貫葉連翹提取物對(duì)小鼠抗應(yīng)激反應(yīng)及運(yùn)動(dòng)力竭小鼠抗氧化活性的影響*

葉婷婷，李 樂(lè)，廖瑩瑩，顏繼忠，童勝?gòu)?qiáng)

（1.浙江工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院05藥劑，2.浙江工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，杭州310014）

貫葉連翹（hypericum perforatum L.），又名圣約翰草（St.John’swort），在歐洲長(zhǎng)期被作為治療皮膚表面創(chuàng)傷和抗抑郁藥物，是近年來(lái)歐美最暢銷的植物藥之一，已被德、美等國(guó)收錄于藥典［1］。中國(guó)傳統(tǒng)用于鎮(zhèn)靜、抗炎、傷口愈合等，貫葉連翹提取物（Hypericum perforatum L.extract，HPLE）成分主要包括：苯并二蒽酮類化合物，貫葉金絲桃素類化合物，（類）黃酮類化合物等［2］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)急性應(yīng)激反應(yīng)和運(yùn)動(dòng)力竭小鼠抗氧化實(shí)驗(yàn)，旨在探討HPLE對(duì)小鼠急性應(yīng)激反應(yīng)及抗氧化活性的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器

清潔級(jí) ICR小鼠160只，雌雄各半，體重（18～22）g，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（浙）2008-0033，自由飲水，進(jìn)食。藥物：HPLE，由浙江工業(yè)大學(xué)化學(xué)制藥實(shí)驗(yàn)室提供，為棕黑色粉末，蒸餾水配制成3%濃度混懸液，40℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?22分光光度計(jì)（上海分析儀器廠），超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒（南京建成生物工程研究所），其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 抗疲勞實(shí)驗(yàn) 取40只ICR小鼠，雌雄各半，隨機(jī)均分為生理鹽水（NS）對(duì)照組及高、中、低劑量 HPLE組（n＝10）。HPLE組分別按1.5 g／kg、0.75 g／kg和 0.38 g／kg，ig，Bid，連續(xù)給藥7 d；NS組等體積生理鹽水ig。末次給藥2 h后，每只小鼠尾部加負(fù)荷物2 g，置于游泳槽內(nèi)（水溫22℃±1℃，深度30 cm），觀察各組小鼠游泳時(shí)間的變化，以小鼠力竭沉到水底10 s內(nèi)不再浮出水面為止。

1.2.2 常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn) ICR 40只小鼠，雌雄各半，隨機(jī)均分為NS對(duì)照組及HPLE高、中、低劑量組（n＝10）。分別按ig HPLE 1.5 g／kg、0.75 g／kg和 0.38 g／kg，Bid，連續(xù)用藥 7 d；NS組ig等體積生理鹽水。末次給藥2 h后，在盛有15 g鈉石灰的250ml容積的廣口瓶中（每瓶放入1只小鼠），用凡士林密封瓶口，記錄各組小鼠存活時(shí)間，進(jìn)行分析比較。

1.2.3 常壓耐低溫實(shí)驗(yàn) ICR 40只小白鼠，雌雄各半，隨機(jī)均分為NS對(duì)照組及HPLE高、中、低劑量組（n＝10）。分別按ig HPLE 1.5 g／kg、0.75 g／kg和 0.38 g／kg，Bid，連續(xù)給藥 7 d；NS組ig等體積生理鹽水。末次給藥2 h后，將各分組籠小數(shù)，放入-18℃冰箱1.5 h后，每隔0.5 h觀察1次，以 NS組小鼠死亡1／2為界，記錄各組小鼠死亡數(shù)。

1.2.4 運(yùn)動(dòng)力竭小鼠實(shí)驗(yàn)及血樣采集 另取ICR小鼠40只，雌雄各半。隨機(jī)均分為NS對(duì)照組及HPLE高、中、低劑量組（n＝10）。分別按 ig HPLE 1.5 g／kg、0.75 g／kg和 0.38 g／kg，qd；對(duì)照組：ig等量 NS，qd；隔日稱體質(zhì)量，觀察小鼠生長(zhǎng)情況。連續(xù)用藥2周后，開始每天進(jìn)行游泳訓(xùn)練0.5 h，第21天給藥0.5 h后，各組小鼠于尾部負(fù)荷2 g，放入水深30 cm、水溫（25.0±0.5）℃的水中游泳至力竭（小鼠沉入水中 3 s，可上浮沒(méi)有淹死），迅速取出休息20min后，剪頭取血于玻璃試管，血液凝固后，3 000 r／min離心 10 min；取上清液于 EP管中，-20℃冰箱貯藏備用。

1.2.5 血清 SOD、GSH-Px、MDA活性測(cè)定 分別按 SOD、GSH-Px、MDA試劑盒說(shuō)明書操作，722分光光度計(jì)檢測(cè)光密度值，結(jié)果按相關(guān)公式計(jì)算。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 抗疲勞（負(fù)重游泳）實(shí)驗(yàn)

與NS組比較，HPLE高、中、低劑量組可明顯延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳持續(xù)時(shí)間，顯示劑量依賴性（P＜0.05，P＜0.01，表1）。

