英夫利昔單抗治療類風濕關節(jié)炎對外周血CD147及MMPs的影響

[摘要] 目的 探討Infliximab對類風濕關節(jié)炎患者外周血CD147及MMPs的影響。 方法 選擇類風濕關節(jié)炎患者40例為研究對象，所有患者均經(jīng)MTX治療3個月但效果欠佳。其中20例患者加用Infliximab治療14周，為第一組；10例患者加用Infliximab治療6周，為第二組；10例患者繼續(xù)給予MTX治療14周，為第三組。分別于第0、10、18周檢測患者外周血單個核細胞CD147和MMPs水平，外周血CD14+細胞CD147的平均熒光強度，第0、18周檢測外周血清MMP2、MMP3、MMP9的表達情況。另選擇10例健康體檢者為對照組。 結(jié)果 第一組晨僵、ERS、CRP、RF、HAQ均有不同程度的下降（P < 0.05或0.01），第二組晨僵、ERS、HAQ均有不同程度的下降（P < 0.01），但第三組各指標前后變化不明顯。治療后第一組和第二組CD147、MMP9表達均較治療前下降，而第三組較治療前增加，三組比較差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），第一組和第二組之間比較差異不明顯。MMP2和MMP3三組比較差異不明顯。第一組的MMP2、MMP3、MMP9均較前明顯下降（P < 0.01），第二組MMP3、MMP9均較前明顯下降（P < 0.01）。第三組各指標差異不明顯（P > 0.05）。 結(jié)論 Infliximab聯(lián)合甲氨蝶呤治療類風濕關節(jié)炎，可以下調(diào)外周血中CD147、MMPs的表達，從而改善癥狀、延緩疾病的進一步發(fā)展。

[關鍵詞] 類風濕關節(jié)炎；英夫利昔單抗；CD147；MMPs

[中圖分類號] R593.22 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2013）17-0001-05

類風濕關節(jié)炎（RA）是由于自體免疫引發(fā)的關節(jié)炎，是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，以慢性、對稱性、多滑膜關節(jié)炎和關節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，屬于自身免疫炎性疾病。該病好發(fā)于手、腕、足等小關節(jié)，反復發(fā)作，呈對稱分布。類風濕是一種自身免疫性疾病，與內(nèi)分泌、營養(yǎng)、地理、職業(yè)、心理和社會環(huán)境的差異、細菌和病毒感染及遺傳因素等方面有關系[1，2]。RA是一種常見病、多發(fā)病。CD147是基質(zhì)金屬蛋白酶誘導劑，近年來有研究發(fā)現(xiàn)在類風濕關節(jié)炎患者的外周血以及滑膜細胞中CD147表達上調(diào)，誘導間質(zhì)細胞基質(zhì)金屬蛋白酶的產(chǎn)生（MMPs）。MMPs具有降解細胞外基質(zhì)的作用，能夠降解關節(jié)骨與軟骨中的細胞外基質(zhì)大分子。Infliximab是一種特異性阻斷α腫瘤壞死因子的人鼠嵌合型單克隆抗體，屬于目前可使用的TNF拮抗劑。本文主要研究Infliximab對外周血CD147及MMPs的影響，探討其延緩RA患者骨質(zhì)破壞的可能機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2012年1～6月，選擇在我院治療的類風濕關節(jié)炎患者40例為研究對象。其中男4例，女36例，年齡40～57歲，平均（48.9±10.4）歲。入選標準：①所有患者均經(jīng)MTX治療3個月，劑量穩(wěn)定在每周7.5～15.0 mg超過4周，但效果欠佳；②所有患者臨床資料完整；③所有患者診斷明確。排除標準：①過敏體質(zhì)或者對英夫利昔單抗過敏的患者，或者對人免疫球蛋白過敏的患者；②關節(jié)功能狀態(tài)為Ⅳ級或者X線檢查結(jié)果顯示為Ⅳ期；③入組前1個月內(nèi)接種過活的或者減毒的病毒或細菌疫苗，或者使用過中草藥治療類風濕關節(jié)炎；④入組前3個月內(nèi)接受過生物制劑治療；⑤有活動性肺結(jié)核的病史；⑥入組前2個月患有嚴重的感染或者正處于急性感染或慢性感染發(fā)作期；⑦入組前半年內(nèi)有機會性感染史；⑧裝有人工關節(jié)并有感染史；⑨入組前3個月接受過器官移植治療；⑩患有或曾患全身自身免疫性疾病。其中加用英夫利昔單抗治療14周的患者共20例，為第一組；加用英夫利昔單抗治療6周的患者共10例，為第二組；繼續(xù)使用MTX治療14周的患者為第三組。另選擇健康體檢者10名為對照組，其中男2例，女8例，平均年齡（50.1±11.7）歲。四組患者的性別比、平均年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 治療方法

