• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    金櫻子對(duì)阿霉素心肌損傷大鼠的抗氧化和抗凋亡保護(hù)作用

    2014-01-18 03:09:24羅衛(wèi)民劉越峰羅湘玉
    關(guān)鍵詞:金櫻子阿霉素試劑盒

    羅衛(wèi)民 劉越峰 羅湘玉 張 軍▲

    1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬十堰市太和醫(yī)院心胸外科,湖北十堰 442000;2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬十堰市人民醫(yī)院眼科,湖北十堰 442000

    阿霉素 (Doxorubicin,DOX) 是一種廣泛應(yīng)用于腫瘤治療的蒽環(huán)類抗生素。盡管其對(duì)包括白血病在內(nèi)的多種惡性腫瘤具有抑制作用,但其蓄積性不可逆性心肌病以及充血性心衰限制了其使用[1]。 DOX 導(dǎo)致的毒性心肌病原因很多, 其中活性氧 (reactive oxygen species,ROS) 介導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡是其重要機(jī)制之一[2]。 因此,在DOX 治療的同時(shí)預(yù)防性使用抗氧化藥物干預(yù),有望降低其副作用[3]。 近年來(lái),某些藥用植物在心血管疾病的預(yù)防過(guò)程中具有一定的預(yù)防作用[4],金櫻子為薔薇科金櫻子(Rosa Laevigata Michx.,RLM)的果實(shí),研究發(fā)現(xiàn)它具有強(qiáng)大的抗氧化和清除自由基能力[5-6]。本研究旨在觀察RLM 對(duì)DOX 誘發(fā)的心臟毒性的保護(hù)作用。

    1 材料與方法

    1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑

    DOX 購(gòu)自意大利Pharmacia 公司(批號(hào):8NB002-A), 血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶 (aspartate transaminase,AST)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自Quimica Clinica Aplicada。 血清總膽固醇(total cholesterol,TC)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)和肌酸激酶(creatine kinase,CKMB)試劑盒為Stanbio 產(chǎn)品。還原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)及丙二醛(myocardial lipid peroxide,MDA)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物技術(shù)研究所。心肌腫瘤壞死因子α(tumour necrosis factor-alpha,TNF-α)ELISA 試劑盒和caspase-3 的比色測(cè)定試劑盒購(gòu)自Quantikine。 分析純?cè)噭┲饕?gòu)自Sigma-Aldrich 公司。

    金櫻子購(gòu)于十堰市中草藥材公司,經(jīng)去籽后用煎藥機(jī)進(jìn)行熬煎。金櫻子的鑒定由湖北醫(yī)藥學(xué)院肖勝全教授完成,其提取液濃度為2.0 g/mL。

    1.2 實(shí)驗(yàn)分組

    成年雄性Wistar 大鼠由湖北醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供,體重(250±5)g,在SPF 環(huán)境下給予標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室的水和食物飼養(yǎng)2 周。 大鼠隨機(jī)分成5 組:空白對(duì)照組(8 只),大鼠接受等體積的生理鹽水作為陰性對(duì)照;DOX 模型組(15 只), 大鼠連續(xù)兩周每間隔48 h注射DOX(2.5 mg/kg,ip)共6 次,使其累積劑量達(dá)15 mg/kg。RLM 高、中、低劑量組(每組各30 只):在DOX模型組的基礎(chǔ)上,大鼠每日給予RLM(1、2、5 g/kg)灌胃,DOX 停止后,持續(xù)RLM 灌胃4 周。

    1.3 血清及心肌組織的獲取

    大鼠處理結(jié)束后, 獲取血液標(biāo)本,8000×g 離心10 min 獲取血清用于測(cè)定TC、AST、LDH 和CK-MB。隨后解剖大鼠,分離心臟,生理鹽水漂洗2 次。 將心臟組織剪切,制備成20%的勻漿后,二喹啉甲酸法測(cè)定其總蛋白濃度及AST、LDH、CK-MB 活性、TC 水平(mg/dL)。

