CCL18、MVD在乳腺癌組織中的表達(dá)及其與患者預(yù)后的關(guān)系研究

[摘要] 目的 研究趨化因子配體18（CCL18）與腫瘤微血管密度（MVD）在乳腺癌組織中表達(dá)水平及與患者預(yù)后的關(guān)系。 方法 收集2011年7月～2012年12月我院乳腺外科病理確診為乳腺癌患者癌組織標(biāo)本90例，癌旁組織標(biāo)本30例及乳腺良性病變組織30例。應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)CCL18和MVD在3類(lèi)組織中表達(dá)水平。結(jié)果 CCL18 在乳腺癌組織組的表達(dá)明顯高于癌旁組織組和良性組織組（P=0.000），并且乳腺癌的分期越晚CCL18在乳腺癌組織組表達(dá)水平越高（P=0.000），乳腺癌組織組MVD的表達(dá)明顯高于其余兩組（P=0.000），且表達(dá)水平在Ⅲ期乳腺癌組織中明顯高于I期和Ⅱ期（P=0.000）。 結(jié)論 CCL18和MVD均可作為乳腺癌標(biāo)志物之一，兩者表達(dá)水平對(duì)于治療和預(yù)后均有重要的意義。

[關(guān)鍵詞] 乳腺癌；趨化因子18；腫瘤微血管密度；預(yù)后

[中圖分類(lèi)號(hào)] R737.9 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）36-0020-03

The expression of CCL18 and MVD in breast cancer and the relationship between their expression levels and patients’ prognosis

HU Zujian1 XU Haibin1 REN Xingchang2 HE Junling1 SU Kunlun1 YANG Ouou1 LUO Hua1 LIU Dianlei3

1. Department of Breast Oncology， Hospital of Traditional Chinese Medicine of Hangzhou City in Zhejiang Province，Hangzhou 310007，China；2.Department of Pathology， Hospital of Traditional Chinese Medicine of Hangzhou City in Zhejiang Province，Hangzhou 310007，China；3.Department of General Surgery， Hospital of Traditional Chinese Medicine of Hangzhou City in Zhejiang Province，Hangzhou 310007，China

[Abstract] Objective To investigate the expression of CCL18 （chemokine CC-motif ligand 18） and MVD （microvessel density） in breast cancer and the relationship between their expression levels and patients’ prognosis. Methods Ninety cancer tissue samples and 30 pericarcinoma tissue samples from patients with breast cancer， and 30 tissue samples from benign breast diseases diagnosed in the department of pathology in our hospital were collected from July 2011 to December 2012. Immunochemistry was used to detect the expression levels of CCL18 and MVD in the tissue samples. Results The expression of CCL18 was significantly higher in cancer tissue samples than those in pericarcinoma tissue samples and samples from benign breast diseases（P=0.000）， and the expression level of CCL18 was much higher in advanced breast cancer （P=0.000）. The expression of MVD was significantly higher in cancer tissue samples than those in pericarcinoma tissue samples and samples from benign breast diseases （P=0.000）， and the expression level of MVD was much higher in phase Ⅲ breast cancer than those in phase I and Ⅱ（P=0.000）. Conclusion CCL18 and MVD were both markers for breast cancer. Their expression levels both played important roles in the treatment and prognosis of breast cancer.

[Key words] Breast cancer； CCL18 （chemokine CC-motif ligand 18）； MVD （microvessel density）； Prognosis

