中醫(yī)院校本科分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備之我見

摘 要：隨著分子生物學(xué)技術(shù)的日益發(fā)展，它與醫(yī)學(xué)的聯(lián)系日益緊密，是醫(yī)學(xué)院校的重要基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課程。在中醫(yī)院校開設(shè)本科生分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)也迫在眉睫。本文是根據(jù)本科生新開設(shè)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備過程談?wù)勼w會(huì)，旨在與廣打同仁共同探討，提高實(shí)驗(yàn)教學(xué)效果。

關(guān)鍵詞：中醫(yī) 分子生物學(xué) 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

中圖分類號(hào)：G642 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1673-9795（2013）09（a）-0126-01

隨著分子生物學(xué)的迅猛發(fā)展，該技術(shù)已經(jīng)滲透到基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，與醫(yī)學(xué)聯(lián)系日益緊密。中醫(yī)院校的實(shí)驗(yàn)教學(xué)課程大多是實(shí)驗(yàn)性很強(qiáng)的專業(yè)課，而醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)大多是蛋白質(zhì)和核酸等的定量實(shí)驗(yàn)，要求更嚴(yán)格，操作更復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)難度更大，要保證實(shí)驗(yàn)課有序高質(zhì)量完成，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作起著關(guān)鍵性的作用，環(huán)環(huán)相扣，不能疏忽大意。

為在中醫(yī)院校普及和推廣分子生物學(xué)技術(shù)，培養(yǎng)學(xué)生基本實(shí)驗(yàn)技能和理論聯(lián)系實(shí)際的能力，我?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心于2012年全面開展分子生物學(xué)教學(xué)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備工作，現(xiàn)準(zhǔn)備工作已經(jīng)完成。經(jīng)歷我校分子生物學(xué)教學(xué)實(shí)驗(yàn)室從無到有的整體建設(shè)，從耗材購置到預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行，結(jié)合具體工作，談一談自己的體會(huì)。

1 提高自身業(yè)務(wù)能力

個(gè)人認(rèn)為扎實(shí)的業(yè)務(wù)素質(zhì)是實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作必不可少的前提，我校本科分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)包括質(zhì)粒的提取、基因組DNA的提取、PCR、轉(zhuǎn)化等五個(gè)小實(shí)驗(yàn)，這些小實(shí)驗(yàn)之間具有連續(xù)性強(qiáng)、時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn)，要求實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作人員必須具有扎實(shí)全面的理論基礎(chǔ)和熟練的實(shí)驗(yàn)技能，掌握實(shí)驗(yàn)原理、方法步驟和試劑配制，熟悉掌握設(shè)備儀器的操作和注意事項(xiàng)，出現(xiàn)問題能及時(shí)解決，對(duì)不同實(shí)驗(yàn)結(jié)果有合理的解釋。如電泳，膠的濃度很大程度上決定了圖片漂亮與否，任何大小的DNA片段都有一個(gè)合適的濃度的膠，做PAGE時(shí)膠的濃度更為明顯；這些是實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備的重點(diǎn)，那么怎么尋找這些實(shí)驗(yàn)中的重點(diǎn)呢？那就要在預(yù)實(shí)驗(yàn)中仔細(xì)揣摩實(shí)驗(yàn)原理、步驟；再如轉(zhuǎn)化會(huì)有多次失敗，許多人認(rèn)為是感受態(tài)做的不好或者是抗生素加過量，可是有一次的感受態(tài)是“粗放型”做的，最后效果卻很好，這有可能是載體自我環(huán)化沒連上，或者是熱激時(shí)間過長(zhǎng)；對(duì)于抗生素用量多的問題，則把平板在恒溫箱里多放置一段時(shí)間仍仍然什么都沒有（這時(shí)抗生素已經(jīng)失效），這就不是抗生素的問題了，這些只有實(shí)驗(yàn)之后才能體會(huì)；有時(shí)候轉(zhuǎn)化子太多，就不妨把平板室溫下放置數(shù)小時(shí)，挑大菌落（質(zhì)?？截悢?shù)多）去驗(yàn)證。最后，作為實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員，要關(guān)注國內(nèi)外實(shí)驗(yàn)技術(shù)新動(dòng)態(tài)，改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法，不斷提高自身業(yè)務(wù)能力。

