新孢子蟲病研究進展

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（1.重慶市動物疫病預(yù)防控制中心，重慶渝北 401120；2.西南大學(xué)動科技學(xué)院，重慶北碚 400715）

新孢子蟲病研究進展

賀德華1，李嬌2

（1.重慶市動物疫病預(yù)防控制中心，重慶渝北 401120；2.西南大學(xué)動科技學(xué)院，重慶北碚 400715）

新孢子蟲病是一種在全球范圍內(nèi)廣泛流行的原蟲性寄生蟲病，該病是導(dǎo)致奶牛流產(chǎn)的主要原因。它的主要傳播途徑是經(jīng)胎盤垂直傳播和消化道傳播。其相關(guān)感染危險因素有年齡、季節(jié)、管理條件等。本文對新孢子蟲病的病原學(xué)、流行病學(xué)、危害及診治進行全面概述，以期為快速、準(zhǔn)確地診斷和采取有效的措施防制奶牛新孢子蟲病提供依據(jù)。

新孢子蟲病；流行；危害；防治

新孢子蟲病（Neosporiasis）是由犬新孢子蟲（Neospora caninum）寄生在多種哺乳動物細胞內(nèi)所引起的一種原蟲病。1984年，Bjerkas等首次發(fā)現(xiàn)這種能引起犬輕癱和死亡的原蟲，其形態(tài)與剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）相似[1]。1988年，Dubey等從犬體內(nèi)分離到該蟲體，并將其命名為新孢子蟲[2]。最初，人們認為新孢子蟲病是區(qū)別于剛地弓形蟲病的僅發(fā)生于奶牛和犬的一種非傳染性寄生蟲病。然而，研究證明該病呈世界性分布，犬是其終末宿主，大多數(shù)動物可作中間宿主[3]。目前，該病已被證明是造成養(yǎng)牛業(yè)經(jīng)濟損失的主要原因之一[4]。盡管人們對該病有一定的研究，該病的商業(yè)化疫苗在部分國家得到應(yīng)用，但其免疫效果仍未得到肯定[5]。

1 新孢子蟲病的病原學(xué)

經(jīng)近20多年的研究，人們對Neosporiasis相關(guān)的病原學(xué)知識逐步深入。1993年，Brindley等[6]研究發(fā)現(xiàn)N.caninum和T.gondii的16s樣rRNA基因序列相同，但N.caninum沒有T.gondii的三種主要的B1，P22和P30同源基因，且N.caninum抗血清和弓形蟲、枯氏住肉孢子蟲、艾美耳球蟲、隱孢子蟲等血清只有較低的或無交叉反應(yīng)。因此，多數(shù)學(xué)者趨向性認為新孢子蟲分類應(yīng)為：原生動物門（Protozoa）、頂復(fù)亞門（Apicomplexa）、孢子蟲綱（Sporozoa）、球蟲亞綱（Coccidomorpha）、真球蟲目（Coccidiida）、住肉孢子蟲科（Sarcocystidae）、新孢子蟲屬（Neospora）。

N.caninum在生活史中有三種形態(tài)：速殖子、組織包囊和卵囊。速殖子寄生于感染動物的巨噬細胞、神經(jīng)細胞、肌細胞、成纖維細胞等等。位于宿主細胞細胞質(zhì)的帶蟲空泡中，常呈卵圓形、新月形或球形，大小為3～7×1～5μm[7]。N.caninum的組織包囊最初被發(fā)現(xiàn)于神經(jīng)組織中，包囊壁可厚達4μm，包囊中含有大量慢殖子。與其他原蟲相似，慢殖子內(nèi)有致密顆粒、棒狀體和微線體等細胞器[8]。N.caninum卵囊被發(fā)現(xiàn)于犬的糞便中，它的長寬比例約為1.04（10.6～12.4×10.6～12.0）。卵囊孢子化的時間為24h。卵囊壁厚度為0.6～0.8μm，每個卵囊內(nèi)含有2個孢子囊，每個孢子囊內(nèi)有4個子孢子[9]。

2 新孢子蟲病的流行

2.1 新孢子蟲病的傳播

2.1.1 宿主范圍

N.caninum在發(fā)育階段表現(xiàn)出幾種不同的形態(tài)，即速殖子、組織包囊、卵囊、裂殖體等。該蟲體在中間宿主體內(nèi)以速殖子和組織包囊的形式存在，終末宿主產(chǎn)生并排出卵囊，卵囊在外界環(huán)境中24h內(nèi)完成孢子化形成孢子化卵囊。N.caninum可感染包括家養(yǎng)動物和野生動物在內(nèi)的大量動物，已在麻雀、鸚鵡等多種野生鳥類、田鼠、水豚、兔等動物血清中檢測到N.caninum抗體，以及在牛、綿羊、水牛、犬、馬、野牛和白尾鹿等少數(shù)宿主體內(nèi)分離到該蟲體，證實這些宿主為N.caninum的中間宿主[4]。近來，Martins等對美洲不同國家的散養(yǎng)雞研究中發(fā)現(xiàn)N.caninum血清抗體陽性率高達39.5%，推測散養(yǎng)雞的感染源來自土壤[10]。