乳腺癌是女性最常見(jiàn)腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的、有機(jī)的過(guò)程。在腫瘤發(fā)生過(guò)程中，受到細(xì)胞因子和基因突變的影響，腫瘤細(xì)胞自身結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，從而影響趨化因子的表達(dá)[1]。其中趨化因子配體18（chemokine CC-motif ligand 18，CCL18）是一種巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞分泌的CC族趨化因子，最近研究發(fā)現(xiàn)其生物學(xué)作用與腫瘤生長(zhǎng)的微環(huán)境密切相關(guān)[2]，因此其具有作為腫瘤標(biāo)志物及判斷預(yù)后指標(biāo)的潛能。Pettersen等[3]的研究證實(shí)CCL18的過(guò)度表達(dá)能夠增強(qiáng)癌細(xì)胞的侵襲能力。但是關(guān)于乳腺癌患者CCL18的表達(dá)水平及其與預(yù)后關(guān)系報(bào)道不多。同時(shí)作為血管依賴(lài)性和激素依賴(lài)性的腫瘤，腫瘤血管生長(zhǎng)情況與癌組織的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。腫瘤微血管密度（microvessel density ，MVD）是目前檢測(cè)腫瘤微血管水平的金標(biāo)準(zhǔn)，其不但可以確定腫瘤位置及血管生長(zhǎng)水平，而且可以用來(lái)評(píng)估腫瘤血管靶向治療的療效[4]。本研究希望通過(guò)比較CCL18和MVD在乳腺癌組織、癌周組織和良性組織之間表達(dá)差異，明確其在乳腺癌組織中表達(dá)的意義及與乳腺癌患者預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2011年7月～2012年12月于我院乳腺外科行乳腺手術(shù)并經(jīng)病理診斷后的組織標(biāo)本，按照病理診斷組織類(lèi)型分組。其中乳腺癌組織組90例，乳腺癌旁組織組30例，良性病變組織組30例（乳腺增生組織10例，纖維腺瘤組織20例）。其中，男1例，女性149例，年齡23～88歲，平均年齡（46.5±9.7）歲。所有乳腺癌組織組患者術(shù)前未進(jìn)行放化療及內(nèi)分泌等綜合治療。按照WHO乳腺腫瘤組織學(xué)類(lèi)型修訂方案將乳腺癌組織組分類(lèi)：浸入性導(dǎo)管癌80例，髓樣癌6例，浸潤(rùn)性小葉癌4例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移58例；臨床分期：I期22例，Ⅱ期52例 ， Ⅲ期16例。

1.2方法

1.2.1 檢測(cè)方法 應(yīng)用免疫組化Envision檢測(cè)法，以CD34 染色標(biāo)記微血管。操作流程嚴(yán)格按照DAKO公司免疫組化試劑盒EnVisionTM Detection kit 說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.2結(jié)果判定 CCL18結(jié)果判定：顯微鏡下胞質(zhì)呈棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞[5]。MDV計(jì)數(shù)[6]：CD34陽(yáng)性為血管內(nèi)皮棕黃色細(xì)胞，以CD34陽(yáng)性的單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞族為一個(gè)血管計(jì)數(shù)。先在低倍光鏡下選取新生血管最多區(qū)域，然后在40倍光鏡下計(jì)數(shù)三個(gè)視野，取其平均數(shù)。排除血管壁有明顯纖維硬化或肌層以及直徑大于8個(gè)紅細(xì)胞、壞死、炎癥反應(yīng)的血管。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，兩個(gè)計(jì)量資料采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多個(gè)計(jì)量資料比較采用方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CCL18和MVD在各組中的表達(dá)水平比較

CCL18在癌周組織組和良性組織組中均無(wú)表達(dá)，在乳腺癌組織組中陽(yáng)性67例，陽(yáng)性率74.4%。乳腺癌組織與癌周組織組和良性組織組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=80.723， P=0.000），見(jiàn)表1。MVD計(jì)數(shù)在癌周組織組為（6.47±1.76），良性組織組為（5.98±2.85），乳腺癌組織組為（30.95±12.92）。癌周組織組與良性組織組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.050， P=0.299），乳腺癌組織組與癌周組織組、良性組織組分別比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=19.648， P=0.000； t=19.104，P=0.000）。見(jiàn)表1。

表1 CCL18和MVD在各組中的表達(dá)水平比較

2.2 乳腺癌組織組CCL18水平與乳腺癌分期之間關(guān)系

乳腺癌組織組中CCL18 陽(yáng)性的67例患者中，CCL18表達(dá)水平隨乳腺癌臨床分期的增加而升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=32.029， P=0.000）。CCL18在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)水平明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.711， P=0.013）。見(jiàn)表2。

表2 乳腺癌組織組CCL18與乳腺癌分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間關(guān)系