    1.4 心肌MDA 測(cè)定

    心臟勻漿與等體積2.3%的KCl 混合,600×g,4℃離心15 min,獲取上清用于測(cè)定MDA。其原理基于脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物與硫代巴比妥酸發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng),生成粉紅色的有色絡(luò)合物,從而用分光光度計(jì)以四甲氧基丙烷為標(biāo)準(zhǔn)品,532 nm 和520 nm 波長(zhǎng)處測(cè)量其OD值。 結(jié)果用nmol/mg 表示。

    1.5 心肌GSH 測(cè)定

    將等體積的心臟勻漿和預(yù)冷7.5%5-磺酸基水楊酸緩沖液以沉淀蛋白。隨后4℃,600×g 離心10 min,獲取上清用于測(cè)量還原型GSH。 其原理基于還原型GSH能與5,5-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)反應(yīng),產(chǎn)物在421 nm波長(zhǎng)處能形成最大吸收峰。 含量用mg/g 組織表示。

    1.6 TNF-α 和caspase-3 測(cè)定

    50 mg 心肌組織加入0.8 mL pH 7.4 的裂解緩沖液中制成勻漿,10 000×g,4℃離心15 min。 獲取上清用于TNF-α 和caspase-3 測(cè)定。 其中TNF-α 根據(jù)試劑盒提供的步驟進(jìn)行,采用固相夾心ELISA 法,四甲基聯(lián)苯胺(TMB)法顯色并于450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)量其吸光度,用pg/mg 蛋白表示。 采用間接法測(cè)定caspase-3活性,基于caspase-3 切除底物分子DEVD-pNA 中的發(fā)光基團(tuán)pNA,隨后在405 nm 處用測(cè)量其吸光度,用OD 值表示,從而間接反應(yīng)其活性。

    1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    應(yīng)用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析, 計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,并采用單因素方差分析數(shù)據(jù),行t 檢驗(yàn),以P < 0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 各組大鼠血生化指標(biāo)情況

    心臟功能和血脂參數(shù)顯示,DOX 注射后, 血清AST、LDH、CK-MB、TC 水平顯著增高。 而同時(shí)給予RLM 干預(yù)后,這些參數(shù)隨著RLM 濃度的增高而不斷改善,見(jiàn)表1。

    表1 不同濃度金櫻子處理對(duì)阿霉素心肌損傷大鼠血生化指標(biāo)的影響(±s)

    表1 不同濃度金櫻子處理對(duì)阿霉素心肌損傷大鼠血生化指標(biāo)的影響(±s)

    注:與空白對(duì)照組比較,*P<0.05,**P<0.01;與DOX 模型組比較,#P <0.05;AST:血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶;LDH:乳酸脫氫酶;TC:血清總膽固醇;CK-MB:肌酸激酶;RLM:金櫻子;DOX:阿霉素

    ?

    2.2 不同濃度RLM 對(duì)心肌DOX 處理后MDA 含量的影響

    與空白對(duì)照組相比,DOX 處理組能誘導(dǎo)心肌MDA明顯增加(P<0.01),給予不同濃度RLM 處理后,心肌MDA 含量隨之降低,其中DOX+5 g/kg RLM 處理后,MDA 含量降低最多[(0.82±0.14) nmol/mg]。 見(jiàn)圖1。

    圖1 RLM 對(duì)血清丙二醛含量的影響

    2.3 不同濃度RLM 對(duì)DOX 心肌毒性大鼠GSH 含量的影響

    與空白對(duì)照組相比,DOX 組大鼠血清總GSH 含量顯著降低(P < 0.01)。而同時(shí)給予不同濃度RLM 處理后,GSH 含量隨之升高。 5 g/kg RLM 處理大鼠后,GSH 含量[(1.06±0.11) pg/g]接近對(duì)照組水平(圖2)。

    圖2 RLM 對(duì)血清還原型谷胱甘肽含量的影響

    2.4 RLM 干預(yù)對(duì)大鼠血清TNF-α 含量的影響

    空白對(duì)照組大鼠血清中TNF-α 含量較低,DOX處理后TNF-α 顯著增高(P <0.01)。 RLM 干預(yù)能以劑量依賴性方式降低血清中TNF-α 的含量, 其中DOX+5 g/kg RLM 處 理 后,TNF-α 含 量 降 低 最 多[(3.49±0.05) pg/mg],見(jiàn)圖3。