Tab.1 Effectofhypericum perforatum L.extract（HPLE）on antifatigue ability ofmice（ˉx±s，n＝10）

2.2 常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)

與NS比較，HPLE可明顯延長(zhǎng)小鼠常壓缺氧狀態(tài)下的存活時(shí)間，顯示劑量依賴性（P＜0.05，P＜0.01，表2）。

Tab.2 Effect of hypericum perforatum L.extract（HPLE）on the hypoxia tolerance ofmice（ˉx±s，n＝10）

2.3 常壓耐低溫實(shí)驗(yàn)

與NS比較，HPLE可明顯延長(zhǎng)小鼠常壓耐低溫狀態(tài)下的存活時(shí)間，顯示劑量依賴性。（P＜0.05，P＜0.01，表 3）。

Tab.3 Effect of hypericum perforatum L.extract（HPLE）on the tolerance ability to low temperature inmice（n＝10）

2.4 HPLE對(duì)運(yùn)動(dòng)力竭小鼠血清中SOD、GSH2Px活性及MDA的影響

同NS組比較，HPLE低、中、高3個(gè)劑量組均能顯著升高血清中SOD及GSH-Px活性，降低MDA水平，顯示劑量依賴性（P＜0.05，P＜0.01，表 4）。

3 討論

抗應(yīng)激能力是機(jī)體對(duì)不利環(huán)境適應(yīng)能力的體現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)采用小鼠負(fù)重游泳法，使小鼠全身劇烈運(yùn)動(dòng)消耗大量的能量和氧氣，同時(shí)產(chǎn)生大量的乳酸。結(jié)果表明，HPLE可延長(zhǎng)負(fù)重小鼠的游泳時(shí)間，提示其具有一定的強(qiáng)壯和抗疲勞作用，機(jī)制可能是使機(jī)體更節(jié)省地利用糖原和三磷酸腺苷為肌肉活動(dòng)提供更充分的能量。

缺氧及低溫刺激均可使機(jī)體產(chǎn)生一系列保護(hù)性應(yīng)激反應(yīng)，此時(shí)腎上腺皮質(zhì)激素分泌增加，而當(dāng)腎上腺皮質(zhì)激素的儲(chǔ)備已經(jīng)耗竭，機(jī)體抗應(yīng)激能力則大為下降［3］。HPLE能增強(qiáng)缺氧及低溫狀態(tài)下的存活時(shí)間，提示HPLE能使動(dòng)物降低耗氧量和增強(qiáng)抗低溫能力，推測(cè)機(jī)制可能與加速衰竭的腎上腺皮質(zhì)功能恢復(fù)有關(guān)。

Tab.4 Effect of hypericum perforatum L.extract（HPLE）on activitiesof SOD and GSH-Px，and level ofMDA in serum of exhaustive exercisemice（ˉx±s，n＝10）

電離輻射、體內(nèi)酶促或非酶促反應(yīng)可促使機(jī)體產(chǎn)生自由基，作用于細(xì)胞膜中的類脂質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)胞膜破壞，誘導(dǎo)細(xì)胞死亡［4］。同時(shí)脂質(zhì)過(guò)氧化的代謝終產(chǎn)物MDA促使膜蛋白、酶發(fā)生交聯(lián)作用，加重細(xì)胞損害；正常情況下，自由基會(huì)被體內(nèi)酶系統(tǒng)如 SOD、CAT、GSH-Px迅速清除［5］。本研究結(jié)果表明，HPLE可有效提高運(yùn)動(dòng)力竭小鼠體內(nèi)的SOD和GSH-Px活性，降低血清中脂質(zhì)過(guò)氧化終產(chǎn)物MDA的量，減輕活性氧自由基對(duì)機(jī)體的攻擊。

綜上所述，HPLE具有抗應(yīng)激反應(yīng)的作用，并具有一定的抗氧化作用。鑒于其無(wú)明顯毒性，臨床用于提高耐力、抗疲勞、抗氧化，具有良好應(yīng)用前景。

［1］ 歐陽(yáng)輝，謝麗艷，黃小方，等.貫葉連翹的化學(xué)成分與藥理研究進(jìn)展及前景展望［J］.江西中醫(yī)藥，2010，41（7）：78-80.

［2］ 尚 好，錢雅珍，陶厚權(quán)，等.貫葉連翹提取物對(duì)擴(kuò)張型心肌病大鼠縫隙連接蛋白Cx43的影響［J］.中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志，2013，29（4）：330-332.

［3］ 張海英，薛 潔，史玉柱，等.人參對(duì)脾虛及正常小鼠抗應(yīng)激能力的影響［J］.中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2009，（11）：42-43.

［4］ 黎明華，湯長(zhǎng)發(fā)，歐陽(yáng)江瓊.紅景天苷對(duì)運(yùn)動(dòng)后自由基和能量代謝改變的影響［J］.中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志，2012，28（1）：53-56.

［5］ 龍碧波.絞股藍(lán)提取物對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)能力的影響［J］.中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志，2010，26（3）：339-340.