澳洲大蠊與美洲大蠊總糖含量的比較研究

羅建蓉，康小麗，錢金栿

（大理學院藥學與化學學院，云南大理 671000）

澳洲大蠊與美洲大蠊總糖含量的比較研究

羅建蓉，康小麗，錢金栿*

（大理學院藥學與化學學院，云南大理 671000）

目的:比較澳洲大蠊與美洲大蠊中總糖含量的差異。方法:采用苯酚-硫酸法測定總糖含量。結果：澳洲大蠊中總糖平均含量為139.6 mg∕g，美洲大蠊的為127.6 mg∕g，兩種蜚蠊的總糖含量差異無統(tǒng)計學意義。結論：兩種蜚蠊中總糖含量豐富，且二者的含量比較差異無統(tǒng)計學意義。

美洲大蠊;澳洲大蠊;總糖含量;苯酚-硫酸法

澳洲大蠊（Periplaneta australasiae）和美洲大蠊（Periplaneta americana）同為蜚蠊科大蠊屬昆蟲，二者都被冠以蟑螂、蜚蠊等俗稱。蜚蠊的藥用歷史久遠，歷代重要本草典籍《神農本草經》《新修本草》和《本草綱目》中均有記載。其性平、味咸，內服可健脾消疳、活血通脈、利水消腫，外用則具有消腫生肌之功效〔1〕。

近年來研究發(fā)現(xiàn)，美洲大蠊具有抗癌〔2-5〕、抗肝纖維化〔6-8〕、保肝〔9-11〕、抗菌〔12〕、促組織修復〔13〕等作用；其活性物質為黏多糖、肽、氨基酸、核苷等成分〔14-15〕。而有關澳洲大蠊藥用價值的研究甚少，僅見程才芬、黃厚聘等報道澳洲大蠊的油狀醇提物（即蟑螂油）對小鼠S180肉瘤及人食管癌小鼠異種移植有抑制作用〔16-17〕。而對這兩種蜚蠊多糖含量的差異尚未見報道。本實驗采用苯酚-硫酸法測定澳洲大蠊和美洲大蠊中總糖含量，并用統(tǒng)計學方法分析二者的差異，從多糖含量的角度來探討同屬昆蟲澳洲大蠊是否能作為美洲大蠊藥材的補充藥源，為發(fā)掘大蠊屬昆蟲中新的藥用資源提供一定的實驗依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1儀器TU-1901雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限公司）；BL204電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；KDM型控溫電熱套（鄄城華魯電熱儀器有限公司）；DHG-9075A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海一恒科技有限公司）。

1.2材料野生美洲大蠊收集于云南省普洱市（樣品號：130702，131002）和云南省玉溪市元江縣（樣品號：130903），野生澳洲大蠊收集于云南省普洱市（樣品號：130601，130801，131001）和云南省玉溪市元江縣（樣品號：130701），樣品經大理學院毛本勇教授鑒定分別為美洲大蠊（Periplaneta americana）和澳洲大蠊（Periplaneta australasiae）。樣品經洗凈、干燥至恒重，粉碎過40目篩，制得樣品粉末，干燥儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.3藥品與試劑葡萄糖對照品（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20120407），硫酸、苯酚、鹽酸等試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1溶液的配制

2.1.1 苯酚溶液的配制 稱取150 g苯酚，按文獻〔18〕方法進行蒸餾，制得精制苯酚。取適量精制苯酚，將其配成5%濃度的苯酚水溶液備用，用前新配。

2.1.2 葡萄糖標準液的制備 精密稱取經干燥至恒重的葡萄糖對照品100 mg，加蒸餾水溶解，并配制成1 mg∕mL的葡萄糖對照品溶液。

2.1.3 蜚蠊供試液的制備 精密稱取蜚蠊樣品粉末約0.50 g，于100 mL圓底燒瓶中，加6 mol∕L鹽酸10 mL〔18〕，蒸餾水30 mL，用電熱套加熱回流1 h，濾集提取液，加活性炭0.1 g脫色，過濾，用蒸餾水洗滌殘渣，濾液轉移至100 mL量瓶中，定容，搖勻。精密移取上述溶液5 mL定容至10 mL量瓶中，作為蜚蠊供試液。

2.2測定波長的確定分別取葡萄糖標準液、蜚蠊供試液、蒸餾水各2 mL，參考文獻〔18〕方法顯色，并在300～800 nm波長范圍內進行掃描，光譜圖顯示在490 nm處葡萄糖及蜚蠊供試液的吸收均最大，故確定最佳測定波長為490 nm。見圖1。

圖1 葡萄糖與蜚蠊總糖的吸收光譜圖

2.3顯色條件的考察

2.3.1 苯酚用量考察 按“2.1.3”項制備美洲大蠊供試液（樣品號：130903），取2 mL于25 mL量瓶中，分別考察苯酚用量0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，再各加5 mL濃硫酸，置60℃水浴加熱顯色30 min，冷卻，用蒸餾水定容，于490 nm處測定吸光度，結果表明用量為1 mL時吸光度值最大。

2.3.2 濃硫酸用量考察 分別移取“2.3.1”項下的供試液2 mL于6個25 mL量瓶中，各加5%苯酚溶液1 mL，分別加入濃硫酸5、10、15、20、25、30 mL，顯色測定方法同“2.3.1”項，結果顯示使用10 mL濃硫酸時吸光度值最大。

