紫萁貫眾抗炎有效部位的研究

穆麗莎 崔 文 費 燁 付深振 王 晶 高增平

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京，100102）

紫萁貫眾抗炎有效部位的研究

穆麗莎 崔 文 費 燁 付深振 王 晶 高增平

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京，100102）

目的：確定紫萁貫眾抗炎作用有效部位，為進一步研究紫萁貫眾抗炎作用的活性成份奠定基礎(chǔ)。方法：通過二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗研究紫萁貫眾各極性部位的抗炎活性。結(jié)果：紫萁貫眾各極性部位對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響均具抑制作用，乙酸乙酯低劑量及正丁醇高劑量與地塞米松的抗炎效果相近。結(jié)論：中藥紫萁貫眾的乙酸乙酯部位和正丁醇部位為抗炎有效部位。

紫萁貫眾；抗炎；有效部位

紫萁貫眾為紫萁科紫萁屬植物紫萁（Osmunda japonica Thunb）的干燥根莖和葉柄殘基［1］，是傳統(tǒng)中藥貫眾的主要流通商品之一。目前已經(jīng)從紫萁貫眾中分離鑒定出坡那甾酮A、脫皮酮、脫皮甾酮、β-谷甾醇等甾體化合物，紫萁內(nèi)酯、棕櫚酸乙酯、棕櫚酸甲酯、甲基（2S，5S）-5-羥-3-（β-D-吡喃葡萄糖氧基）己酸酯、紫萁酮等酯類化合物，紫萁苷、花秋酸苷、β-D -吡喃糖苷等苷類化合物，以及多糖等成分［2］。

現(xiàn)代藥理研究結(jié)果表明，紫萁貫眾具有抗菌、抗病毒、抗癌、提高機體免疫力等作用［3］，但對其抗炎作用報道很少，且其研究多與抗菌、抗病毒作用相聯(lián)系［4］。本文以紫萁貫眾的抗炎作用為切入點，通過小鼠耳廓腫脹實驗對紫萁貫眾抗炎活性部位進行篩選，為進一步研究紫萁貫眾抗炎活性成分提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 藥材 紫萁貫眾藥材（購買地點：湖南沅陵；購買時間：2011年3月7日；由北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院高增平教授鑒定為紫萁貫眾）。

1.2 藥品制備 紫萁貫眾藥材9.5 kg，粉碎后用90%乙醇回流提取兩次，保留藥渣。將所得提取液合并，過濾取上清液進行減壓濃縮得到濃縮液。將濃縮液加水稀釋后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液分別濃縮干燥得到石油醚部位收率為0.002 2%、乙酸乙酯部位收率為0.066 8%、正丁醇部位收率為0.043 8%。

乙醇提取后的藥渣晾干，加水煎煮兩次，將所得水煎液合并。水煎液濃縮后加乙醇使含醇量達到65%，放置過夜后過濾得到濾液，濾液再加乙醇進行第二次沉淀，收集兩次的沉淀得水提醇沉部位收率0.740 2%。

得到四個極性部位：水提醇沉部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位、石油醚部位。

1.3 實驗動物 ICR小鼠120只（雄性），平均體重21 g（北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供）。

1.4 主要儀器設(shè)備及試劑 儀器：DK-S 24型電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE52CS（上海亞榮生化儀器廠）；SHZ-D（III）循環(huán)水式多用真空泵（河南鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；離心機LDZ4-0.8（北京醫(yī)用離心機廠）；電子分析天平（北京塞多利科技儀器有限公司）；電子秤（批號MP2001，上海第二天平儀器廠）；角膜環(huán)鉆（北京天澤企業(yè)發(fā)展有限責(zé)任公司王府井醫(yī)療器材服務(wù)部）；小鼠灌胃器（1 mL），小鑷子，剪刀。

試劑：無水乙醇、甲醇、去離子水、乙酸乙酯、石油醚（60～90℃）、正丁醇、氯仿，均為分析純；二甲苯（批號20120105，北京化工廠）；地塞米松片（批號12030611，天津力生制藥股份有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 實驗方法 按隨機的原則將小鼠分成10組，每組12只。分別為：空白組，地塞米松陽性對照組，正丁醇部位高、低劑量組，乙酸乙酯部位高、低劑量組，石油醚部位高、低劑量組，水提醇沉部位高、低劑量組。每組小鼠重量平均值相等約21 g，給藥量0.2 mL/g。地塞米松給藥劑量為2 mg/kg，根據(jù)《中華人民共和國藥典》（2010年版）記載紫萁貫眾成人每天用量為9 g，實驗中小鼠的低劑量等于成人生藥量，高劑量組為低劑量組的5倍，見表1。