    圖3 RLM 對(duì)血清TNF-α 含量的影響

    2.5 RLM 抑制caspase-3 活性

    DOX 處理后,caspase-3 活性增加了近50%。 同時(shí)經(jīng)1~5 g/kg RLM 處理后,caspase-3 活性逐漸降至正常水平, 其中DOX+5 g/kg RLM 處理后,caspase-3活性降低最多(0.83±0.02)。 見(jiàn)圖4。

    圖4 RLM 對(duì)caspase-3 活性的影響

    3 討論

    DOX 是一種抗腫瘤抗生素,可抑制RNA 和DNA的合成,對(duì)RNA 的抑制作用最強(qiáng),抗瘤譜較廣,對(duì)多種腫瘤均有作用,屬周期非特異性藥物,對(duì)各種生長(zhǎng)周期的腫瘤細(xì)胞都有殺滅作用。主要適用于急性白血病, 對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病及粒細(xì)胞白血病均有效,一般作為第二線藥物,即在首選藥物耐藥時(shí)可考慮應(yīng)用此藥。 惡性淋巴瘤, 可作為交替使用的首選藥物。DOX 和其他奎寧蒽環(huán)類藥物一樣, 主要的毒性反應(yīng)有: 白細(xì)胞和血小板減少,60%~80%的患者可發(fā)生;100%的患者有不同程度的毛發(fā)脫落, 停藥后可以恢復(fù)生長(zhǎng);心臟毒性,表現(xiàn)為心律失常,ST-T 改變,多出現(xiàn)在停藥后的1~6 個(gè)月[7]。本研究通過(guò)DOX 建立心肌毒性模型發(fā)現(xiàn),血清AST、LDH 和CK-MB 顯著增加,這可能是由于DOX 損傷心肌細(xì)胞膜后,AST、LDH 和CK-MB 漏出所致。 本研究還發(fā)現(xiàn),DOX 還可以導(dǎo)致TC 含量增高,這可能是由于DOX 導(dǎo)致腎病綜合征所致[8]。 RLM 屬薔薇科薔薇屬常綠蔓性灌木野生果樹,其果實(shí)中總糖含量達(dá)24%,其中多糖含量約為金櫻子果實(shí)的8.73%。 研究顯示,RLM 的抗氧化能力與丁基羥基甲苯相當(dāng), 并能顯著清除超氧陰離子自由基、抑制羥自由基對(duì)細(xì)胞膜的破壞而引起的溶血和脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物的形成,從而具有顯著的抗氧化作用[9]。 此外,RLM 金櫻子能減輕糖尿病腎病大鼠的氧化損傷,減少過(guò)氧化質(zhì),升高抗氧化酶活性,機(jī)制可能與干預(yù)氧化應(yīng)激、抑制核因子-κB、TNF-α 表達(dá)有關(guān)。 本研究顯示通過(guò)RLM 灌胃后, 大鼠的血清指標(biāo)得到了顯著的改善[10-13]。 同時(shí),本研究還觀察了RLM 對(duì)氧化應(yīng)激的影響。 結(jié)果發(fā)現(xiàn),DOX 能顯著增加心肌中MDA 含量,同時(shí)顯著降低GSH 水平。 這可能是DOX 導(dǎo)致氧化應(yīng)激,大量氧自由基的產(chǎn)生導(dǎo)致GSH 減少。 脂質(zhì)過(guò)氧化導(dǎo)致心肌細(xì)胞損傷后引起AST、LDH 和CK-MB漏出至循環(huán)系統(tǒng)是由于心臟損傷[14]。 口服RLM 能明顯降低脂蛋白過(guò)氧化物酶而提高GSH,這表明這些藥物能清除自由基和減少細(xì)胞損傷。 另一方面,氧化應(yīng)激可激活p38 絲裂原激活的蛋白激酶和核因子-κB,從導(dǎo)致TNF-α 大量合成, 反過(guò)來(lái)加重氧化應(yīng)激狀態(tài)而使線粒體膜通透性發(fā)生改變,隨后導(dǎo)致自由基和細(xì)胞色素C 從線粒體中釋放到細(xì)胞質(zhì), 激活caspase-3而引起凋亡發(fā)生[15-17]。 RLM 可能通過(guò)抑制組織中的應(yīng)激反應(yīng)而降低心肌中TNF-α 和caspase-3 含量。

