液1.0 mL,檢測MIPs對模板蛋白BSA的吸附量Q。(2)競爭吸附實驗稱取1.00 g 各組MIPs,加入到10 mL蛋白質(zhì)混合溶液(BSA,LYS,OVA和SBTL濃度均為0.50 g/L)中,4 ℃吸附12 h。取聚合物各0.10 g,依次用1.0 mL的0.15, 0.50和2.0 mol/L的KCl溶液洗滌。取洗脫蛋白液各10 μL上樣,恒流條件下進行十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE),用考馬斯藍染色進行分析。

    3結(jié)果與討論

    3.1CDPPRs結(jié)構(gòu)分析

    CD為高旋光性物質(zhì),PVA旋光度為零,當(dāng)兩者形成組裝體后,分子的空間形象及分子對稱性發(fā)生了較大的改變。兩者混合物的比旋光度與γCD的比旋光度相同,均為+175°;而組裝體的比旋光度為+85°,初步證明聚乙烯醇與γ環(huán)糊精進行了包結(jié)。

    CDPPRs的核磁譜圖(圖2c)進一步證明主客體間的各種弱作用相互疊加形成了較強的超分子作用。3.7~3.9 ppm的峰是γCD的3,5位的質(zhì)子和PVA分子鏈上與羥基相連碳上的質(zhì)子的共同貢獻,對比圖2b與2c可見,該部分貢獻并不是γCD與聚乙烯醇兩種物質(zhì)質(zhì)子的簡單物理加和,峰形已經(jīng)發(fā)生變化。

    3.2蛋白質(zhì)印跡聚合物的制備

    3.2.1CDPPRsAc的含量對MIPs吸附量的影響在實驗范圍內(nèi),隨著CDPPRsAc用量的增加,印跡聚合物的吸附量增大(圖4),這應(yīng)歸因于環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷的引入使識別位點增多。當(dāng)CDPPRsAc用量繼續(xù)增加時,印跡聚合物的吸附量下降,這可能是因為過多的環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷使得印跡聚合物的交聯(lián)過于密集,不利于印跡聚合物的識別。在實驗范圍內(nèi),當(dāng)CDPPRsAc與AM的質(zhì)量比為1.1時,此時的印跡聚合物的吸附量最大,為3.54 mg/g。

    3.2.2金屬離子用量對MIPs吸附量的影響金屬離子可以特異性地鍵合蛋白質(zhì)的某些官能團。分別使用Ni2+和Cu2+輔助蛋白質(zhì)印跡識別過程,金屬離子與模板所形成的空間取向,在環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷所在的聚合網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中能夠被較好地保留下來,因此可提高對模板分子的選擇性識別(表1)。加入金屬離子的MIPs比未加入金屬離子的MIPs吸附量高,這可能是因為加入金屬離子后,CDPPRAc、功能單體與模板蛋白之間可以通過金屬離子形成穩(wěn)定的配位作用,從而產(chǎn)生了更多的有效識別位點,提高對模板蛋白的識別能力。實驗范圍內(nèi),引入Cu2+的MIPs對模板蛋白的吸附量比引入Ni2+的MIPs要高一些。

    摘要 實驗以聚乙烯醇分子為客體分子,與γ環(huán)糊精(γCD)分子組裝制備環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷(CDPPRs);在金屬離子存在下,以丙烯酰胺(AM)為單體,N,N亞甲基雙丙烯酰胺為交聯(lián)劑,以CDPPRs為“假載體”,制備了以牛血清白蛋白(BSA)為模板的分子印跡聚合物(cpMIP)。結(jié)果表明,隨著功能基化CDPPRs(CDPPRsAc)用量增加,印跡聚合物吸附量先增加后減小,當(dāng)CDPPRsAc與AM的質(zhì)量比為0.55時,印跡聚合物的吸附量最大;在Cu2+共存時,吸附量最高可達5.16 mg/g;將cpMIP用于4種混合蛋白溶液吸附,結(jié)果表明, 引入CDPPRs使印跡聚合物的特異性吸附能力明顯提高,特異性吸附量可提高約6倍。

