米非司酮對大鼠恐懼條件化及消退的影響*

付 娟，田紹文，馬原野

（1.濱州學(xué)院生命科學(xué)系，山東濱州256603；2.中國科學(xué)院心理研究所心理健康重點實驗室，北京100101；3.南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院生理教研室，湖南衡陽421001；4.中國科學(xué)院昆明動物研究所，云南昆明650223；5.中國科學(xué)院生物物理研究所，北京100101）

很多研究表明米非司酮可以通過阻斷糖皮質(zhì)激素受體參與學(xué)習(xí)記憶過程［1］，我們前期的研究也發(fā)現(xiàn)，米非司酮可以劑量依賴性的影響小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力，恐懼條件化模型是研究創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙（posttraumatic stress disorder，PTSD）的一種典型動物模型，PTSD作為一種負(fù)性情緒，已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。本研究擬探討米非司酮對大鼠恐懼條件化及消退的影響，具有重要的理論意義和臨床參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、藥物及分組

清潔級成年雄性SD大鼠40只（購自昆明醫(yī)學(xué)院動物中心），體重275～300 g，單籠飼養(yǎng)，溫度濕度保持恒定，自由取食飲水，12 h光照循環(huán)，每天早上7點鐘開燈。米非司酮（RU486，北京紫竹藥業(yè)有限公司生產(chǎn)），生理鹽水溶解，濃度為10mg／ml。動物被隨機分為 4組（n＝10）：低劑量 RU486組（10mg／kg）與其對照組；高劑量 RU486組（20 mg／kg）與其對照組。

1.2 實驗裝置

行為實驗在兩個場景中進行，實驗箱A構(gòu)成場景A，場景B構(gòu)成實驗箱B（上海吉量公司提供）。實驗箱A無頂（40 cm×40 cm×50 cm），為黑色不透明的有機玻璃材料，四壁貼有直徑為5.5 cm的白色圓形圖案，間距為3 cm。地板由25根銅桿構(gòu)成（直徑為5mm），每兩銅桿間距為1.5 cm，通過導(dǎo)線與電刺激器相連提供電擊。整個裝置置于隔音柜中（50 cm×50 cm×60 cm），天花板上固定的小音箱提供聲音刺激，白熾燈（15W）照明；計算機程序控制刺激的呈現(xiàn)。每只大鼠實驗前用氫氧化銨溶液（5%）擦實驗箱，并把有少量此溶液的不銹鋼盤放在格子地板下提供氣味，65 dB的風(fēng)扇聲提供白噪聲。在實驗箱B的四壁上貼白色垂直豎條（寬3 cm，間距4.5 cm），地板上鋪有黑色平滑的塑膠墊，實驗前用無水乙醇擦實驗箱，無水乙醇提供氣味，用錄制的電視噪音（65 dB）提供背景噪聲，其他與實驗箱A相同，實驗裝置與前期研究使用的相同［2］。

1.3 實驗程序

給藥組腹腔注射RU486連續(xù)4 d（低劑量組為10 mg／kg，高劑量組為20 mg／kg），對照組每天給予 10 ml／kg的生理鹽水。行為學(xué)實驗分四個階段，每個階段給藥組與對照組處理相同。1 d是適應(yīng)期，每只大鼠分別適應(yīng)實驗箱A和B各30 min。2 d是恐懼條件化訓(xùn)練期，在實驗箱A中進行，動物放入 3min后聲音（4 kHz，80 dB，持續(xù)10 s，下同）第一次呈現(xiàn)，電擊（0.4mA，持續(xù) 0.5 s）在聲音結(jié)束前 0.5 s呈現(xiàn)，與聲音同時結(jié)束，聲音與電擊配對呈現(xiàn)5次（每次作為一個trial），相鄰兩次聲音之間的間隔為90～150 s（均值120 s，下同），第五次聲音結(jié)束30 s后把大鼠從實驗箱A拿出，放回鼠籠。3 d是檢測條件化恐懼表達(dá)階段，也是消退訓(xùn)練階段，把大鼠放入實驗箱B，3min后聲音第一次呈現(xiàn)，沒有電擊，呈現(xiàn)10次（每次作為一個trial，相鄰兩次合并為一個trial block），相鄰兩次之間平均間隔為120 s。第十次聲音結(jié)束30 s后把大鼠放回鼠籠。4 d進行消退記憶再現(xiàn)檢測，把大鼠放入實驗箱B，3 min后第一次呈現(xiàn)聲音，無電擊，呈現(xiàn)10次，相鄰兩次之間平均間隔為120 s，第十次聲音結(jié)束30 s后把大鼠從實驗箱B取出放回鼠籠，除給藥外，實驗程序與前期研究使用的相同［2］。

1.4 觀察指標(biāo)

僵直（freezing）是目前恐懼行為的黃金指標(biāo)，是嚙齒類動物面臨傷害性刺激時特有的行為反應(yīng)，表現(xiàn)為除呼吸運動外，動物處于靜止?fàn)顟B(tài)。通過實驗錄像用秒表記錄各階段中每次聲音呈現(xiàn)時間內(nèi)的僵直時間，計算百分比。

1.5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示，用 SigmaStat 3.1軟件對數(shù)據(jù)進行ANOVA方差分析。