    總之,本研究證實(shí)RLM 對(duì)DOX 導(dǎo)致的心肌損傷有保護(hù)作用,其機(jī)制可能與抗氧化、抗炎和抗凋亡有關(guān)。 在下一步研究中,筆者將對(duì)其分子機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步探討。

    [1] Gandhi H,Patel VB,Mistry N,et al. Doxorubicin mediated cardiotoxicity in rats: Protective role of felodipine on cardiac indices [J]. Environ Toxicol Pharmacol,2013,36(3):787-795.

    [2] Gilliam LA,Moylan JS,Patterson EW,et al. Doxorubicin acts via mitochondrial ROS to stimulate catabolism in C2C12 myotubes [J]. Am J Physiol Cell Physiol,2012,302(1):195-202.

    [3] Basu S,Ganguly A,Chakraborty P,et al. Targeting the mitochondrial pathway to induce apoptosis/necrosis through ROS by a newly developed Schiff's base to overcome MDR in cancer [J]. Biochimie,2012,94(1):166-183.

    [4] Uma MB,Shrivastava S,Kuncha M,et al. Ethanolic extract of Boswellia ovalifoliolata bark and leaf attenuates Doxorubicin-induced cardiotoxicity in mice [J]. Environ Toxicol Pharmacol,2013,36(3):840-849.

    [5] Jia Y,Ji L,Zhang S,et al. Total flavonoids from Rosa Laevigata Michx fruit attenuates hydrogen peroxide induced injury in human umbilical vein endothelial cells[J].Food Chem Toxicol,2012,50(9):3133-3141.

    [6] 趙云濤, 國(guó)興明,李付振. 金櫻子多糖的抗氧化作用[J].云南中醫(yī)中藥雜志,2003,24(4):35-37.

    [7] Fu Z,Guo J,Jing L,et al. Enhanced toxicity and ROS generation by Doxorubicin in primary cultures of cardiomyocytes from neonatal metallothionein-I/II null mice [J].Toxicol in Vitro,2010,24(6):1584-1591.

    [8] Ai S,Zheng J,Lin Q,et al. Proteomic analysis indicates altered expression of plasma proteins in a rat nephropathy model [J]. Clin Exp Nephrol,2013,17(1):24-31.

    [9] Zhang S,Zheng L,Dong D,et al. Effects of flavonoids from Rosa laevigata Michx fruit against high-fat diet-induced non-alcoholic fatty liver disease in rats [J]. Food Chem,2013,141(3):2108-2116.

    [10] Zhou Y,Liao Q,Luo Y,et al. Renal protective effect of Rosa laevigata Michx. by the inhibition of oxidative stress in streptozotocin-induced diabetic rats [J].Mol Med Rep,2012,5(6):1548-1554.

    [11] 趙海山,趙成建,張歡,等.甘脯酰阿霉素對(duì)斑馬魚胚胎的毒性評(píng)估[J].中國(guó)藥房,2012,23(41):3882-3884.

    [12] 劉煥龍,康寧,李軍霞,等.戊地昔布聯(lián)合阿霉素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞增殖的抑制作用及其機(jī)制研究[J].中國(guó)藥房,2012,23(29):2705-2707.

    [13] 張祥林,鄭石磊,董福仁,等.鹽酸多西環(huán)素聯(lián)合碘油對(duì)兔VX2 肝瘤凋亡、增殖及肝功能的影響研究[J].中國(guó)藥房,2012,23(33):3092-3094.

    [14] FirdousAP,KuttanR.Chemoprotectiveactivityofcarotenoid meso -zeaxanthin against Doxorubicin -induced cardio toxicity [J]. J Exp Ther Oncol,2012,10(2):101-106.

    [15] Alkreathy HM,Damanhouri ZA,Ahmed N,et al.Mechanisms of cardioprotective effect of aged garlic extract against Doxorubicin-induced cardiotoxicity[J].Integr Cancer Ther,2012,11(4):364-370.