    關(guān)鍵詞 分子印跡聚合物; 聚乙烯醇; 環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷; 假載體; 蛋白質(zhì)吸附

    1引言

    蛋白質(zhì)分子印跡聚合物(MIPs)是在模板蛋白存在下通過功能單體交聯(lián)聚合而成[1,2],MIPs可以選擇性地從混合物中吸附分離模板蛋白,其制備方法主要有包埋法[3]、表面印跡法[4],抗原決定基法[5]、輔助識別鏈輔助法[6,7]、碳納米管為載體法[8]及借助某些物質(zhì)或載體在二維或三維空間上進行蛋白質(zhì)印跡[9]方法等。環(huán)糊精(CD)與鏈狀大分子通過非共價鍵相互作用組裝超分子聚集體,可形成準(zhǔn)聚輪烷或者聚輪烷(CDPPRs)[10]。目前,CD用于印跡氨基酸、多肽的研究較多[11],用于蛋白質(zhì)分子印跡的研究很少[12]。 Zhang等[13]以硅膠為載體,將βCD與丙烯酰胺進行鍵合制備MIPs。Nagaoka等[14]將環(huán)糊精引入印跡體系,以三肽為模板分子,分別在硅膠、氧化鋁薄膜及聚羥乙基丙烯酸甲酯表面制備了印跡聚合物。

    本實驗將環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷充當(dāng)“假載體”,參與交聯(lián)聚合過程而被固定在聚合物網(wǎng)絡(luò)中,以實現(xiàn)功能單體與目標(biāo)分子良好的空間匹配,從而達到對模板蛋白的專一性識別[15]。印跡吸附過程見圖1。本實驗提出的環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷這種“假載體”有別于小分子單體,由于CD是低聚環(huán)狀物,結(jié)構(gòu)類似一截頂圓錐,它能夠在體系聚合過程中在橫向和縱向空間上較好的維持與蛋白質(zhì)匹配的空間結(jié)構(gòu)而區(qū)別于普通的包埋法印跡。CD的空腔直徑約為1 nm,其縱向尺寸也不超過10 nm, 因此對多數(shù)三維線長在10 nm這個數(shù)量級上的蛋白質(zhì)而言, CDPPRs并不提供一個真正的載體作用,因而稱之為“假載體”。

    2實驗部分

    2.1儀器與試劑

    DYCZ24DN型電泳儀(北京市六一儀器廠); TU1800PC紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司); MIPAⅡXMU/H掃描電鏡(美國SIRION公司)。

    聚乙烯醇(PVA,醇解度80%,MW=9000~10000,日本Kuraray公司); γ環(huán)糊精(γCD, 藥品級, 德國Wacker公司); 牛血清白蛋白第V組分(BSA)、大豆蛋白酶抑制劑(SBTL)、卵清蛋白(OVA)、溶菌酶(LYS),天津博迪化工有限公司;其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

    2.2實驗方法

    2.2.1CDPPRs的制備稱1.00 g PVA于100 mL圓底燒瓶中,用20.0 mL水溶解;加入3.00 g γCD, 80 ℃下回流12 h,在室溫下靜置12 h,循環(huán)5次。將反應(yīng)物用乙醇沉淀,經(jīng)水洗、分離、真空干燥,制得CDPPRs。稱2.00 g CDPPRs,溶于40.0 mL二甲基亞砜中,逐滴加入2.00 mL 丙烯酰氯(AC)。4 h后,用乙醇沉淀,用乙醚洗滌,真空干燥后得到CDPPRsAc。

    2.2.2印跡聚合物MIPs的制備依次將丙烯酰胺AM、N,N′亞甲基雙丙烯酰胺MBA、CDPPRsAc、模板蛋白BSA加入到裝有20.0 mL去離子水的三口燒瓶中,冰水浴中攪拌1 h,通氮氣,加入過硫酸銨(APS),繼續(xù)攪拌0.5 h后加入Na2SO3溶液,40℃反應(yīng)4 h,得到cpMIPs??瞻子≯E聚合物NMIP的合成,除不加入模板分子外,其它與制備cpMIPs印跡聚合物的方法相同;對比組印跡聚合物aMIP的合成,除不加CDPPRsAc外,其它與制備cpMIPs印跡聚合物的方法相同。