2 積極做好預(yù)實(shí)驗(yàn)

所謂預(yù)實(shí)驗(yàn)是指在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)教學(xué)或者是科學(xué)研究時(shí)，經(jīng)常需要在正式實(shí)驗(yàn)之前先做一次實(shí)驗(yàn)，簡(jiǎn)稱預(yù)實(shí)驗(yàn)[1]。它不僅僅是一個(gè)簡(jiǎn)單的準(zhǔn)備過程，而且實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備人員能通過這一過程摸索實(shí)驗(yàn)條件，確保實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，同時(shí)許多新的實(shí)驗(yàn)方法和技巧都可以由預(yù)實(shí)驗(yàn)探索而來[2]。

每次實(shí)驗(yàn)都會(huì)因時(shí)間、室溫、試劑批號(hào)及濃度和儀器的改變而出現(xiàn)不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，所以每次實(shí)驗(yàn)前都要做好預(yù)實(shí)驗(yàn)。做好預(yù)實(shí)驗(yàn)首先需要注意環(huán)境的干凈整潔，該滅菌的儀器和器皿是否準(zhǔn)備充足，然后認(rèn)真完成所需要的各種試劑的保存條件、稀釋時(shí)的配比等。

其次是儀器設(shè)備的準(zhǔn)備，實(shí)驗(yàn)前要仔細(xì)調(diào)試設(shè)備，這樣才能確保實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行。比如我們實(shí)驗(yàn)室新買了一臺(tái)離心機(jī)，空機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)很好，可是在預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)放到里面的離心管頂部與機(jī)器有摩擦，及時(shí)與廠家聯(lián)系進(jìn)行維修解決了問題。其實(shí)預(yù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康木褪谴_定實(shí)驗(yàn)條件，尋找存在的問題及注意事項(xiàng)，確保實(shí)驗(yàn)課的正常進(jìn)行。

3 加強(qiáng)各方面的協(xié)調(diào)工作是實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備的保證

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作特點(diǎn)是接觸面廣，與學(xué)校教務(wù)處、設(shè)備科、學(xué)科教師、學(xué)生的關(guān)系密切，處理好以上幾個(gè)方面的關(guān)系是搞好實(shí)驗(yàn)工作的重要保證。（1）設(shè)備科：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)是一門新開實(shí)驗(yàn)，作為采購部門的設(shè)備科第一次采購某些耗材就有可能會(huì)發(fā)生理解上的錯(cuò)誤，這就需要和設(shè)備科老師有良好的溝通，比如填寫的購置計(jì)劃只寫著封口膜（全名叫無菌培養(yǎng)容器封口膜），在領(lǐng)取時(shí)設(shè)備科老師就先讓供貨商拿來一包樣品（Para film），發(fā)現(xiàn)不對(duì)我們及時(shí)調(diào)貨最終確保了實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行；（2）學(xué)科教師：實(shí)驗(yàn)教學(xué)是教師和實(shí)驗(yàn)人員共同完成的教學(xué)任務(wù)，二者相互依賴，缺一不可，在實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備中要常征求學(xué)科教師意見，互相尊重，密切配合；（3）學(xué)生：每次實(shí)驗(yàn)課前都要給本實(shí)驗(yàn)室的負(fù)責(zé)人交代清楚實(shí)驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)，有些必要的要打印出來貼在醒目處請(qǐng)學(xué)生注意。

4 加強(qiáng)日常管理

良好的實(shí)驗(yàn)室管理是保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的基礎(chǔ)。在實(shí)驗(yàn)過程中要做到以下幾點(diǎn)。