    [16] 阿迪拉·阿扎提,趙龍,張玲,等.心肌細(xì)胞/膠原復(fù)合體移植心梗大鼠梗死周邊區(qū)的電偶聯(lián)網(wǎng)絡(luò)變化[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào),2013,21(1):75-79.

    [17] 仇普斌,劉超,李偉,等.誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化及對(duì)小鼠心肌梗死的治療作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào),2012,20(5):9-14.

    猜你喜歡
    金櫻子阿霉素試劑盒
    金櫻子糖
    金櫻子的葉子落了一地
    采金櫻子
    GlobalFiler~? PCR擴(kuò)增試劑盒驗(yàn)證及其STR遺傳多態(tài)性
    GoldeneyeTM DNA身份鑒定系統(tǒng)25A試劑盒的法醫(yī)學(xué)驗(yàn)證
    心復(fù)力顆粒對(duì)阿霉素致心力衰竭大鼠PPAR-α及ET-1的影響
    白藜蘆醇通過(guò)上調(diào)SIRT1抑制阿霉素誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞損傷
    補(bǔ)腎固精金櫻子
    保健與生活(2014年1期)2014-04-29 11:31:23
    牛結(jié)核病PCR診斷試劑盒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究
    經(jīng)口明視下神經(jīng)干注射阿霉素治療三叉神經(jīng)痛的臨床觀察
    精品人妻一区二区三区麻豆| 婷婷色综合www| 国产在视频线精品| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲成人一二三区av| 高清在线视频一区二区三区| 国产成人一区二区在线| 国产av精品麻豆| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 日韩伦理黄色片| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 黄色毛片三级朝国网站| 欧美精品亚洲一区二区| 国产野战对白在线观看| 捣出白浆h1v1| 欧美黑人精品巨大| 国产av一区二区精品久久| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 一本色道久久久久久精品综合| 搡老乐熟女国产| 亚洲精品av麻豆狂野| 欧美人与性动交α欧美软件| 悠悠久久av| 国产日韩欧美在线精品| 日韩欧美一区视频在线观看| 深夜精品福利| 人成视频在线观看免费观看| 男的添女的下面高潮视频| kizo精华| 亚洲成人免费av在线播放| 久久久久国产精品人妻一区二区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 观看美女的网站| 免费不卡黄色视频| 日韩大码丰满熟妇| 精品免费久久久久久久清纯 | 涩涩av久久男人的天堂| 欧美成人午夜精品| 亚洲欧美一区二区三区久久| 伦理电影免费视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 亚洲五月色婷婷综合| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 久久精品国产亚洲av涩爱| 成年美女黄网站色视频大全免费| 婷婷色综合大香蕉| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 中文字幕亚洲精品专区| h视频一区二区三区| 国产一区二区激情短视频 | 精品人妻在线不人妻| 精品酒店卫生间| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 欧美久久黑人一区二区| xxxhd国产人妻xxx| 午夜免费鲁丝| 国产在视频线精品| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产色婷婷99| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| www.熟女人妻精品国产| 咕卡用的链子| 美女视频免费永久观看网站| 国产探花极品一区二区| 国产精品嫩草影院av在线观看| 两个人免费观看高清视频| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲精品一二三| 国产成人一区二区在线| 伦理电影大哥的女人| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产av码专区亚洲av| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 国产精品人妻久久久影院| 欧美精品av麻豆av| 亚洲国产精品一区三区| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲av福利一区| 亚洲精品av麻豆狂野| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产精品.久久久| 免费在线观看黄色视频的| 丁香六月欧美| 精品亚洲成国产av| 交换朋友夫妻互换小说| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 嫩草影视91久久| 90打野战视频偷拍视频| 极品人妻少妇av视频| 午夜91福利影院| 精品亚洲成国产av| 18在线观看网站| 久久午夜综合久久蜜桃| 悠悠久久av| 国产伦理片在线播放av一区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 亚洲精品国产一区二区精华液| 精品卡一卡二卡四卡免费| 老司机靠b影院| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 99re6热这里在线精品视频| 男的添女的下面高潮视频| 中国三级夫妇交换| 不卡av一区二区三区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产成人精品福利久久| 亚洲美女视频黄频| 丁香六月欧美| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲人成电影观看| 久久久久精品国产欧美久久久 | av在线老鸭窝| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 