長(zhǎng)小苞黃芪化學(xué)成分研究

程 霞，肖朝江，孫俊哲，姜 北

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

長(zhǎng)小苞黃芪化學(xué)成分研究

程 霞，肖朝江，孫俊哲，姜 北*

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

目的：研究長(zhǎng)小苞黃芪（Astragalus balfourianus）的化學(xué)成分。方法：采用硅膠、RP-18、sephadex LH-20、MCI等柱層析進(jìn)行分離純化，通過波譜方法等進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果：從長(zhǎng)小苞黃芪甲醇提取物的乙酸乙酯部位分得6個(gè)化合物，分別鑒定為：白樺酸（1）、β-谷甾醇（2）、異甘草素（3）、角鯊烯（4）、芒柄花苷（5）、芒柄花素（6）。結(jié)論：所有的化合物均是首次從該植物中分離得到。

長(zhǎng)小苞黃芪；化學(xué)成分；分離鑒定

豆科（Leguminosae或Fabaceae）黃芪屬（Astrag?alus）植物系一年生或多年生草本、半灌木，較少為灌木；全世界約2 000余種，主要分布于北半球。我國(guó)有278種，2亞種，35變種及2變型，南北各省區(qū)均產(chǎn)。黃芪屬植物具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，其中中藥黃芪有“補(bǔ)藥之長(zhǎng)”的美譽(yù)〔1〕。藥典上規(guī)定中藥黃芪為豆科黃芪屬植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus Bge.var.mongholicus或膜莢黃芪A.membranaceus的干燥根〔2〕，主要含有黃芪苷類，多糖類和黃酮類生物活性物質(zhì)〔3〕，具有多種藥理活性，包括增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，抗氧化，保肝利尿，對(duì)心血管的作用，對(duì)血液系統(tǒng)的作用等〔4〕，廣泛應(yīng)用于臨床。

云南作為黃芪屬植物的一個(gè)分布中心，黃芪屬植物資源十分豐富，共有51個(gè)種，6個(gè)變種〔5-6〕，但無(wú)正品黃芪自然分布，因此，許多同屬近緣植物在該地區(qū)充當(dāng)正品黃芪使用，例如地八角、梭果黃芪等均可作為黃芪代用品〔7〕。云南黃芪屬植物資源雖然異常豐富，但該地區(qū)黃芪屬植物大多從未有研究，無(wú)法深入利用與保護(hù)。我們前期研究表明，部分云南黃芪屬植物在化學(xué)成分、生物活性上有顯著特點(diǎn)與開發(fā)潛力，因此，對(duì)云南產(chǎn)黃芪屬植物資源進(jìn)行全面系統(tǒng)研究很有必要。

長(zhǎng)小苞黃芪（A.balflourianus）為云南黃芪屬植物之一，又稱雪山芪、滇西北黃芪，多年生草本，生于海拔2 500～2 900 m的草坡及林下，主要分布于云南西北部及川西地區(qū)。為深入了解該植物的品質(zhì)，我們近來(lái)對(duì)其進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，從中分離得到6個(gè)化合物，現(xiàn)報(bào)道如下。見圖1。

1 材料與方法

圖1 化合物1～6的化學(xué)結(jié)構(gòu)

1.1儀器和材料Bruker Advance III-400核磁共振儀，四甲基硅烷（TMS）為內(nèi)標(biāo)；層析填充材料分別為RP-18（40～75μm；日本Fuji公司）、Sepha?dex LH-20（Amersham Biosciences，Sweden）、MCI-gel CHP-20P、硅膠和薄層層析硅膠GF254（青島海洋化工廠）；薄層層析顯色劑為10%硫酸甲醇；氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇等有機(jī)溶劑均為工業(yè)純經(jīng)重蒸后使用；去離子水、異丙醇為分析純。

實(shí)驗(yàn)用長(zhǎng)小苞黃芪植物樣品2012年7月采自云南迪慶藏族自治州，植物標(biāo)本（20120718-1-A）存放于大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院姜北教授研究組。

1.2提取與分離長(zhǎng)小苞黃芪干燥根0.998 5 kg，粉粹后用甲醇冷浸提取6次，減壓濃縮得浸膏170 g；用水分散浸膏，再用乙酸乙酯萃取，蒸干得浸膏31 g，浸膏用硅膠（200～300目）柱層析，氯仿-丙酮混合溶劑梯度洗脫（1：0，20：1，10：1，5：1，0：1），在TLC的檢測(cè)下合并相同流分得10個(gè)組分。