與剛地弓形蟲不同的是，新孢子蟲很難在宿主體內(nèi)分離到N.caninum，只是在多種動物血清中檢測到N.caninum抗體。目前只在犬的糞便中找到N.caninum卵囊，這提示犬是其唯一的終末宿主。關(guān)于它能否感染人類，目前尚無準(zhǔn)確定論。

2.1.2 感染途徑

口服N.caninum組織包囊是肉食動物感染該病的主要途徑。對于肉食動物來說，它們可通過食入含N.caninum組織包囊的動物組織成為犬感染該病的一類傳染源[4]，如農(nóng)村散養(yǎng)犬的N.caninum血清抗體陽性率高于城市寵物犬的陽性率可能與此有關(guān)。目前，胎盤感染是唯一被證實的自然傳播途徑，這種感染方式可在同一母畜連續(xù)幾次懷孕中使胎兒感染上N.caninum。但是否經(jīng)交配傳播，還未得到證實。N.caninum感染懷孕母畜后引起母畜的寄生蟲血癥，繼而導(dǎo)致胎兒發(fā)生母源性感染或是持續(xù)的內(nèi)源性感染。繼寄生蟲血癥之后，N.caninum穿過胎兒胎盤絨毛之前，N.caninum會在母體子宮膜上黏附。至于流產(chǎn)的發(fā)生，是胎兒和胎盤在多種因素的相互作用下嚴重損傷后導(dǎo)致的。首先，N.caninum誘導(dǎo)胎盤損傷而造成胎兒死亡。另外，母體激素的失調(diào)和細胞因子的釋放，有可能導(dǎo)致母體免疫排斥性排出胎兒。試驗發(fā)現(xiàn)在N.caninum感染孕畜14天的胎兒組織內(nèi)發(fā)現(xiàn)新孢子蟲速殖子。

2.2 危險性因素

N.caninum感染及其危險性因素的研究對該病的防控工作起重要作用。研究結(jié)果顯示，在不同地區(qū)與管理模式下，N.caninum感染的危險因素也不盡相同。Dubey等在2007年概述了該病的潛在危險因素，人們普遍認為養(yǎng)牛場中犬的存在增加了牛群對N.caninum的感染率。犬是N.caninum的終末宿主，牛群可通過誤食被犬排出的N.caninum卵囊感染的食物而增加后天感染Neosporiasis的可能性。而養(yǎng)牛場的犬通常會誤食患牛流產(chǎn)的胎兒或胎盤，犬的這種攝食習(xí)慣間接性地增加了牛對該病的感染率。目前，N.caninum感染的危險因素包括以下幾方面：奶牛的流產(chǎn)史、年齡、地理位置、懷孕階段、犬的存在、季節(jié)及環(huán)境衛(wèi)生。

2.3 新孢子蟲病的流行情況

新孢子蟲病的流行呈世界性分布，世界上包括中國在內(nèi)的30余個國家和地區(qū)報道新孢子蟲病的流行。巴西東北部山羊的新孢子蟲病血清抗體陽性率為2.7%（26/975），西班牙西北部的肉牛和奶牛的新孢子蟲病血清抗體陽性率分別為25.6%和22.5%。阿爾及利亞87只無癥狀的犬中，68只（78%）表現(xiàn)為新孢子蟲病血清陽性。另外，鳥禽類也有較高的血清陽性率，R. Molina-Lopez等用間接免疫熒光法檢測了來自西班牙東北部地區(qū)67只野生烏鴉的血清樣品，結(jié)果顯示新孢子蟲感染的血清抗體陽性率高達35.8%。Martins等對美洲一些國家的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，美洲野生雞群中的新孢子蟲血清抗體平均陽性率為39.5%，其中，墨西哥、美國、哥斯達黎加、尼加拉瓜、巴西、哥倫比亞的陽性率分別為18.5%、7.2%、39.5%、83.6%、34.3%、11.2%。