    2.2.3 印跡聚合物吸附性能測試(1)吸附動力學(xué)實驗將各組MIPs加入到0.50 g/L BSA溶液中,于4 ℃吸附,分別于0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,6.0,12.0和24.0 h取上層清液1.0 mL,檢測MIPs對模板蛋白BSA的吸附量Q。(2)競爭吸附實驗稱取1.00 g 各組MIPs,加入到10 mL蛋白質(zhì)混合溶液(BSA,LYS,OVA和SBTL濃度均為0.50 g/L)中,4 ℃吸附12 h。取聚合物各0.10 g,依次用1.0 mL的0.15, 0.50和2.0 mol/L的KCl溶液洗滌。取洗脫蛋白液各10 μL上樣,恒流條件下進行十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE),用考馬斯藍染色進行分析。

    3結(jié)果與討論

    3.1CDPPRs結(jié)構(gòu)分析

    CD為高旋光性物質(zhì),PVA旋光度為零,當(dāng)兩者形成組裝體后,分子的空間形象及分子對稱性發(fā)生了較大的改變。兩者混合物的比旋光度與γCD的比旋光度相同,均為+175°;而組裝體的比旋光度為+85°,初步證明聚乙烯醇與γ環(huán)糊精進行了包結(jié)。

    CDPPRs的核磁譜圖(圖2c)進一步證明主客體間的各種弱作用相互疊加形成了較強的超分子作用。3.7~3.9 ppm的峰是γCD的3,5位的質(zhì)子和PVA分子鏈上與羥基相連碳上的質(zhì)子的共同貢獻,對比圖2b與2c可見,該部分貢獻并不是γCD與聚乙烯醇兩種物質(zhì)質(zhì)子的簡單物理加和,峰形已經(jīng)發(fā)生變化。

    3.2蛋白質(zhì)印跡聚合物的制備

    3.2.1CDPPRsAc的含量對MIPs吸附量的影響在實驗范圍內(nèi),隨著CDPPRsAc用量的增加,印跡聚合物的吸附量增大(圖4),這應(yīng)歸因于環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷的引入使識別位點增多。當(dāng)CDPPRsAc用量繼續(xù)增加時,印跡聚合物的吸附量下降,這可能是因為過多的環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷使得印跡聚合物的交聯(lián)過于密集,不利于印跡聚合物的識別。在實驗范圍內(nèi),當(dāng)CDPPRsAc與AM的質(zhì)量比為1.1時,此時的印跡聚合物的吸附量最大,為3.54 mg/g。

    3.2.2金屬離子用量對MIPs吸附量的影響金屬離子可以特異性地鍵合蛋白質(zhì)的某些官能團。分別使用Ni2+和Cu2+輔助蛋白質(zhì)印跡識別過程,金屬離子與模板所形成的空間取向,在環(huán)糊精準(zhǔn)聚輪烷所在的聚合網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中能夠被較好地保留下來,因此可提高對模板分子的選擇性識別(表1)。加入金屬離子的MIPs比未加入金屬離子的MIPs吸附量高,這可能是因為加入金屬離子后,CDPPRAc、功能單體與模板蛋白之間可以通過金屬離子形成穩(wěn)定的配位作用,從而產(chǎn)生了更多的有效識別位點,提高對模板蛋白的識別能力。實驗范圍內(nèi),引入Cu2+的MIPs對模板蛋白的吸附量比引入Ni2+的MIPs要高一些。