組分1經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析（石油醚∕石油醚-丙酮300：1）及Sephadex LH-20（氯仿：甲醇=1：1）得化合物4（20 mg）。組分2經(jīng)Sephadex LH-20（氯仿：甲醇=1：1）柱層析得到化合物2（694 mg）。組分9經(jīng)Sephadex LH-20（氯仿：甲醇=1：1）和RP-18柱層析（甲醇：水=50%～100%）得到化合物3（31.3 mg）。組分5經(jīng)Sephadex LH-20（氯仿：甲醇=1：1）和硅膠（氯仿：異丙醇=150：1）柱層析得化合物1（9.8 mg）。組分10用MCI（甲醇：水=50%～100%）柱層析，再經(jīng)Sephadex LH-20（甲醇）柱層析得化合物5（1.05 g）。組分4經(jīng)Sephadex LH-20（氯仿：甲醇=1：1）和反復(fù)硅膠柱層析（氯仿：異丙醇=100：1）得化合物6（15.6 mg）。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色粉末。1H NMR（400 MHz，pyridine-d5）δ：4.93（1H，d，J=2.2 Hz，H-29a），4.75（1H，brs，H-29b），3.57～3.50（1H，m，H-3），3.47～3.41（1H，m，H-19），2.75～2.69（1H，m，H-13），2.62（1H，d，J=12.7 Hz，H-16），2.27～2.18（2H，m，H-22），1.77（3H，s，Me-30），1.21（3H，s，Me-23），1.04、0.99、0.79（各3H，s，Me-24，25，26），1.03（3H，s，Me-27）；13C NMR（100 MHz，pyridine-d5）δ：178.7（C-28），151.1（C-20），109.8（C-29），77.8（C-3），56.4（C-17），55.6（C-5），50.7（C-9），49.5（C-19），47.5（C-18），42.6（C-14），40.8（C-8），39.3（C-4），39.0（C-1），38.3（C-13），37.4（C-22），37.3（C-10），34.6（C-7），32.6（C-16），30.9（C-15），30.0（C-21），28.4（C-23），28.1（C-2），25.8（C-12），20.9（C-11），19.2（C-30），18.5（C-6），16.2（C-24），16.2（C-25），16.1（C-26），14.6（C-27）。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔8〕報(bào)道的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定該化合物為白樺酸。

化合物2：無(wú)色針晶（丙酮）。在TLC上經(jīng)多種溶劑系統(tǒng)分別展開后化合物2與已鑒定的對(duì)照品β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品Rf值及斑點(diǎn)顏色均一致，故鑒定該化合物為β-谷甾醇。

化合物3：黃色粉末（丙酮）。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ：13.67（1H，s，2'-OH），9.46（2H，s，4，4'-OH），8.13（1H，d，J=8.9 Hz，H-6'），7.84（1H，d，J=15.3 Hz，H-α），7.77（1H，d，J=15.3 Hz，H-β），7.74（2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6），6.93（2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5），6.47（1H，dd，J=8.9，2.1 Hz，H-5'），6.37（1H，d，J= 2.1 Hz，H-3'）；13C NMR（100 MHz，acetone-d6）δ：192.8（C=O），167.6（C-4'），165.7（C-2'），161.1（C-4），145.2（C-β），133.3（C-6'），131.8（C-2，6），127.5（C-1），118.2（C-α），116.8（C-3，5），114.4（C-1'），108.7（C-5'），103.7（C-3'）。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔9〕報(bào)道的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定該化合物為異甘草素。

化合物4：無(wú)色油狀液體（氯仿）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.10～5.14（6H，m，H-3，7，11，14，18，22），1.97～2.09（20H，m，H2-4，5，8，9，12，13，16，17，20，21），1.68（6H，brs，Me-1，24），1.60（18H，s，Me-2′，6′，10′，15′，19，23′）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：135.1（C-10，15），134.9（C-6，19），131.3（C-2，23），124.4（C-3，22），124.3（C-11，14），124.3（C-7，18），39.7（C-5，9，16，20），28.3（C-12，13），26.8（C-4，21），26.7（C-8，17），25.7（C-2′，23′），17.7（C-1，24），16.1（C-10′，15′），16.0（C-6′，19′）。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔10〕報(bào)道的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定該化合物為角鯊烯。

