兔深靜脈血栓形成后不同開始治療時(shí)間療效比較

付召軍 魏健張 陳向 敏華

自貢市第四人民醫(yī)院普外科，四川自貢400016

兔深靜脈血栓形成后不同開始治療時(shí)間療效比較

付召軍 魏健張 陳向 敏華

自貢市第四人民醫(yī)院普外科，四川自貢400016

目的研究兔深靜脈血栓形成后不同抗凝溶栓治療開始時(shí)間療效是否存在差異性。方法新西蘭大白兔84只，行下腔靜脈血栓造模，隨機(jī)分為肝素組（A組）、尿激酶組（B組）、對(duì)照組（C組）。A、B兩組組再隨機(jī)分8h組、3d組、7d組三小組，每組12只，分別于深靜脈血栓形成后8 h、3 d、7 d行相應(yīng)治療，療程均1周。造模后14d比較各組血栓再通情況。結(jié)果A、B兩組組在造模后第8小時(shí)、3 d開始治療效果均較第7天開始治療效果好(P＜0.01),但前兩者比較治療效果未體現(xiàn)出差異性（P＞0.05）。同等條件下，B組較A組再通情況好。結(jié)論血栓形成后3 d內(nèi)不同時(shí)間開始抗凝溶栓治療再通情況差異性較小，在此前提下，通過適當(dāng)調(diào)整治療開始時(shí)間，縮短住院時(shí)間，對(duì)于節(jié)約醫(yī)療資源、減輕病人負(fù)擔(dān)有重要的意義。在安全范圍內(nèi)，使用尿激酶較使用肝素治療效果更好。

深靜脈血栓；動(dòng)物模型；差異

深靜脈血栓形成(deep venous thrombosis，DVT)[1]是指纖維蛋白、紅細(xì)胞以及不等量的血小板和白細(xì)胞在靜脈內(nèi)形成凝塊，通常發(fā)生于血流較慢或血流紊亂的部位。靜脈血栓形成的主要原因?yàn)槟獧C(jī)制的活化、靜脈血流的瘀滯和靜脈內(nèi)膜的損傷。在靜脈血栓形成中深，靜脈血栓形成的危害較大，在臨床上住院治療時(shí)間較長，占用了大量的醫(yī)療資源，也增加了患者的負(fù)擔(dān)。入院時(shí)深靜脈血栓患者處在不同的病程階段，病情特點(diǎn)千差萬別，對(duì)于抗凝溶栓等對(duì)癥治療的效果也各不相同。研究通過對(duì)兔建立下腔靜脈血栓模型，在血栓形成后不同時(shí)間段開始對(duì)其進(jìn)行抗凝溶栓治療，對(duì)比各時(shí)間段之間治療效果是否存在差異，并探討其臨床意義[1]。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組

2013年4月—2013年12月，健康新西蘭雄性大白兔84只（重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供），體重2.5～3.0kg。隨機(jī)分為肝素組（A組）36只、尿激酶組（B組）36只、對(duì)照組（C組）12只，再隨機(jī)將A組分為8h、3d、7d三組各12只，B組分為8h、3d、7d三組各12只。各組在相應(yīng)時(shí)間段開始行肝素或尿激酶治療。

1.2 動(dòng)物模型的建立

參照Liguo Chi等[2]的造模方法，試驗(yàn)大白兔以2%戊巴比妥鈉40mg/kg劑量靜脈麻醉，于腹中部皮膚去毛，5%碘伏消毒腹部，作腹正中切口入腹，顯露下腔靜脈后游離左腎靜脈下方至髂總靜脈分叉處，結(jié)扎各屬支。于腎靜脈與下腔靜脈匯合處下方結(jié)扎下腔靜脈。并于髂總靜脈分叉處上方用顯微血管夾阻斷下腔靜脈。等待60 min，證實(shí)該段下腔靜脈內(nèi)血栓形成后，松去血管夾，回納腸管后關(guān)腹。術(shù)后動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水。

1.3 造模后各組的治療

造模后分別對(duì)A、B兩組8 h組、3 d組、7 d組在8 h、3 d、7 d行肝素或尿激酶治療。肝素劑量為5000U/kg,溶于500 mL生理鹽水，從兔的耳緣靜脈滴注，持續(xù)3 h，1次/d，療程7 d。尿激酶5萬u/d，用法同肝素，1次/d，療程7 d。C組造模后不做治療，觀察14 d。

1.4 試驗(yàn)觀察指標(biāo)

術(shù)后14 d行超聲多普勒檢測(cè)，觀察造模后下腔靜脈再通情況。解剖下腔靜脈作血栓稱重，通過光鏡觀察腔靜脈內(nèi)皮增生程度以

及掃描電鏡觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞完整性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SAS8.1軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較采用單因素的方差分析。再通情況及內(nèi)皮損傷情況以等級(jí)資料表示，采用秩和檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有顯著性意義。