表1 小鼠耳腫脹實驗給藥劑量

每只小鼠每天灌胃給藥1次，連續(xù)給藥7 d。于末次給藥后30 min將二甲苯0.05 mL/只均勻涂在小鼠右耳前后兩面，左耳不涂做對照。致炎1 h后將小鼠斷頸處死，剪下左右兩耳廓，用直徑8.0 mm打孔器于左右耳同一部位打下圓耳片，于分析天平上稱重，以右耳片重量減去左耳片重量為腫脹度，并按以下公式求得腫脹率（%），腫脹率（%）＝腫脹度/左耳片重量× 100%，結(jié)果見表2。

表2 小鼠耳廓腫脹實驗結(jié)果

2.2 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 13.0 for windows統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，采用單因素方差分析（one-way ANOVE）進行LSD-t檢驗，多組間比較用q檢驗；非正太分布資料采用非參數(shù)統(tǒng)計分析。所得數(shù)據(jù)結(jié)果均以（±s）表示。

2.3 實驗結(jié)果 由表2可以看出，除正丁醇低劑量組、石油醚高劑量組以外，其他各組對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響均具有明顯的抑制作用。正丁醇高劑量組、乙酸乙酯低劑量組的耳片重量差與空白對照組比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），并且與地塞米松陽性組腫脹率相近。說明紫萁貫眾能抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，提示紫萁貫眾對極性炎性腫脹具有抑制作用。從而確定正丁醇部位和乙酸乙酯部位為抗炎有效部位。

3 小結(jié)與討論

炎癥是機體的組織細胞對各種致炎因子損傷所發(fā)生的復(fù)雜的防御反應(yīng)，是致炎因子刺激所引起的機體主動反應(yīng)的過程。本實驗通過觀察典型的二甲苯致炎小鼠耳廓腫脹實驗篩選紫萁貫眾提取物中的抗炎有效部位。結(jié)果表明，紫萁貫眾各極性部位對二甲苯致小鼠耳廓腫脹具有明顯抑制作用，但由于給藥劑量不同作用強弱也不同；其中正丁醇高劑量組與乙酸乙酯低劑量組腫脹率最小，抑制作用與陽性對照地塞米松組相近，具有極明顯的抗炎作用；而正丁醇低劑量組與石油醚高劑量組對二甲苯致小鼠耳廓腫脹無抑制作用。從而確定正丁醇部位及乙酸乙酯部位為抗炎有效部位。

貫眾另一藥用品種東北貫眾具有清熱解毒、抗炎鎮(zhèn)痛的作用。有研究表明［5］，東北貫眾醇提物經(jīng)大孔樹脂洗脫，得到的各組洗脫部位具有對二甲苯致小鼠耳廓腫脹抑制作用，其中30%乙醇洗脫部位作用顯著；并且該部位經(jīng)分離得到黃酮苷、木脂素苷元、木脂素苷類成分。本實驗所得不同極性部位經(jīng)檢驗顯示，正丁醇萃取液主要含有苷類成分，乙酸乙酯部位主要含有酯類成分。由此可推斷，紫萁貫眾抗炎有效部位為極性較大的苷類及酯類。

綜上所述，紫萁貫眾具有顯著的抗炎作用，正丁醇和乙酸乙酯萃取部位為抗炎有效部位，為其有效活性成分研究及臨床應(yīng)用奠定了良好的基礎(chǔ)。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.第二部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：附錄321.

［2］蔣亞生，楊寧.貫眾的藥理研究進展［J］.藥學(xué)實踐雜志，2000，18（1）：17-18.

［3］戴金鳳，李磊，劉輝，等.紫萁的研究進展［J］.中草藥，1999，30（9）：717-719.

［4］劉金成，張娟.貫眾的藥理研究［J］.黑龍江醫(yī)藥，2008，21（4）：78-79.

［5］張麗霞.東北貫眾中活性成分的研究［D］.哈爾濱：黑龍江大學(xué)，2009.

（2013-10-13收稿 責(zé)任編輯：曹柏）

Study on the Effective Component of Japanese Flowering Fern Rhizome with Anti-inflammatory Action

Mu Lisha，Cui Wen，F(xiàn)ei Ye，F(xiàn)u Shenzhen，Wang Jing，Gao Zengping
（School of Chinese Meteria Medica，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China）

Objective：To determine the effective component of JapaneseFloweringFernRhizome with anti-inflammatory action.Methods：Anti-inflammatory activities of the diffident parts of JapaneseFloweringFernRhizomewere studied on the swelling mice ear induced by xylene.Results：All the polar parts of JapaneseFloweringFernRhizome had inhibitory effects on the xylene-induced mice ear swelling.N-butyl alcohol high dose group and ethyl acetate low dose group showed the similar anti-inflammatory action to that of DXM（Dexamethasor）.Conclusion：Japanese Flowering Fern Rhizome has anti-inflammation effect.Ethyl acetate low dose part and N-butyl alcohol part are the effective components with anti-inflammation action.

Japanese Flowering Fern Rhizome；Anti-inflammation；Effective component

R285.6

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.03.036

北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥先導(dǎo)化合物發(fā)現(xiàn)與開發(fā)創(chuàng)新團隊項目

高增平，女，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥有效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量研究，E-mail：gzp6560＠hotmail.com