4.1 實(shí)驗(yàn)儀器的管理

分子生物學(xué)操作中會(huì)涉及一系列儀器，管理不當(dāng)或者使用不當(dāng)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗、減少儀器使用壽命或損壞儀器，因此在進(jìn)行操作前細(xì)致地了解各種儀器的使用方法及注意事項(xiàng)，是使后繼實(shí)驗(yàn)事半功倍的一個(gè)必要準(zhǔn)備。比如超低溫冰箱和可調(diào)微量移液器，在超低溫冰箱內(nèi)儲(chǔ)存的物品包裝盒材質(zhì)應(yīng)為不銹鋼、鋁質(zhì)或耐低溫的硬質(zhì)塑料。禁止使用紙盒、橡膠器皿、玻璃器皿以及軟質(zhì)塑料袋；盡量減少開門的次數(shù)和開門時(shí)間，以保證箱內(nèi)溫度的穩(wěn)定；存取樣品時(shí)動(dòng)作應(yīng)迅速，不能長(zhǎng)時(shí)間打開冰箱。離開時(shí)務(wù)必確認(rèn)冰箱已經(jīng)關(guān)嚴(yán)?？烧{(diào)微量移液器在使用過程中動(dòng)作要緩慢平穩(wěn)，不使用時(shí)要調(diào)至最大值的刻度，使彈簧處于松弛狀態(tài)以保護(hù)彈簧。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后督促學(xué)生填寫儀器使用情況表，如有故障要寫明原因，以便及時(shí)聯(lián)系維修人員進(jìn)行檢修。

4.2 實(shí)驗(yàn)材料的管理

實(shí)驗(yàn)室的安全最重要，分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)常與毒性強(qiáng)，甚至是致癌的試劑接觸，像氯仿、異戊醇、甲醛、乙醚等許多溶劑，都應(yīng)在通風(fēng)櫥中使用，并且注意保護(hù)皮膚和呼吸道。另外一些致癌物或誘變劑，像溴化乙錠等，在操作中要注意防護(hù)，并注意使用后的處理。特別是一些試劑盒，一定要掌握相關(guān)知識(shí)后方可使用。實(shí)驗(yàn)室工作人員要列出每次實(shí)驗(yàn)的材料清單，每次實(shí)驗(yàn)課前組長(zhǎng)按照清單一一清點(diǎn)，對(duì)于有毒及需要特殊處理的試劑要對(duì)學(xué)生交代清楚，同時(shí)要明確下課后按時(shí)把所有實(shí)驗(yàn)材料整理歸位，老師檢查合格后方可離開。

4.3 實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生管理

從第一次上課就要強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境衛(wèi)生的重要性，促使學(xué)生養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習(xí)慣。每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后值日生認(rèn)真打掃衛(wèi)生，并將實(shí)驗(yàn)室儀器、物品擺放整齊，為下一次實(shí)驗(yàn)創(chuàng)造良好的氛圍。

分子生物學(xué)的準(zhǔn)備工作繁瑣而復(fù)雜，即使有幾年的工作經(jīng)驗(yàn)也難免會(huì)有疏漏，這就要求我們平時(shí)的經(jīng)驗(yàn)非常重要。注意總結(jié)實(shí)驗(yàn)中注意事項(xiàng)，每次的物品準(zhǔn)備都要有詳細(xì)的記錄，每學(xué)期實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目一旦確定就不會(huì)改變，準(zhǔn)備教師可以提前熟悉實(shí)驗(yàn)程序。嫻熟的操作技能是保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備得以順利進(jìn)行的重要條件，只有做到正確使用、熟練和規(guī)范操作，才能得到正確結(jié)果[3]。長(zhǎng)此以往，可以改正不足，逐漸完善實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作。

參考文獻(xiàn)

[1]孫蕊，于洪帥，丁寧，等.預(yù)實(shí)驗(yàn)在培養(yǎng)大學(xué)生綜合素質(zhì)中的作用[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2008（22）：151-152.

[2]吳玉秀，董小青，王玉祥，等.做好微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作的幾點(diǎn)體會(huì)[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教育版，2006（6）：70-71.

[3]沈澄，葉知秋.重視實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作保證實(shí)驗(yàn)教學(xué)質(zhì)量[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2006（23）：150.