2 結(jié)果

兔造模成功后下腔靜脈血栓形成圖片（圖1）。

圖1 可見下腔靜脈血栓形成

2.1 各組再通情況比較

通過深靜脈彩超檢查、解剖觀察確認(rèn)后，對(duì)每只大白兔再通情況評(píng)估，分為完全再通、部分再通及未通三種情況，統(tǒng)計(jì)結(jié)果A、B兩組3d組與8h組之間未發(fā)現(xiàn)顯著差異性（P＞0.05）,8h、3d組再通情況較7d組再通情況好。差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05)。對(duì)比A組與B組發(fā)現(xiàn)后者再通顯著好于前者（P＜0.05）。彩超結(jié)果比較（圖2、3）

圖2 腔靜脈多普勒超聲

圖3 腔靜脈多普勒超聲

表1 各組治療效果比較

2.2 各組兔腔靜脈血栓重量比較

在血栓形成后第14天手術(shù)取出下腔靜脈，小心剝離出腔靜脈內(nèi)血栓，以試紙吸干表面血液，立即進(jìn)行血栓稱重，并對(duì)比各組血栓重量。稱重結(jié)果A、B兩組較C組重統(tǒng)計(jì)有顯著性意義（P＜0.05），A組與B組比較未發(fā)現(xiàn)顯著性差異（P＞0.05）。而A、B組內(nèi)比較8h、3d組較7d組血栓明顯較重（P＜0.05）。（表2）。

表2 各組腔靜脈內(nèi)血栓重量比較[g，（±s）]

表2 各組腔靜脈內(nèi)血栓重量比較[g，（±s）]

注：aP＞0.05 8h組vs 3d組，bP＜0.05 7d組vs 8h、3d組，cP＜0.05 C組vs A、B組。

分組8h組3d組7d組ABC 0.37±0.08a0.39±0.06a0.85±0.11c0.38±0.09 0.36±0.08 0.56±0.10b0.53±0.09b

2.3 各組光鏡腔靜脈內(nèi)膜增生情況及電鏡觀察內(nèi)皮細(xì)胞完整性情況

通過光鏡觀察腔靜脈內(nèi)膜增生程度，測(cè)量內(nèi)膜厚度，統(tǒng)計(jì)后發(fā)現(xiàn)A、B兩組8h、3d組較7d組增生程度輕，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。8h組和3d組比較未見顯著性差異（P＞0.05）。C組較A、B組增生顯著（P＜0.05），A、B兩組之間比較未見明顯差異性（P＞0.05）。電鏡內(nèi)皮細(xì)胞完整性檢測(cè)情況統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，A、B組內(nèi)皮細(xì)胞完整性由于C組，8h、3d組在A、B組內(nèi)較7d組內(nèi)皮細(xì)胞完整性較高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）[3-4]。

2.3.1 光鏡下腔靜脈內(nèi)膜病理變化見圖4、5。

表4 各組電鏡掃描下內(nèi)皮細(xì)胞損傷分級(jí)情況

圖4 內(nèi)膜光鏡觀察

圖5 內(nèi)膜光鏡觀察

表3 各組腔靜脈內(nèi)膜厚度比較[μm，（±s）]

表3 各組腔靜脈內(nèi)膜厚度比較[μm，（±s）]

注：aP＞0.05 8h組vs 3d組，bP＜0.05 7d組vs 8h、3d組，cP＜0.05 C組vs A、B組。

分組8h組3d組7d組ABC 59.4±10.3a55.7±11.7a75.8±15.1c56.1±12.0 54.1±13.7 68.3±13.2b62.4±12.2b

2.3.2 兩組腔靜脈內(nèi)皮細(xì)胞掃描電鏡觀察見圖6、7。

圖6 內(nèi)皮細(xì)胞電鏡掃描

圖7 內(nèi)皮細(xì)胞電鏡掃描

造模后第14天對(duì)實(shí)驗(yàn)兔腔靜脈內(nèi)皮細(xì)胞行電鏡掃描，根據(jù)Cho等[5]內(nèi)皮細(xì)胞損傷分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（由輕～重分為Ⅰ～Ⅴ級(jí)）。各組內(nèi)皮細(xì)胞損傷情況比較（表4）。

3 討論

M.Nosaka.Y等的研究表明血栓形成后第7天巨噬細(xì)胞活性最高[6]，Humphries J等報(bào)道證實(shí)巨噬細(xì)胞在深靜脈血栓預(yù)后較好的病例當(dāng)中，通過血栓局部組織學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)其密度、以及吞噬功能較血栓預(yù)后差的病例有明顯升高。證實(shí)其活性的增高對(duì)于深靜