日韩伦理黄色片| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产精品一区二区在线不卡| 在线 av 中文字幕| 久久狼人影院| 1024视频免费在线观看| 两个人看的免费小视频| 在线观看www视频免费| 亚洲国产看品久久| 美女大奶头黄色视频| 成人国产av品久久久| 老熟女久久久| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 色吧在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 国产高清不卡午夜福利| 51午夜福利影视在线观看| 51午夜福利影视在线观看| 麻豆av在线久日| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 在线观看免费日韩欧美大片| 日本av免费视频播放| 午夜老司机福利片| 观看av在线不卡| 丰满迷人的少妇在线观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 美女午夜性视频免费| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 狂野欧美激情性xxxx| 9191精品国产免费久久| 午夜影院在线不卡| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲国产欧美在线一区| 我要看黄色一级片免费的| 丝袜喷水一区| 看免费成人av毛片| 免费人妻精品一区二区三区视频| av在线播放精品| 晚上一个人看的免费电影| 国产探花极品一区二区| 日韩制服骚丝袜av| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲专区中文字幕在线 | av一本久久久久| 国产老妇伦熟女老妇高清| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久精品国产亚洲av涩爱| 久久精品亚洲av国产电影网| 高清不卡的av网站| 男人舔女人的私密视频| 九草在线视频观看| 日本一区二区免费在线视频| av国产久精品久网站免费入址| 不卡av一区二区三区| 精品亚洲成a人片在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 日韩av在线免费看完整版不卡| av网站在线播放免费| 免费日韩欧美在线观看| 国产淫语在线视频| 高清黄色对白视频在线免费看| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产又爽黄色视频| 免费在线观看黄色视频的| 亚洲精品日本国产第一区| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 一二三四在线观看免费中文在| 天天影视国产精品| 男女边摸边吃奶| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲五月色婷婷综合| 人妻一区二区av| 亚洲伊人久久精品综合| 少妇人妻精品综合一区二区| 岛国毛片在线播放| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 婷婷色综合www| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲精品,欧美精品| 精品第一国产精品| 国产精品久久久久久精品古装| 欧美人与善性xxx| 成人黄色视频免费在线看| 日本av手机在线免费观看| 黄色 视频免费看| 欧美激情极品国产一区二区三区| 一本色道久久久久久精品综合| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲国产看品久久| 伊人亚洲综合成人网| 国产片内射在线| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 精品一品国产午夜福利视频| 成人手机av| 成人漫画全彩无遮挡| 丰满饥渴人妻一区二区三| 成年人免费黄色播放视频| 日韩伦理黄色片| 精品少妇内射三级| 久久久国产欧美日韩av| 婷婷色麻豆天堂久久| 观看美女的网站| 亚洲国产成人一精品久久久| 免费观看人在逋| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| av国产精品久久久久影院| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 国产熟女欧美一区二区| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 欧美在线黄色| 国产黄色免费在线视频| 国产亚洲最大av| 天堂俺去俺来也www色官网| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲美女视频黄频| 国产精品一区二区精品视频观看| 热99久久久久精品小说推荐| 国产福利在线免费观看视频| 久久青草综合色| 97在线人人人人妻| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 最近最新中文字幕免费大全7| 热99国产精品久久久久久7| 80岁老熟妇乱子伦牲交| bbb黄色大片| 一区二区三区乱码不卡18| 国产又爽黄色视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| av在线老鸭窝| 日本av免费视频播放| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产又爽黄色视频| 中文欧美无线码| 色播在线永久视频| 久热这里只有精品99| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 丝袜喷水一区| 欧美精品一区二区免费开放| 国产精品久久久久成人av| 久久婷婷青草| 午夜老司机福利片| av网站在线播放免费| 亚洲免费av在线视频| 观看美女的网站| 狂野欧美激情性bbbbbb| 免费黄网站久久成人精品| 国产一卡二卡三卡精品 | 又大又黄又爽视频免费| 热re99久久国产66热| 高清在线视频一区二区三区| 国产伦人伦偷精品视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 97人妻天天添夜夜摸| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 一级,二级,三级黄色视频| 青青草视频在线视频观看| 久久久久久人人人人人| 亚洲人成77777在线视频| 