    猜你喜歡
    聚乙烯醇
    海藻酸鈉/聚乙烯醇基復(fù)合凝膠材料的制備及對Pb2+吸附性能研究
    改性復(fù)合聚乙烯醇食品包裝膜研究進展
    聚乙烯醇中紅外光譜研究
    一種阻燃型聚乙烯醇氣凝膠及其制備方法
    聚乙烯醇膠粘劑在育秧紙缽中的應(yīng)用
    天津造紙(2016年1期)2017-01-15 14:03:28
    聚乙烯醇/二氧化鈦復(fù)合納米纖維膜的制備和改性
    聚乙烯醇/綠原酸共混物的制備及性能
    中國塑料(2016年7期)2016-04-16 05:25:46
    聚乙烯醇/淀粉納米晶復(fù)合膜的制備及表征
    中國塑料(2015年3期)2015-11-27 03:42:15
    聚乙烯醇對過氧化銀電極分解和電性能的影響
    發(fā)泡聚乙烯醇的制備及性能研究
    河南科技(2014年7期)2014-02-27 14:11:19
    国产真实乱freesex| 亚洲一区二区三区色噜噜| 少妇人妻一区二区三区视频| 欧美一区二区亚洲| 亚洲一区高清亚洲精品| 欧美最黄视频在线播放免费| 日本-黄色视频高清免费观看| 一区福利在线观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 一级毛片aaaaaa免费看小| 小说图片视频综合网站| 精品一区二区免费观看| 久久久久九九精品影院| 亚洲国产精品久久男人天堂| 波野结衣二区三区在线| 搡女人真爽免费视频火全软件| 综合色av麻豆| 国产精品久久久久久久电影| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 18禁在线播放成人免费| 午夜激情福利司机影院| 中国美白少妇内射xxxbb| 在线观看av片永久免费下载| 国产亚洲91精品色在线| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲电影在线观看av| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产精品一及| 亚洲图色成人| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国内精品美女久久久久久| 日本成人三级电影网站| 国产精品久久久久久久电影| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| av天堂在线播放| 欧美bdsm另类| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲无线在线观看| 69av精品久久久久久| 亚洲四区av| 欧美色欧美亚洲另类二区| 成熟少妇高潮喷水视频| 中文字幕久久专区| 久久久久免费精品人妻一区二区| 精品不卡国产一区二区三区| av天堂在线播放| 亚洲无线在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 久久久久国产网址| 丰满的人妻完整版| 久久久久网色| 99热精品在线国产| 日本与韩国留学比较| 中国国产av一级| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 久久人人精品亚洲av| 黄色视频,在线免费观看| 精品无人区乱码1区二区| 在线国产一区二区在线| 亚洲精品成人久久久久久| 九色成人免费人妻av| 六月丁香七月| 免费看a级黄色片| 亚洲第一电影网av| 美女 人体艺术 gogo| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 青春草国产在线视频 | 亚洲三级黄色毛片| 国产伦在线观看视频一区| 欧美区成人在线视频| 此物有八面人人有两片| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 亚洲内射少妇av| 嫩草影院入口| 一进一出抽搐动态| 99热这里只有精品一区| 联通29元200g的流量卡| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 美女大奶头视频| 日韩av在线大香蕉| 成人美女网站在线观看视频| 神马国产精品三级电影在线观看| 成人午夜高清在线视频| 99久久人妻综合| 小说图片视频综合网站| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 色播亚洲综合网| 一级黄片播放器| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产亚洲精品av在线| 欧美日本亚洲视频在线播放| 夜夜爽天天搞| 成人综合一区亚洲| ponron亚洲| 久久精品综合一区二区三区| 特大巨黑吊av在线直播| 日本黄大片高清| 成年女人永久免费观看视频| 99久国产av精品| 国产伦一二天堂av在线观看| 精品一区二区免费观看| 51国产日韩欧美| 亚洲成av人片在线播放无| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 欧美性感艳星| 国产乱人偷精品视频| 女同久久另类99精品国产91| 久久久久久久午夜电影| 久久久久性生活片| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 成年女人永久免费观看视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 精品不卡国产一区二区三区| 青春草亚洲视频在线观看| 女人被狂操c到高潮| www.av在线官网国产| 午夜a级毛片| 午夜免费激情av| 精品久久久久久久久久免费视频| 只有这里有精品99| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 美女被艹到高潮喷水动态| 大型黄色视频在线免费观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 在线播放国产精品三级| 亚洲精品自拍成人| 男女视频在线观看网站免费| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲精品自拍成人| 精品久久久久久久末码| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 日本与韩国留学比较| 99国产精品一区二区蜜桃av| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 永久网站在线| 午夜亚洲福利在线播放| 久久人妻av系列| 成人毛片60女人毛片免费| 乱人视频在线观看| 精品日产1卡2卡| 欧美区成人在线视频| 国产av在哪里看| 日本爱情动作片www.