脈血栓的溶解、管腔再通具有促進(jìn)作用[7]。

結(jié)果表明，建立下腔靜脈血栓模型后，在8h、3d、7d分別以肝素、尿激酶對(duì)試驗(yàn)組大白兔進(jìn)行治療。通過對(duì)比下腔靜脈管腔再通情況、血栓重量、內(nèi)膜厚度以及內(nèi)皮細(xì)胞完整性，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過治療后，A、B兩組經(jīng)抗凝、溶栓藥物治療后改善情況均明顯好于未作治療的C組（P＜0.05），而A組和B組之間比較，發(fā)現(xiàn)在再通情況、內(nèi)膜厚度和內(nèi)皮細(xì)胞完整性方面，后者改善情況優(yōu)于前者（P＞0.05）。試驗(yàn)對(duì)于下腔靜脈的結(jié)扎在某些程度上相當(dāng)于下腔靜脈濾網(wǎng)植入，阻止血栓脫落形成肺栓塞。證實(shí)在防止肺栓塞的前提下，在一定的安全劑量下，溶栓藥物對(duì)于血栓的治療效果優(yōu)于抗凝藥物[8]。

8h、3d組在A、B組內(nèi)血栓再通情況、下腔靜脈內(nèi)血栓稱重、內(nèi)膜厚度以及內(nèi)皮細(xì)胞完整性方面的情況均好于7 d組（P＜0.05）。而8h組和3d組在組內(nèi)比較其各方面的改善情況未發(fā)現(xiàn)顯著性差異（P＞0.05）。表明在3 d內(nèi)不同時(shí)間段作抗凝、溶栓治療對(duì)于深靜脈血栓的預(yù)后情況影響不大。而在血栓形成后第7 d，血栓處于相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài)，再使用抗凝溶栓藥物，對(duì)于深靜脈血栓的治療明顯差于血栓形成初期。目前已有研究證實(shí)臨床上血栓形成后及時(shí)治療，對(duì)于血栓溶解、管腔再通以及內(nèi)皮細(xì)胞重塑和深靜脈瓣膜功能的保護(hù)均具有重要意義[9-10]。

試驗(yàn)通過血栓形成后不同時(shí)間段給藥發(fā)現(xiàn)，血栓形成后初期（3 d內(nèi)），對(duì)于深靜脈血栓的預(yù)后沒有顯著性差別。目前臨床上對(duì)于血栓疾病的主要治療時(shí)間較長（約2周，可根據(jù)情況好轉(zhuǎn)情況適當(dāng)調(diào)整），血栓形成后即開始住院治療及第3天開始治療。后者因縮短住院治療時(shí)間，對(duì)于節(jié)約醫(yī)療資源，減輕患者負(fù)擔(dān)方面有著重要意義。同時(shí)血栓形成后血栓第3天相對(duì)較形成時(shí)穩(wěn)定，在抗凝溶栓治療時(shí)因栓子脫落造成肺栓塞的幾率也相對(duì)降低。在一定的安全措施下（如安置腔靜脈濾網(wǎng)）和安全劑量下，使用溶栓藥物較使用抗凝藥物對(duì)于深靜脈血栓的治療有更好的效果。

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Comparion of different starting time treatment and it’s effects in rabbit with deep venous thrombosis

FU Zhaojun WEI Jian ZHANG Chen XIANG Minhua
First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University Vascular Surgery,Chongqing 400016，China

ObjectiveTo study whether there are greatly difference in different time starting anticoagulation or thrombolysis treatment on rabbit with deep venous thrombosis(DVT).Methods84 rabbits were divided into 3 group randomly:Heparin group (group A),Urokinase group(group B),Coutrol group(group C),A group and B group divided into 3 subgroup randomly(8h group,3d group and 7d group)by its starting treatment time.ResultsA group and B group’s treatment effects in 8h、3d starting time is better an 7d group.There are not significant difference 8h group compared with 3d group.all things being equal,there is a better recanalization result in B group compare with A group.ConclusionThere are minor differences in recanalization results in cure deep venous thrombosis in 3 days.On this premise,To postpone the starting cure time suitablely,storten the in hospital times.To saving medical resources and lighten the burden of patient be of great significance.To a certain extent,Urokinase is better than Heparin in cure deep venous thrombosis.

Deep venous thrombosis;Animal model；Difference

R543.6

A

1672-5654（2014）09（c）-0013-04

2014-06-27）

付召軍（1984-），男，四川自貢人，碩士研究生，自貢市第四人民醫(yī)院普通外科，住院醫(yī)師研究方向：深靜脈血栓的預(yù)防與診治。