我國一些省份和地區(qū)陸續(xù)有新孢子蟲病感染的報道。鄒世穎等對山東、河北、內(nèi)蒙古等3地奶牛的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，新孢子蟲病的感染率分別為17%、37%、3.3%。在河南5個地區(qū)的27家奶牛場，奶牛的犬新孢子蟲病血清抗體陽性率為16.88%，場感染率為85. 19%（23/27）；新疆地區(qū)，奶牛的新孢子蟲病陽性血清陽性率為13.1%，其中具有流產(chǎn)史的奶牛的血清陽性高達20.4%；青海山羊的新孢子蟲血清抗體陽性率為1.42%。另外，張煥容等在四川阿壩，檢測發(fā)現(xiàn)牦牛的新孢子蟲抗體陽性率為6.1%。

3 新孢子蟲病的危害

3.1 致病機制

3.1.1 對生產(chǎn)性能的影響

本病一年四季均發(fā)，出現(xiàn)散發(fā)性或地方性流行的流產(chǎn)。鄧沖等用PCR方法對流產(chǎn)胎牛體內(nèi)N.caninum進行鑒定，首次證實我國大陸流產(chǎn)胎牛腦組織中存在新孢子蟲。

N.caninum感染懷孕母畜并可引起母畜的寄生蟲血癥，繼而導(dǎo)致胎兒發(fā)生母源性感染或是持續(xù)的內(nèi)源性感染，這是決定胎兒命運的重要因素。繼寄生蟲血癥之后，N.caninum穿過胎兒胎盤絨毛之前，會在母體子宮膜上粘附。流產(chǎn)首先是N.caninum誘導(dǎo)胎盤損傷，另外，由于母體激素的失調(diào)和細胞因子的釋放，有可能導(dǎo)致母體免疫排斥性排出胎兒。調(diào)控細胞因子（如IL-10）和炎性細胞因子（如IFN-γ）的產(chǎn)生，以及速殖子對胎兒的直接損傷，均對胎兒起致命的存活有極大的威脅。相對較高濃度的催乳素可以降低隱孢子蟲病患牛的流產(chǎn)率。研究顯示，孕酮通過可以調(diào)節(jié)母體Th1/Th2來加強免疫應(yīng)答。然而，在新孢子蟲病母牛懷孕期間對其人工補充孕酮并不能降低流產(chǎn)率，反而會因為犬新孢子蟲的高滴度抗體以及細胞因子IFN-γ而增加孕牛流產(chǎn)的風(fēng)險。

3.1.2 對神經(jīng)中樞的影響

N.caninum感染還可導(dǎo)致新生胎兒四肢運動障礙和神經(jīng)系統(tǒng)紊亂。David B等報道，在母畜和胎兒感染N.caninum后，機體發(fā)生炎癥并受到嚴重損傷的同時，會進入胎兒的血液，侵入到更遠的組織內(nèi)，尤其偏好中樞神經(jīng)系統(tǒng)。對于幼齡胎兒，新孢子蟲的大量寄生會導(dǎo)致其神經(jīng)纖維網(wǎng)相對于炎癥較嚴重且廣泛的損傷，而對于妊娠后期的胎兒，損傷僅局限于小神經(jīng)膠質(zhì)細胞、有活性的星形細胞和單核細胞。胎兒細胞的損傷和淋巴結(jié)炎癥也可能發(fā)生于心臟、骨骼肌、肺和肝臟部位。Dubey等報道，除了流產(chǎn)，新生幼畜還表現(xiàn)有神經(jīng)癥狀。幼畜四肢屈曲或過度伸展，神經(jīng)病學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)其共濟失調(diào)、膝反射減弱以及喪失本體感覺意識。偶然伴隨幼畜還發(fā)生有突眼癥、腦積水、脊髓狹窄。Dubey等對其有了進一步的發(fā)現(xiàn)，他們在自然感染犬新孢子蟲的奶牛、綿羊、山羊、鹿甚至馬的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)犬新孢子蟲的厚壁組織包囊。他們在兩只自然感染的犬體內(nèi)發(fā)現(xiàn)這種組織包囊有一個波狀的外輪廓，包囊壁可厚達0.5～0.7μm。

3.2 臨床癥狀與病理變化

3.2.1 臨床癥狀

患牛呈現(xiàn)四肢無力，彎曲，關(guān)節(jié)拘謹，后肢麻痹，運動失調(diào)，頭部震顫明顯，頭蓋骨變形，眼瞼反射遲鈍，角膜輕度混濁。孕畜發(fā)生流產(chǎn)或產(chǎn)死胎、木乃伊胎，即使能產(chǎn)下胎兒，體質(zhì)也較虛弱。流產(chǎn)呈散發(fā)性或地方性流行，一年四季均可發(fā)生，同一母?？赡芊磸?fù)發(fā)生流產(chǎn)。先天感染的犢牛一生下來就表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，不能站立，四肢虛弱或僵直；或者臨床表現(xiàn)正常，但在1～2周后出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。