在线观看| 99久久成人亚洲精品观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 51国产日韩欧美| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 欧美成人免费av一区二区三区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 99九九线精品视频在线观看视频| 精品久久久久久成人av| 亚洲中文字幕日韩| 黄色视频,在线免费观看| 成年av动漫网址| 三级国产精品欧美在线观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲人成网站高清观看| 免费观看a级毛片全部| 国产精品久久视频播放| 中文字幕av在线有码专区| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲高清免费不卡视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久久色成人| 国产毛片a区久久久久| 免费电影在线观看免费观看| 麻豆av噜噜一区二区三区| 久久久久久久久久久免费av| 国产视频首页在线观看| 久久久久久久久久久丰满| 悠悠久久av| 校园人妻丝袜中文字幕| av专区在线播放| 亚洲精品成人久久久久久| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产成人freesex在线| 日日撸夜夜添| 成人鲁丝片一二三区免费| 小说图片视频综合网站| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲久久久久久中文字幕| 天堂中文最新版在线下载 | 国产成人a区在线观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 一区二区三区四区激情视频 | a级毛片a级免费在线| 精品日产1卡2卡| 亚洲一区二区三区色噜噜| 偷拍熟女少妇极品色| 国产综合懂色| av在线观看视频网站免费| 夜夜爽天天搞| 国产伦一二天堂av在线观看| 色哟哟·www| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产高潮美女av| 欧美zozozo另类| 成人综合一区亚洲| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产69精品久久久久777片| 欧美区成人在线视频| a级毛片免费高清观看在线播放| 桃色一区二区三区在线观看| 一个人看视频在线观看www免费| 悠悠久久av| av女优亚洲男人天堂| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 12—13女人毛片做爰片一| 青春草亚洲视频在线观看| 极品教师在线视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 成人午夜高清在线视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲av成人av| 成人av在线播放网站| 看片在线看免费视频| 2022亚洲国产成人精品| 综合色丁香网| 晚上一个人看的免费电影| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 成人性生交大片免费视频hd| 国产精品野战在线观看| 日韩av不卡免费在线播放| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 性欧美人与动物交配| 岛国毛片在线播放| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 精品一区二区三区视频在线| 美女被艹到高潮喷水动态| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲最大成人av| 久久人人爽人人片av| av在线亚洲专区| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 欧美zozozo另类| 天堂影院成人在线观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产男人的电影天堂91| 久久久久网色| 欧美日本视频| 久久人人精品亚洲av| 国产黄片视频在线免费观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲自偷自拍三级| 一级黄片播放器| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 97超视频在线观看视频| 日本一二三区视频观看| 男女那种视频在线观看| 91久久精品电影网| 国产精品精品国产色婷婷| 欧美xxxx性猛交bbbb| 看片在线看免费视频| 日本五十路高清| 日本av手机在线免费观看| 91精品国产九色| 一个人看的www免费观看视频| 99久久精品热视频| 亚洲欧美清纯卡通| 国产色婷婷99| 日本-黄色视频高清免费观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频 | 欧美人与善性xxx| 美女大奶头视频| 欧美成人a在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产三级在线视频| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 黄色日韩在线| 久久精品国产清高在天天线| 国产真实乱freesex| 国产伦理片在线播放av一区 | 97热精品久久久久久| 欧美一级a爱片免费观看看| 欧美又色又爽又黄视频| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲久久久久久中文字幕| 日本-黄色视频高清免费观看| 97在线视频观看| 国产视频内射| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产伦精品一区二区三区视频9| 成人无遮挡网站| 日韩视频在线欧美| 波多野结衣高清无吗| 