桃花免费在线播放| 亚洲一区中文字幕在线| 1024香蕉在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产在视频线精品| 亚洲精品一二三| 亚洲综合色网址| 亚洲图色成人| 波多野结衣一区麻豆| 少妇 在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 一本久久精品| 国产av码专区亚洲av| 亚洲第一青青草原| 啦啦啦在线观看免费高清www| 九九爱精品视频在线观看| 大香蕉久久成人网| 免费黄色在线免费观看| av网站免费在线观看视频| 一级毛片我不卡| 亚洲国产日韩一区二区| 青青草视频在线视频观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产精品 欧美亚洲| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲av中文av极速乱| 国产精品久久久久久精品电影小说| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 久久 成人 亚洲| 久久久久精品人妻al黑| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲国产精品999| 欧美另类一区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产成人欧美在线观看 | 精品国产一区二区三区久久久樱花| 一区二区三区四区激情视频| 久久久久精品人妻al黑| av国产精品久久久久影院| 欧美黄色片欧美黄色片| 9色porny在线观看| 黄片小视频在线播放| 一级毛片电影观看| 国产不卡av网站在线观看| 夫妻午夜视频| 午夜福利一区二区在线看| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲国产看品久久| 成人三级做爰电影| h视频一区二区三区| 亚洲综合色网址| 一级爰片在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲成人免费av在线播放| 日韩制服骚丝袜av| 精品亚洲成国产av| 成年女人毛片免费观看观看9 | 在线免费观看不下载黄p国产| 黄色一级大片看看| 国产精品三级大全| 成年动漫av网址| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产日韩欧美亚洲二区| 桃花免费在线播放| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 视频区图区小说| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产一区二区在线观看av| 三上悠亚av全集在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 如何舔出高潮| 午夜老司机福利片| 国产日韩欧美亚洲二区| 成年女人毛片免费观看观看9 | 亚洲在久久综合| 久久影院123| 少妇被粗大的猛进出69影院| 男女国产视频网站| 国产一卡二卡三卡精品 | 人成视频在线观看免费观看| 看免费成人av毛片| 这个男人来自地球电影免费观看 | 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 一级黄片播放器| 国产福利在线免费观看视频| 热99国产精品久久久久久7| 久久女婷五月综合色啪小说| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久亚洲国产成人精品v| av一本久久久久| 精品人妻一区二区三区麻豆| 一级毛片 在线播放| 国产深夜福利视频在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 在线观看www视频免费| 亚洲av国产av综合av卡| 青春草国产在线视频| 日韩av不卡免费在线播放| 久久久久精品性色| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲人成网站在线观看播放| 欧美另类一区| 亚洲成人国产一区在线观看 | av女优亚洲男人天堂| 男女下面插进去视频免费观看| 毛片一级片免费看久久久久| 天天添夜夜摸| 国产1区2区3区精品| 国产成人精品福利久久| 国产av国产精品国产| 亚洲国产精品999| 欧美少妇被猛烈插入视频| 精品视频人人做人人爽| 黑人猛操日本美女一级片| 国产av一区二区精品久久| 色吧在线观看| h视频一区二区三区| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久久久欧美国产精品| 久久ye,这里只有精品| 亚洲精品一二三| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 飞空精品影院首页| 日韩精品有码人妻一区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产一区亚洲一区在线观看| h视频一区二区三区| 欧美精品av麻豆av| 久久亚洲国产成人精品v| 黄色怎么调成土黄色| 欧美激情极品国产一区二区三区| av国产久精品久网站免费入址| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 精品国产国语对白av| 性高湖久久久久久久久免费观看| 日韩欧美精品免费久久| 男女免费视频国产| 女性被躁到高潮视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产日韩欧美视频二区| 久久性视频一级片| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲少妇的诱惑av| 精品午夜福利在线看| 一区福利在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产在线视频一区二区| 好男人视频免费观看在线| 国产有黄有色有爽视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久免费观看电影| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 日本午夜av视频| 韩国精品一区二区三区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美黑人精品巨大| 9色porny在线观看| 五月开心婷婷网| 精品久久久精品久久久| 伊人亚洲综合成人网| 一级黄片播放器| 日本午夜av视频| 97在线人人人人妻| 