第一組在繼續(xù)使用MTX（上海醫(yī)藥（集團）有限公司信誼制藥總廠，國藥準字H31020644，250 mg/片）治療的基礎上，加用英夫利昔單抗（Centocor B.V.，100 mg，批準文號：S20060024）治療，3 mg/kg，分別于第0、2、6、14周給藥治療，療程14周；第二組在使用MTX治療的基礎上加用英夫利昔單抗治療，3 mg/kg，分別于第0、2、6周給藥，療程6周；第三組繼續(xù)使用MTX治療14周。

2結(jié)果

2.1 三組RA患者及對照組的一般資料

見表1。RA各組及對照組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。

2.2 不同時間點三組RA患者各臨床和常規(guī)實驗室指標的變化

見表2。第一組晨僵、ERS、CRP、RF、HAQ均有不同程度的下降（P < 0.05或0.01），第二組晨僵、ERS、HAQ均有不同程度的下降（P < 0.01），但第三組各指標前后變化不明顯。

2.3 RA患者和正常人外周血目的基因CD147、MMPs表達比較

目的基因CD147、MMPs熒光定量的數(shù)據(jù)減去各自的內(nèi)參基因β-actin的熒光定量數(shù)據(jù)（Ct值），得到△Ct，轉(zhuǎn)換為對數(shù)2-△Ct，即目的基因相對于內(nèi)參基因的表達倍數(shù)。倍數(shù)越高則表達越高。RA患者與正常人外周血目的基因CD147、MMPs表達比較見圖1。

2.4 RA三組治療前各目的基因相對于內(nèi)參基因倍數(shù)比較

見圖2。

2.5 RA三組治療后目的基因表達情況

治療后的目的基因表達采用2-△△Ct法分析。即△△Ct=△Ct治療前-△Ct治療后。

2.6 RA三組治療前后血清MMPs表達

見表3。治療后18周，第一組的MMP2、MMP3、MMP9均較前明顯下降（P < 0.01），第二組MMP3、MMP9均較前明顯下降（P < 0.01）。第三組各指標差異不明顯（P > 0.05）。

3討論

類風濕關節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA），是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，是一種自身免疫性疾病?？赡芘c內(nèi)分泌、代謝、營養(yǎng)、地理、職業(yè)、心理和社會環(huán)境的差異、細菌和病毒感染及遺傳因素等方面有關系，以慢性、對稱性、多滑膜關節(jié)炎和關節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)。好發(fā)于手、腕、足等小關節(jié)，反復發(fā)作，呈對稱分布。早期有關節(jié)紅腫熱痛和功能障礙，晚期關節(jié)可出現(xiàn)不同程度的僵硬畸形，并伴有骨和骨骼肌的萎縮，極易致殘。主要累及關節(jié)滑膜（以后可波及到關節(jié)軟骨、骨組織、關節(jié)韌帶和肌鍵），其次為漿膜、心、肺及眼等結(jié)締組織的廣泛性炎癥性疾病。

多種炎性細胞因子參與了RA的發(fā)病過程[3，4]，刺激滑膜細胞增殖，形成血管翳，是導致骨侵蝕的基礎。X線上早期主要表現(xiàn)為關節(jié)周圍腫脹，關節(jié)附近的輕度骨質(zhì)疏松，隨后出現(xiàn)間隙狹窄、關節(jié)破壞、融合、脫位等。RA患者關節(jié)部位的軟骨和骨侵蝕有多重因素參與?；|(zhì)金屬蛋白酶參與了軟骨與骨的侵蝕，其他還有細胞因子、T細胞、B細胞等。