天美传媒精品一区二区| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区免费观看| avwww免费| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲成av人片在线播放无| 少妇丰满av| 一本久久中文字幕| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久99精品国语久久久| 两个人视频免费观看高清| 中文在线观看免费www的网站| 一区二区三区高清视频在线| 欧美性感艳星| 别揉我奶头 嗯啊视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 青春草亚洲视频在线观看| 99久久人妻综合| 精品人妻偷拍中文字幕| 一级毛片久久久久久久久女| 日本在线视频免费播放| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 一级毛片电影观看 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲在线自拍视频| av天堂在线播放| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲av中文av极速乱| 中国美女看黄片| 国产在线男女| 91av网一区二区| 在线观看午夜福利视频| 99热精品在线国产| 婷婷色综合大香蕉| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲三级黄色毛片| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 我要搜黄色片| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 美女 人体艺术 gogo| 黄色日韩在线| 97在线视频观看| 如何舔出高潮| 欧美三级亚洲精品| 超碰av人人做人人爽久久| 国产精品久久电影中文字幕| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲七黄色美女视频| 国产日韩欧美在线精品| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 日韩欧美精品免费久久| 看黄色毛片网站| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 91精品国产九色| 永久网站在线| 免费观看人在逋| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 国产大屁股一区二区在线视频| 国产精品福利在线免费观看| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 男人狂女人下面高潮的视频| 免费观看在线日韩| а√天堂www在线а√下载| 免费一级毛片在线播放高清视频| 婷婷六月久久综合丁香| 少妇熟女欧美另类| 亚洲第一区二区三区不卡| 18禁在线播放成人免费| 亚洲天堂国产精品一区在线| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产亚洲av嫩草精品影院| 特级一级黄色大片| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产视频内射| 国产成人精品久久久久久| 卡戴珊不雅视频在线播放| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲成人久久爱视频| 在线观看免费视频日本深夜| or卡值多少钱| 精品久久久久久久久久免费视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 1024手机看黄色片| 黄色日韩在线| 校园人妻丝袜中文字幕| 成人欧美大片| 看非洲黑人一级黄片| 在线免费十八禁| 日韩成人伦理影院| 亚洲av男天堂| 国产精品一二三区在线看| 日本成人三级电影网站| 青青草视频在线视频观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 99热网站在线观看| 性欧美人与动物交配| 边亲边吃奶的免费视频| 69av精品久久久久久| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲av.av天堂| 啦啦啦啦在线视频资源| 身体一侧抽搐| av卡一久久| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲自偷自拍三级| 内地一区二区视频在线| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久午夜亚洲精品久久| kizo精华| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲欧美精品专区久久| 可以在线观看的亚洲视频| av福利片在线观看| 一区二区三区四区激情视频 | 成年女人永久免费观看视频| 丝袜喷水一区| 欧美日韩精品成人综合77777| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产精华一区二区三区| 亚洲欧美日韩东京热| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 99热这里只有精品一区| 久久人人精品亚洲av| 国产淫片久久久久久久久| 在线a可以看的网站| 观看美女的网站| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产亚洲91精品色在线| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 日韩中字成人| 夜夜夜夜夜久久久久| ponron亚洲| 99久国产av精品国产电影| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久久久久大精品| 99热精品在线国产| 久久这里只有精品中国| 如何舔出高潮| 欧美日本亚洲视频在线播放| 午夜激情欧美在线| 12—13女人毛片做爰片一| 禁无遮挡网站| h日本视频在线播放| 国产精品日韩av在线免费观看| 又爽又黄a免费视频| 国产伦精品一区二区三区视频9| 91精品国产九色| 亚洲欧美精品专区久久| 能在线免费观看的黄片| 国产成人精品久久久久久| 国产精品久久视频播放| 