2.3 乳腺癌組織組MVD水平與乳腺癌分期之間關(guān)系

乳腺癌臨床分期中MVD表達(dá)水平在I期與Ⅱ期之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.387，P=0.171），Ⅱ期與Ⅲ期之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.552，P=0.000）。存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者M(jìn)VD水平高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.906，P=0.000）。見(jiàn)表3。

表3 乳腺癌組織組MDV水平與乳腺癌分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間關(guān)系

3 討論

與眾多癌癥一樣，乳腺癌也依賴(lài)于早期的發(fā)現(xiàn)和及時(shí)的治療。但是目前血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子等用于乳腺癌早期診斷的生物學(xué)標(biāo)志物特異性和靈敏度尚不能滿(mǎn)足臨床需要[7]。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)趨化因子配體18和MVD是一個(gè)有潛力的癌癥相關(guān)診斷及預(yù)后評(píng)估的生物學(xué)指標(biāo)[8]。眾多研究證實(shí)[9-12]，在腫瘤組織中檢測(cè)到了CCL18的高水平表達(dá)。但是目前關(guān)于CCL18與腫瘤的關(guān)系的研究結(jié)論上不一致。張瑋等針對(duì)CCL18過(guò)度表達(dá)對(duì)卵巢上皮性癌細(xì)胞生物學(xué)行為的研究中也發(fā)現(xiàn)，CCL18不但能夠促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的DNA復(fù)制，還能夠降低癌細(xì)胞的粘附性，從而增加其遷移和侵襲能力[13]。但是也有研究發(fā)現(xiàn)CCL18可能起局部抗腫瘤的免疫調(diào)節(jié)因子的作用，影響腫瘤的轉(zhuǎn)移和患者的預(yù)后[14]。近年來(lái)已經(jīng)有多項(xiàng)研究顯示CCL18在多種腫瘤中可作為診斷與預(yù)后相關(guān)的標(biāo)志物，但CCL18作為癌癥早期診斷和預(yù)后評(píng)估的指標(biāo)是否能夠應(yīng)用于乳腺癌國(guó)內(nèi)還鮮有報(bào)道，因此我們對(duì)比乳腺癌組織、癌周組織和良性乳房組織發(fā)現(xiàn)，CCL18在乳腺癌組織中的表達(dá)水平明顯高于其他兩組（P<0.05）。并且結(jié)合CCL18陽(yáng)性表達(dá)病例與其臨床分期研究還發(fā)現(xiàn)其呈正相關(guān)（P<0.05），這與高進(jìn)等[15]的研究結(jié)論一致，且CCL18在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)水平明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者（P<0.05），也就是說(shuō)患者的預(yù)后越差，CCL18表達(dá)水平越高，

許多研究表明，MVD與腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后關(guān)系密切，可作為反映腫瘤生物學(xué)行為的重要指標(biāo)。光鏡下觀察MVD可見(jiàn)其陽(yáng)性細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的異質(zhì)性，“熱點(diǎn)”多位于腫瘤間質(zhì)和邊緣浸潤(rùn)區(qū)，中心部位往往微血管數(shù)量較少，表現(xiàn)為缺血性壞死。這些現(xiàn)象說(shuō)明腫瘤細(xì)胞在生長(zhǎng)過(guò)程中以旁分泌的方式釋放促進(jìn)血管生成的細(xì)胞因子。近年來(lái)對(duì)包括乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤研究證實(shí)，MVD可提供重要的腫瘤預(yù)后及分期信息，作為一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素，高M(jìn)VD往往提示腫瘤容易轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差[16]。本研究中發(fā)現(xiàn)癌組織中MVD計(jì)數(shù)明顯高于癌周組織和良性組織（P<0.05）。并且乳腺癌患者臨床分期與MVD計(jì)數(shù)水平分析顯示，分期越晚，MVD的計(jì)數(shù)越大，這與MVD計(jì)數(shù)在其他這類(lèi)型腫瘤中結(jié)果一致，考慮可能是腫瘤晚期血管增生活躍有關(guān)。此外是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與MVD計(jì)數(shù)分析顯示，有淋巴轉(zhuǎn)移者M(jìn)VD計(jì)數(shù)明顯高于無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說(shuō)明腫瘤向淋巴結(jié)的擴(kuò)散可能與血管的生成有關(guān)[17，18]。

綜上所述，我們可以了解CCL18和MVD與乳腺癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，均可以作為乳腺癌的早期診斷和判斷預(yù)后的指標(biāo)，至于兩者在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮的生物學(xué)作用尚需進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 歐周羅. 趨化因子與乳腺癌[J]. 中華腫瘤防治雜志，2013，23（8）：618-623.