化合物5：白色粉末（氯仿-甲醇）。1H NMR（400 MHz，pyridine-d5）δ：8.25（1H，d，J=8.9 Hz，H-5），8.02（1H，s，H-2），7.64（2H，d，J= 8.8 Hz，H-2′，6′），7.33（1H，d，J=2.3 Hz，H-8），7.19（1H，dd，J=8.9，2.3 Hz，H-6），6.95（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′），5.71（1H，d，J= 7.3 Hz，glc H-1），3.57（3H，s，-OCH3）；13C NMR（100 MHz，pyridine-d5）δ：176.0（C-4），162.9（C-7），160.5（C-4′），158.3（C-9），153.6（C-2），131.2（C-2′，C-6′），128.3（C-5），125.5（C-3），125.2（C-1′），120.2（C-10），116.5（C-6），114.7（C-3′，C-5′），104.7（C-8），102.3（glc C-1），79.8（glc C-5），78.9（glc C-3），75.3（glc C-2），71.7（glc C-4），62.9（glc C-6），55.7（-OCH3）。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔11-12〕報(bào)道的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定該化合物為芒柄花苷。

化合物6：白色粉末（氯仿-甲醇）。1H NMR（400 MHz，pyridine-d5）δ：8.44（1H，d，J=8.7 Hz，H-5），8.15（1H，s，H-2），7.77（2H，d，J= 8.8 Hz，H-2′，6′），7.22（1H，dd，J=8.7，2.2 Hz，H-6），7.11（1H，d，J=2.2 Hz，H-8），7.06（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′），3.67（3H，s，-OCH3）；13C NMR（100 MHz，pyridine-d5）δ：176.1（C-4），164.7（C-7），160.4（C-4′），159.0（C-9），153.3（C-2），131.3（C-2′，6′），128.7（C-5），125.8（C-1′），125.1（C-3），118.4（C-10），116.4（C-6），114.7（C-3′，5′），103.4（C-8），56.7（-OCH3）。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔12〕報(bào)道的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定該化合物為芒柄花素。

〔1〕劉雪梅，王新春.補(bǔ)藥之長(zhǎng)：黃芪〔J〕.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2012，31（2）：130-131.

〔2〕國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部〔S〕.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：283-285.

〔3〕陳國(guó)輝，黃文風(fēng).黃芪的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)新藥雜志，2008，17（17）：1482-1485.

〔4〕熊明彪.黃芪的藥理作用及臨床研究進(jìn)展〔J〕.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2013，9（10）：70-71.

〔5〕中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志：42卷，1冊(cè)〔M〕.北京：科學(xué)出版社，1993：78-79.

〔6〕中國(guó)科學(xué)院昆明植物所.云南植物志：10卷〔M〕.北京：科學(xué)出版社，2006：701.

〔7〕錢子剛，賈向云，戴蓉，等.云南黃芪藥用植物物種多樣性研究〔J〕.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1997，20（1）：4-12.

〔8〕CHATTERJEE P，PEZZUTO J M，KOUZI S A.Glucosida?tion of betulinic acid by Cunninghamella species〔J〕.Jour?nal of Natural Products，1999，62（5）：761-763.

〔9〕鄭善松，吳弢，王崢濤.多序巖黃芪根化學(xué)成分研究〔J〕.中國(guó)中藥雜志，2011，36（17）：2350-2352.

〔10〕周欣，劉赟，龔小見，等.鬼箭羽化學(xué)成分的研究Ⅱ〔J〕.中國(guó)藥學(xué)雜志，2009，44（18）：1375-1377.

〔11〕劉毅，海力茜，趙玉英，等.天山巖黃芪異黃酮類成分研究〔J〕.中國(guó)藥學(xué)雜志，2009，44（20）：1533-1535.

〔12〕孫精偉，趙明波，梁鴻，等.保元湯中黃酮類成分的分離和結(jié)構(gòu)鑒定〔J〕.中草藥，2010，41（5）：696-700.

*通信作者：姜北，教授，博士.

（責(zé)任編輯 李 楊）

Study on the Chemical Constituents of Astragalus balfourianus

CHENG Xia,XIAO Chaojiang,SUN Junzhe,JIANG Bei*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000，China）

Objective:To explore the chemical constituents of Astragalus balfourianus.Methods:The constituents were isolated by chromatography applying silica gel column,RP-18,sephadex LH-20 and MCI,and the structures were identified on the basis of spectral data and physicochemical properties.Results:Six compounds were isolated from ethyl acetate fraction of the MeOH extract from rhizomes and were identified as betulinic acid（1）,β-sitosterol（2）,isoliquiritigenin（3）,squalene（4）,ononin（5）,and formononetin（6）.Conclusion:Thesecompounds wereobtained from Astragalusbalfourianus forthe first time.

Astragalusbalfourianus;chemical constituents;isolation andidentification

R284.2

A

1672-2345（2014）02-0003-03

10.3969∕j.issn.1672-2345.2014.02.002

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（31170313）；云南省百名海外高層次人才引進(jìn)計(jì)劃基金資助項(xiàng)目（云組通〔2011〕123號(hào)）

2013-12-13

2013-12-20

程霞，碩士研究生，主要從事藥物化學(xué)研究.