正常情況下人體的骨和軟骨的合成和降解處于一種平衡狀態(tài)，一旦這種平衡狀態(tài)被打破，則出現(xiàn)持續(xù)的降解，造成骨和軟骨的破壞?；|(zhì)金屬蛋白酶是水解細胞外基質(zhì)的蛋白裂解酶，包括基質(zhì)中以及整合于質(zhì)膜中的各種膠原酶和彈性蛋白酶等。基質(zhì)金屬蛋白酶是一個大家族，因其需要Ca2+、Zn2+等金屬離子作為輔助因子而得名，其家族成員具有相似的結(jié)構(gòu)，同一種MMP可降解多種細胞外基質(zhì)成分，而某一種細胞外基質(zhì)成分又可被多種MMP降解，但不同酶的降解效率可不同。MMPs幾乎能降解ECM中的各種蛋白成分。以往主要是研究其在腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用。MMPs能夠破壞關節(jié)骨與軟骨中的膠原、蛋白多糖、其他細胞外基質(zhì)，促進了血管翳對軟骨的侵蝕，在關節(jié)破壞中發(fā)揮重要的作用。類風濕關節(jié)炎滑膜的巨噬細胞是產(chǎn)生MMPs的主要細胞。其中MMP3是基質(zhì)溶解酶，MMP2和MMP9主要是溶解膠原和明膠。類風濕關節(jié)炎的患者在外周血中均存在明顯的基質(zhì)金屬蛋白酶的高表達，并且與病情的程度有一定的相關性[5]。CD147是MMPs的拮抗劑，可刺激鄰近的間質(zhì)細胞產(chǎn)生MMPs[6，7]。CD147在體內(nèi)廣泛存在與造血細胞和非造血細胞中，除了血液系統(tǒng)，其他如中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等均有CD147的表達。近年來研究顯示，在類風濕關節(jié)炎患者中的外周血細胞以及滑膜細胞上均有CD147表達上調(diào)[8-10]?；ぜ毎械腃D147表達增加，可通過自分泌或者旁分泌的方式誘導鄰近的滑膜成纖維細胞大量分泌MMPs。促進了血管翳的形成以及對軟骨的侵蝕，參與關節(jié)的破壞[11-13]。

近些年生物制劑的研發(fā)以及在臨床上的應用成為治療類風濕關節(jié)炎的重大進展。目前有多重生物制劑如TNF-α抑制劑、白介素-1拮抗劑通過對抗TNF-α、IL-1等過度分泌來治療類風濕關節(jié)炎[14-16]。Infliximab能與TNF-α的可溶形式及跨膜形式高度結(jié)合，抑制TNF-α與p55/p75受體的結(jié)合，從而使TNF-α失去活性。在本研究中，第一組和第二組在治療后各項主要的臨床癥狀和實驗室結(jié)果均較治療前有不同程度的下降，而第三組下降不明顯。說明Infliximab聯(lián)合甲氨蝶呤治療類風濕關節(jié)炎能夠改善患者的癥狀，延緩疾病的發(fā)展。第一組和第二組18周外周血單個核細胞中CD147 mRNA的表達較治療前下降，而第三組卻有所上升，說明Infliximab能夠明顯降低CD147 mRNA的表達。治療后第一組和第二組MMP9 mRNA表達均明顯下降，與第三組比較差異明顯，但MMP2和MMP3三組間比較，差異不明顯。對患者外周血清中MMPs的表達進行檢測，治療后18周，第一組MMP2、MMP3、MMP9均有明顯下降，而第二組也有不同程度的下降，但以MMP3和MMP9下降更明顯，第三組下降不明顯。

綜上所述，Infliximab聯(lián)合甲氨蝶呤治療類風濕關節(jié)炎，可以下調(diào)外周血中CD147、MMPs的表達，從而改善癥狀、延緩疾病的進一步發(fā)展。

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（收稿日期：2013-02-27）