久久久国产一区二区| a级片在线免费高清观看视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产在线视频一区二区| 日韩免费高清中文字幕av| 高清不卡的av网站| videosex国产| 国产精品熟女久久久久浪| 美女大奶头黄色视频| 久久精品久久久久久久性| 99热国产这里只有精品6| 亚洲国产精品国产精品| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| av视频免费观看在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 90打野战视频偷拍视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产黄色免费在线视频| 欧美 日韩 精品 国产| 极品人妻少妇av视频| 天天影视国产精品| 中国国产av一级| 亚洲国产日韩一区二区| 一本久久精品| 久久久亚洲精品成人影院| 妹子高潮喷水视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 一区二区三区激情视频| 人人妻人人澡人人看| 一个人免费看片子| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 成年人免费黄色播放视频| 午夜91福利影院| 中文天堂在线官网| 国产精品久久久久久精品古装| 少妇人妻 视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 成人漫画全彩无遮挡| 美女高潮到喷水免费观看| 不卡av一区二区三区| 午夜日本视频在线| 国产深夜福利视频在线观看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 精品少妇黑人巨大在线播放| 一级毛片我不卡| 亚洲av欧美aⅴ国产| 青春草国产在线视频| 日韩制服骚丝袜av| 日韩一区二区视频免费看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 午夜福利在线免费观看网站| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 制服诱惑二区| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| √禁漫天堂资源中文www| 啦啦啦 在线观看视频| 国产在视频线精品| 又大又爽又粗| 自线自在国产av| 午夜激情久久久久久久| 国产午夜精品一二区理论片| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 一区二区三区激情视频| 成人国产av品久久久| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲人成网站在线观看播放| 99久久综合免费| 在线看a的网站| 一区二区三区激情视频| 成人国语在线视频| 高清欧美精品videossex| a级毛片在线看网站| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲国产日韩一区二区| 男人爽女人下面视频在线观看| av免费观看日本| 搡老岳熟女国产| 人人澡人人妻人| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 少妇 在线观看| bbb黄色大片| 欧美黑人精品巨大| 热re99久久国产66热| 老鸭窝网址在线观看| 18禁动态无遮挡网站| xxx大片免费视频| 精品一品国产午夜福利视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 欧美日韩综合久久久久久| 久久久久国产精品人妻一区二区| 看非洲黑人一级黄片| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | www.自偷自拍.com| 国产片内射在线| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 老司机影院毛片| 久热爱精品视频在线9| 视频区图区小说| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产av国产精品国产| 一级片免费观看大全| 久久精品国产a三级三级三级| 中文字幕最新亚洲高清| 色94色欧美一区二区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲av成人精品一二三区| 久久久精品免费免费高清| av卡一久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 中文字幕亚洲精品专区| 男女边吃奶边做爰视频| 国产精品一区二区在线观看99| 一级a爱视频在线免费观看| 一区二区av电影网| 久久毛片免费看一区二区三区| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 一区二区三区精品91| 波多野结衣av一区二区av| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 老司机影院毛片| 亚洲精品在线美女| 一边亲一边摸免费视频| 女人久久www免费人成看片| www日本在线高清视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲精品国产色婷婷电影| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲熟女毛片儿| 日本vs欧美在线观看视频| 国产精品二区激情视频| 下体分泌物呈黄色| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久天堂一区二区三区四区| 毛片一级片免费看久久久久| 一区二区三区精品91| 一级爰片在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 黄频高清免费视频| 中文字幕制服av| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产一区二区激情短视频 | 美国免费a级毛片| 香蕉国产在线看| 日韩欧美一区视频在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产精品成人在线| 国产免费又黄又爽又色| 久久韩国三级中文字幕| 这个男人来自地球电影免费观看 | 精品一区二区三区av网在线观看 | 国产精品嫩草影院av在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产午夜精品一二区理论片| 久久精品亚洲熟妇少妇任你|