欧美不卡视频在线免费观看| 天美传媒精品一区二区| 色5月婷婷丁香| 免费看美女性在线毛片视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 天堂√8在线中文| 日韩欧美国产在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 嘟嘟电影网在线观看| 国产亚洲5aaaaa淫片| 成人av在线播放网站| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久国产乱子免费精品| 免费大片18禁| 国产视频内射| 男的添女的下面高潮视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产精品一区二区在线观看99 | 高清在线视频一区二区三区 | 国产一级毛片七仙女欲春2| 一本久久精品| 亚洲av二区三区四区| 日日干狠狠操夜夜爽| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 插阴视频在线观看视频| av福利片在线观看| 午夜福利在线观看吧| 三级经典国产精品| 亚洲七黄色美女视频| 少妇熟女aⅴ在线视频| 午夜亚洲福利在线播放| 国产亚洲精品av在线| 丰满乱子伦码专区| 国产伦精品一区二区三区四那| 99热只有精品国产| 午夜久久久久精精品| 日韩中字成人| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 日本色播在线视频| 婷婷色av中文字幕| 欧美日本亚洲视频在线播放| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产极品天堂在线| 99热6这里只有精品| 日韩av不卡免费在线播放| 精品人妻熟女av久视频| 成人毛片60女人毛片免费| 禁无遮挡网站| 亚洲电影在线观看av| 国内精品宾馆在线| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 干丝袜人妻中文字幕| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 久久人人爽人人片av| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产精品一区www在线观看| 国产高潮美女av| 日本一二三区视频观看| 成年女人看的毛片在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲精品国产av成人精品| 美女脱内裤让男人舔精品视频 | 免费观看精品视频网站| 亚洲av成人av| 天堂网av新在线| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久久精品大字幕| 亚洲乱码一区二区免费版| 国内精品宾馆在线| 熟女电影av网| 青青草视频在线视频观看| 日韩大尺度精品在线看网址| 五月玫瑰六月丁香| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产精品一区二区三区四区久久| 精品人妻一区二区三区麻豆| 99热只有精品国产| 精品久久久噜噜| 国产一区二区在线av高清观看| 成人欧美大片| 色综合站精品国产| 国产av麻豆久久久久久久| 国产一区二区三区在线臀色熟女| av在线亚洲专区| 国产黄色小视频在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲精品影视一区二区三区av| 人体艺术视频欧美日本| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产伦在线观看视频一区| 岛国在线免费视频观看| 久久久久久久久久久免费av| 99国产精品一区二区蜜桃av| 婷婷精品国产亚洲av| 一本久久精品| 国产极品精品免费视频能看的| 国产精品一区www在线观看| 久久久午夜欧美精品| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 国产欧美日韩精品一区二区| 97在线视频观看| av在线亚洲专区| 两个人视频免费观看高清| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲四区av| 日韩av不卡免费在线播放| 一级av片app| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产高清三级在线| 国产精品av视频在线免费观看| 午夜久久久久精精品| 欧美精品国产亚洲| 中文字幕av在线有码专区| 日本免费a在线| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲欧美清纯卡通| 日韩欧美 国产精品| 99热这里只有是精品在线观看| 黄片wwwwww| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 欧美日韩乱码在线| h日本视频在线播放| 老司机影院成人| 99国产极品粉嫩在线观看| 99热这里只有精品一区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 成人一区二区视频在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 久久鲁丝午夜福利片| 一区二区三区免费毛片| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产中年淑女户外野战色| 美女大奶头视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 99在线人妻在线中文字幕| 99久久成人亚洲精品观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 91aial.com中文字幕在线观看| 久久久国产成人精品二区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产探花在线观看一区二区| 听说在线观看完整版免费高清| 国产精品.久久久| 男人和女人高潮做爰伦理| 边亲边吃奶的免费视频| 麻豆av噜噜一区二区三区| www.色视频.com| 一级毛片aaaaaa免费看小| 18禁在线播放成人免费| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 精品久久久噜噜| 成人漫画全彩无遮挡|