2 結(jié)果

2.1 低劑量RU486處理對大鼠恐懼條件化及消退的影響

（1）恐懼表達(dá)檢測階段，低劑量RU486組與其對照組大鼠獲得了同等程度的條件化恐懼，兩組大鼠的僵直水平組間差異不顯著；（2）消退再現(xiàn)檢測階段，RU486組與其對照組大鼠的僵直水平相比恐懼表達(dá)階段都有下降，但兩組之間差異不顯著，表明低劑量RU486處理對大鼠的恐懼條件化表達(dá)以及消退記憶的再現(xiàn)沒有影響（圖1）。

Fig.1 Percent freezing of RU486 and control groups on fear expression phase and recall of extinction phase（ˉx±s，n＝10）

2.2 高劑量RU486處理對大鼠恐懼條件化及消退的影響

（1）恐懼表達(dá)檢測階段，高劑量RU486組與其對照組大鼠獲得了同等程度的條件化恐懼，兩組大鼠的僵直水平組間差異不顯著；（2）消退再現(xiàn)檢測階段，RU486組（6.96±1.84，7.01±1.43，6.28±1.61）與其對照組（3.91±1.92，3.90±1.64，3.64±2.01）大鼠的僵直水平相比，恐懼表達(dá)階段都有下降，且兩組之間的僵直水平差異有顯著性（P＜0.05），表明高劑量RU486處理對大鼠的恐懼條件化表達(dá)沒有影響，但是損害了消退記憶的再現(xiàn)（圖2）。

3 討 論

PTSD是指個體由于經(jīng)歷對生命具有威脅的事件或嚴(yán)重的創(chuàng)傷，導(dǎo)致癥狀長期持續(xù)的精神障礙［3］。條件性恐懼模型是創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的典型動物模型，主要研究恐懼記憶的獲得、存儲、提取和消退等過程［4］。以往研究結(jié)果表明，恐懼消退不是對恐懼記憶的遺忘，而是一種新的學(xué)習(xí)過程，恐懼記憶與消退記憶共存且競爭出現(xiàn)，恐懼消退再現(xiàn)過程受阻會引起神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病，如PTSD［5］。

Fig.2 Percent freezing of RU486 and control groups on fear expression phase and recall of extinction phase（ˉx±s，n＝10）*P＜0.05 vs control

有臨床研究表明，米非司酮對抑郁癥具有快速的改善作用［6］。我們的結(jié)果顯示，低劑量米非司酮對大鼠的條件化恐懼表達(dá)及消退記憶的再現(xiàn)都沒有影響，而高劑量米非司酮對大鼠的條件化恐懼表達(dá)沒有影響，卻損害了消退記憶的再現(xiàn)，這與臨床研究結(jié)果似乎相悖，有意思的是，與Conrad實驗室RU486微注射于杏仁外側(cè)核的結(jié)果一致［7］。很多研究證實前額葉與杏仁核構(gòu)成恐懼消退的神經(jīng)基礎(chǔ)，前額葉對杏仁核的投射決定了消退記憶是否再現(xiàn)。由于糖皮質(zhì)激素的受體廣泛分布在與學(xué)習(xí)記憶相關(guān)的腦區(qū)，并且對相應(yīng)的神經(jīng)元可塑性進行調(diào)節(jié)，因此糖皮質(zhì)激素對個體學(xué)習(xí)記憶的形成有著重要的影響［8］。本研究結(jié)果提示，高劑量的米非司酮通過阻斷糖皮質(zhì)激素受體的作用，進而可能通過某種機制阻礙了前額葉對杏仁核的這種興奮性投射，從而抑制了消退記憶的表達(dá)，但這種影響機制仍需更多的研究來闡明。

［1］ Brogden RN，Goa KL，F(xiàn)oulds D.Mifepristone.A review of its pharmacodynamic and pharmacokinetic properties，and therapeutic potential［J］.Drugs，1993，45（3）：384-409.

［2］ 付 娟，田紹文，姚志剛.快速眼動睡眠剝奪對大鼠恐懼消退再現(xiàn)的影響［J］.中國應(yīng)用生理學(xué)雜志，2011，27（3）：318-320.

［3］ 安獻(xiàn)麗，王文忠，鄭希耕.阻礙條件性恐懼記憶消退的原因分析［J］.心理科學(xué)進展，2009，17（1）：126-131.

［4］ Kim JJ，Jung MW.Neural circuits and mechanisms involved in Pavlovian fear conditioning：a critical review［J］.Neurosci Biobehav Rev，2006，30（2）：188-202.

［5］ Bouton ME，García-Gutiérrez A，Zilski J，et al.Extinction in multiple contexts does not necessarilymake extinction less vulnerable to relapse［J］.Behav Res Ther，2006，44（7）：983-994.

［6］ Flores BH，Kenna H，Keller J，etal.Clinical and biological effects ofmifepristone treatment for psychotic depression［J］.Neuropsychopharmacol，2006，31（6）：628-636.

［7］ Conrad CD，MacMillan DD，Tsekhanov S，etal.Influence of chronic corticosterone and glucocorticoid receptor antagonism in the amygdala on fear conditioning［J］.Neurobiol Learn Mem，2004，81（3）：185-199.

［8］ de Quervain DJ，Roozendaal B，McGaugh JL.Stress and glucocorticoid impair retrieval of long-term spationalmemory［J］.Nature，1998，394（6695）：787-790.