3.2.2 病理變化

可見到小腦發(fā)育不全、腦膜腦炎、脊髓炎、脊髓中灰質(zhì)少，形成灶性空洞等現(xiàn)象，在病變中可檢查到新孢子蟲的組織包囊。心肌炎比較嚴重，心肌的單核細胞中寄生有大量的速殖子。肝門靜脈周圍單核細胞浸潤，出現(xiàn)不同程度的壞死灶。胎盤絨毛層的絨毛壞死，并有蟲體病灶。

4 新孢子蟲病的診斷與防治

4.1 新孢子蟲病的診斷

新孢子蟲病的生前診斷主要依據(jù)臨床癥狀，若發(fā)現(xiàn)母畜流產(chǎn)，幼畜癱瘓，出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，尤其是一窩或幾窩出現(xiàn)流產(chǎn)癥狀時，應(yīng)懷疑是新孢子蟲病。死后診斷主要檢查病變組織中有無新孢子蟲包囊，重點檢查中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉和肝臟。病變主要是內(nèi)臟組織有顆粒結(jié)節(jié)，腦萎縮，皮膚發(fā)生化膿性皮炎，肌肉有黃白色條紋等。

確診此病必須進行實驗室診斷。常用的診斷方法有間接熒光抗體試驗（IFAT）、免疫組織化學(xué)法、ELISA、PCR、乳膠凝集試驗（NAT）、免疫印跡法（IB）等。目前我國常用的診斷方法是ELISA法，適合奶牛場大群檢疫。商品試劑盒有美國IDEXX公司生產(chǎn)的N.caninum Antiboby Test Kit和瑞典Svanova公司生產(chǎn)的N.caninum Antiboby Iscom ELISA Test Kit等。

新孢子蟲與剛地弓形蟲在臨床癥狀上很相似，容易誤診為弓形蟲病，光學(xué)鏡下二者的速殖子非常相近，也很難區(qū)分。但應(yīng)用超微電鏡檢查可發(fā)現(xiàn)，新孢子蟲速殖子的棒狀體電子密度很高，而剛地弓形蟲的速殖子呈蜂窩狀。另外，利用IFAT、ABC等對新孢子蟲與龔地弓形蟲的檢測無交叉反應(yīng)的特性，亦可鑒別診斷此病。

4.2 新孢子蟲病的防治

4.2.1 藥物治療

迄今為止，尚未發(fā)現(xiàn)治療牛新孢子蟲病特效藥物。Maybew在疾病早期試用甲氧芐苯胺嘧啶、磺胺嘧啶和乙胺嘧啶等抗弓形蟲藥物進行治療，有一定的效果。Dubey等研究認為下列藥物有一定作用：復(fù)方新諾明，即甲氧氨芐嘧啶（TMP）每日200mg/kg與磺胺甲基異惡唑（SMZ），每日100mg/kg，分4次服用，連續(xù)2周。羥基乙磺酸戊烷脒，804mg/kg/d，連用12-14d，本品毒性較大，慎用。MP合劑或片劑含乙胺嘧啶25mg，磺胺六甲氧嘧啶500mg首次每日3片，以后每日2片，連用2周。

4.2.2 預(yù)防措施

目前預(yù)防奶牛新孢子蟲病的有效措施主要是通過流行病學(xué)檢測，凈化牛群，對引進的牛只進行嚴格的檢疫、隔離飼養(yǎng)、確定無新孢子蟲感染方可并群；對奶牛場內(nèi)及其周圍的犬只進行嚴格的管理，禁止犬進入牛欄，禁止給犬飼喂牛的胎盤、流產(chǎn)的胎牛。禁止犬進入草料場，及接觸奶牛飲水池，減少奶牛與犬直接接觸的機會，以期切斷傳播途徑而達到預(yù)防的目的。在免疫預(yù)防方面，已知美國農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)上市了一種命名為NeoGuard的滅活苗，據(jù)稱該疫苗具有使用安全，注射部位反應(yīng)小等特點，能顯著降低健康初孕母牛的流產(chǎn)率，但還不能切斷胎兒或胎盤感染。我國目前還沒有有效的疫苗和藥物，因此快速、準(zhǔn)確地診斷和采取有效的防制措施對防制奶牛新孢子蟲病是十分重要的。

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S855.9

：A

：1005-944X（2014）05-0033-04

級制度是基于風(fēng)險分析的基礎(chǔ)而制定的，并在每個等級狀況構(gòu)成要素中規(guī)定了防控FMD應(yīng)當(dāng)做到的相應(yīng)措施以及向低風(fēng)險狀況過渡措施，具有較強的針對性和指導(dǎo)性?！翱谔阋邼u進性控制計劃”中對FMD不同疫病狀況的可以對我國動物疫病狀況評估的疫病分級、評估指標(biāo)體系建設(shè)方面有一定的指導(dǎo)意義。