[2] Plones T，Krohn A，BurgerM，et al. Serum level of CC-chemokine ligand18 is increased inpatients with non-small-celllung cancer and correlates with survival time in adenocarcinomas[J]. PLoS One，2012，7：741-746.

[3] Pettersen JS，F(xiàn)uentes-Duculan J，Suarez-Farifias M，et al. Tumor-associated macmphages in the cutaneous SCC microenvironment are heterogeneously activated[J]. Invest Dermato1，2011，131：1322-1330.

[4] 郭易萍，李子樵，練子富. 腫瘤新生血管檢測(cè)的研究進(jìn)展[J]. 國(guó)際生物醫(yī)學(xué)工程雜志，2011，34（5）：314-317.

[5] Chen J，Y Gong C，et al. CCL18 from tumor-associated macrophage promotes breast cancer metastasis via PITPNM3[J]. Cancer Cell，2011， 19：541-555.

[6] 劉曉軍，劉俊寶，李莉巍，等. VEGF及MVD在外陰上皮內(nèi)非瘤樣病變、VIN及外陰鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2011， 15（8）：1334-1336.

[7] 張偉，李芳，張飛燕，等. 基質(zhì)金屬蛋白酶-7、上皮性鈣黏附蛋白和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在乳腺癌中表達(dá)及意義的研究[J]. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，9（18）：71-74.

[8] Kollert F，Binder M，Probst C，et al. CCL18 -- potential biomarker of fibroinflammatory activity in chronic periaortitis[J]. J Rheumatol，2012，39（7）：1407-1412.

[9] 孫立伶，陸文奇. 血清趨化因子配體18在胃癌及癌前病變中的表達(dá)意義[J]. 現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2011，27（2）：170-171.

[10] 張瑋，楊瑩珠，陽(yáng)志軍，等. 趨化因子配體18基因在卵巢惡性腫瘤組織中的表達(dá)及臨床意義[J]. 廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，29（10）：708-713.

[11] 李亮亮，柴曄. 趨化因子配體18（CCL-18）在白血病患者中的表達(dá)及其意義[J]. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2011，27（11）：1267-1269.

[12] Wang Q， Li D， Zhang W， et a1. Evaluation of proteomics identified CCLl8 and CXCLl as circulating tumor markers for differential diagnosis between ovarian carcinomas and benign pelvic masses[J]. Int J Biol Markers，2011，26：262-273.

[13] 張瑋，楊瑩珠，李力，等. CCLl8過(guò)表達(dá)對(duì)卵巢上皮性癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[J]. 中華婦產(chǎn)科雜志，2013，48（7）：528-531.

[14] Zohny SF，F(xiàn)ayed ST. Clinical utility of circulating matrix metallopmteinase-（MMP-7），CC chemokine ligand 18 （CCLl8）and CC chemokine ligand 11（CCLll） as markers for diagnosis of epithelial ovarian cancer[J]. Med Onc01，2010，27：1246-1253.

[15] 高進(jìn)，唐諱，葉嘉罡，等. 趨化因子配體18及微血管密度在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義[J]. 中華臨床醫(yī)師雜志（電子版），2013，7（2）：566-569.

[16] 李瀚，張利紅. PTEN和MVD在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J]. 現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，26（6）：136-137.

[17] 黃清麗，皇甫輝，史敏，等. 喉鱗癌caveolin-1和MVD表達(dá)及與頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J]. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，（8）：25-26.

[18] 金勛，孫丹萍，張永紅，等. 基于DPDW的乳腺吸收系數(shù)重建算法研究[J]. 北京生物醫(yī)學(xué)工程，2009，28（5）：469-471，520.

（收稿日期：2013-09-30）