2.3.3 顯色時間考察 精密移取“2.3.1”項下的供試液2 mL于25 mL量瓶中，共8份，各加5%苯酚溶液1 mL，濃硫酸10 mL，分別置60℃水浴加熱顯色0、5、10、15、20、25、30、35 min，冷卻后定容，在490 nm處測定吸光度，結果為加熱顯色25 min的吸光度值最大。

2.3.4 加熱溫度的考察 分別移取“2.3.1”項下的供試液2 mL，共7份，各加5%苯酚溶液1mL和濃硫酸10 mL，分別于30、40、50、60、70、80、90℃水浴加熱顯色25 min，冷卻后定容至25 mL量瓶中，測定結果顯示水浴加熱溫度為40℃時吸光度值最大。

2.4方法學考察

2.4.1 標準曲線的繪制 分別精密移取葡萄糖對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL，于25 mL量瓶中，加蒸餾水使體積為2 mL，加1 mL 5%苯酚溶液、10 mL濃硫酸，于40℃加熱25 min，冷卻，定容，于490 nm波長處測定。以葡萄糖溶液的質量濃度（X）為橫坐標，所測定的吸光度（Y）為縱坐標，繪制標準曲線，得線性方程Y=21.229X+0.096 6，r= 0.999 7，線性范圍為4～32 μg∕mL。

2.4.2 精密度試驗 精密移取蜚蠊供試液2 mL，按“2.4.1”項下方法顯色、測定吸光度，重復測定6次，其RSD為0.12%（n=6），結果表明儀器精密度良好。

2.5重復性試驗取0.5 g美洲大蠊粉末（樣品號：130903），共6份，分別精密稱定，按“2.4.1”項下方法顯色測定，計算得該供試品中總糖的平均含量為144.2 mg∕g，RSD為1.68%（n=6）。

2.6穩(wěn)定性試驗移取同一供試溶液，按“2.4.1”項下方法顯色后，每隔30 min測定一次吸光度，樣品在5 h內穩(wěn)定，RSD為1.39%。

2.7加樣回收率實驗精密稱取美洲大蠊粉末（樣品號：130903）6份，每份約0.25 g，分別加入葡萄糖標準品36 mg，按“2.1.3”項制備供試液，按上述確定的條件進行顯色、測定吸光度，計算得平均回收率為98.83%，RSD為1.20%（n=6）。

2.8蜚蠊樣品測定取來源不同的蜚蠊樣品，每個樣品平行取樣3份，按“2.1.3”項制備供試液，按“2.4.1”項下方法顯色、測定吸光度，計算出蜚蠊藥材中總糖含量。見表1。

表1 蜚蠊樣品的測定結果

3 討論

實驗分別測定了元江、普洱兩產地的澳洲大蠊和美洲大蠊中總糖含量，表1數(shù)據(jù)經統(tǒng)計學雙樣本方差分析和雙樣本異方差t檢驗處理，兩種蜚蠊總糖的P為0.18（>0.05），而不同批次的同種蜚蠊的總糖P<0.05。結果顯示兩種蜚蠊的總糖含量差異無統(tǒng)計學意義，而不同批次的同種蜚蠊的總糖含量差異具有統(tǒng)計學意義。由于蜚蠊樣品為野生狀態(tài)，其生存環(huán)境、食物、生長周期、及捕捉時間等多種因素均會對其體內總糖含量造成影響，致使不同批次的同種蜚蠊總糖含量有較大差異。

美洲大蠊提取物具有抗肝纖維化作用，其活性物質之一為黏糖氨酸〔6-8，19-20〕。另蜚蠊中的黏多糖有抗艾滋病病毒作用〔14〕。由本實驗結果得知，澳洲大蠊中總糖平均含量為139.6 mg∕g，美洲大蠊的為127.6 mg∕g，其含量分別占藥材干重的13.96%和12.76%，表明了兩種蜚蠊中總糖含量豐富，且二者的含量比較差異無統(tǒng)計學意義，這為澳洲大蠊用作美洲大蠊藥材的補充藥源提供一定的實驗依據(jù)。由此推測澳洲大蠊可能具有與美洲大蠊相似的生物活性，并提示澳洲大蠊也應具有藥用開發(fā)價值。而澳洲大蠊的生物活性及其成分組成仍待進一步研究確定。

〔1〕云南省食品藥品監(jiān)督管理局.云南省中藥材標準〔S〕.昆明：云南科技出版社，2005：54.

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〔20〕黃麗，楊永壽，李夸巧，等.美洲大蠊中氨基葡萄糖類化合物的含量測定〔J〕.大理學院學報，2013,12（12）：5-8.

*通信作者：錢金栿，教授.

（責任編輯 李 楊）

Comparison on the Contents of Total Sugar between Periplaneta australasiae and Periplaneta americana

LUO Jianrong,KANG Xiaoli,QIAN Jinfu*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali Yunnan 671000,China）

Objective:To compare the contents of total sugar between Periplaneta australasiae and Periplaneta americana.Methods:The contents of total sugar were determined by Phenol-Sulfuric acid reaction system.Results:The average content of total sugar in Periplaneta australasiae was 139.6 mg∕g,and the average content in Periplaneta americana was 127.6 mg∕g.Conclusion:The two kinds of cockroaches were all rich in total sugar.There was no significant difference in the contents of total sugar between Periplaneta australasiae and Periplaneta americana.

Periplaneta australasiae;Periplaneta americana;Total sugar;phenol-sulfuric acid

R284

A

1672-2345（2014）02-0026-04

10.3969∕j.issn.1672-2345.2014.02.008

云南省教育廳重點基金資助項目（2012Z117）

2013-12-22

2014-01-02

羅建蓉，副教授，主要從事天然產物研究與開發(fā).