潰瘍性結(jié)腸炎患者免疫紊亂分析及綜合護(hù)理效果的研究

【摘 要】目的：分析潰瘍性結(jié)腸炎患者外周血中T細(xì)胞亞群數(shù)量和比例的變化，觀察綜合護(hù)理模式對其療效的作用。方法：選擇20例UC患者，分離外周血單核細(xì)胞（PBMC），采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測Th1、Th2、Th17細(xì)胞的數(shù)量及Th1/Th2比值，ELISA法測檢UC患者綜合護(hù)護(hù)理前后PBMC培養(yǎng)上清中IFN-γ、IL-17、IL-4細(xì)胞因子水平，用采用綜合護(hù)理模式觀察其效果， 與同期選擇的健康對照組比較分析。結(jié)果：UC患者綜合護(hù)理前PBMC中IFN-γ+Th1、IL-17+Th17細(xì)胞的數(shù)量，Th1/Th2比值均高于健康對照組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義；綜合護(hù)理處理后，Th1、Th17細(xì)胞的數(shù)量及Th1/Th2比值的與對照組比較，差別均無統(tǒng)計學(xué)意義。綜合護(hù)理處理前IFN-γ、IL-17水平高于健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；綜合護(hù)理處理后， 細(xì)胞因子的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：UC患者外周血免疫紊亂在其發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用，采用綜合護(hù)理模式可改善其免疫紊亂狀態(tài)，有利于患者恢復(fù)健康。

【關(guān)鍵詞】潰瘍性結(jié)腸炎；免疫紊亂；綜合護(hù)理

【中圖分類號】R574 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1004-7484（2013）11-0780-02

潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative colitis，UC）是一種病因未明的免疫性疾病。近年來研究表明UC患者T細(xì)胞免疫失衡與其發(fā)病機(jī)制密切相關(guān) [1-2]，但其臨床治療效果不佳，常常影響患者的生活質(zhì)量。本研究將檢測患者外周血的T細(xì)胞亞群的表達(dá)和相應(yīng)的細(xì)胞因子水平， 并運(yùn)用綜合護(hù)理模式處理UC患者，為UC患者的臨床康復(fù)尋找新的具有臨床意義的方法。

1 材料和方法

1.1 臨床資料 20例潰瘍性結(jié)腸炎患者取自本院總部，男12例，女8例，年齡21～64歲，中位年齡35歲，均符合UC診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，20例UC病例組，采用綜合護(hù)理措施處理10個月以上；正常對照20例取自本院體檢部，為健康人群，排除UC及其它自身免疫性疾病，其中男11例，女9例，年齡25～61歲，中位年齡33歲。

1.2 檢測儀器與試劑 小鼠抗人CD4單克隆抗體IgG1、FITC-抗人IFN-γIgG1/PE-抗人IL-4及同型對照、流式細(xì)胞儀均購自美國BD公司。FITC-抗人IL-17及同型對照IgG1購自美國Ebioscience公司。佛波酯（PMA）、離子霉素、莫能菌素購自美國Sigma公司， RPMI1640培養(yǎng)液購自美國Gibco公司?？谷薎L-4 ELISA試劑盒、 抗人IFN-γ ELISA試劑盒購于美國RD公司。抗人IL-17 ELISA試劑盒購于美國Ebioscience公司。

1.3 方法

1.3.1 淋巴細(xì)胞分離與 Th細(xì)胞亞群測定 分別抽取UC患者組、綜合護(hù)理處理組和健康對照組外周靜脈血5 mL， 采用肝素鈉抗凝， Ficol1密度梯度離心法分離PBMC， 調(diào)整PBMC密度為1×109/L， 懸浮于含100 mL/L胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，同步取1 mL細(xì)胞懸液， 進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色，F(xiàn)CM測定Th細(xì)胞亞群；取2 mL細(xì)胞懸液加入PMA（50 μg/L）、離子霉素（1 μmol/L）置于37℃孵箱中培養(yǎng)過夜， 收集上清置于-70℃凍存待ELISA檢測。 取上述PBMC懸液（1×109/L）置于48孔培養(yǎng)板內(nèi)， 每孔1 mL， 并加PMA （50 μg/L）、離子霉素（1 μmol/L）和蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑莫能菌素（2 μmol/L）以阻止細(xì)胞因子向細(xì)胞外分泌， 在37℃孵箱中培養(yǎng)5 h。收集細(xì)胞分為對照管和實(shí)驗(yàn)管， 分別加入PercP小鼠抗人CD4 mAb IgG1 10 μL， 混勻， 室溫放置20 min對細(xì)胞表面抗原進(jìn)行染色。加入Cytofix/Cytoperm液200 μL，4℃放置20 min， 通透和固定細(xì)胞并洗滌后， 進(jìn)行胞內(nèi)細(xì)胞因子染色， 實(shí)驗(yàn)管分別加入IFN-γ mAb IgG1/PE，抗人IL-4 /FITC， FITC抗人IL-17 mAb IgG1各10 uL， 對照管加入同型對照抗體， 4℃避光孵育30 min后， 用Perm/Wash液1 mL洗滌2次， 最后以300 μL洗滌液重懸細(xì)胞，24 h內(nèi)采用FCM檢測分析。以CD4直方圖設(shè)門區(qū)分Th細(xì)胞（CD4+）， 最終以散點(diǎn)圖IFN-γ、 IL-4和IL-17染色陽性表示Th1細(xì)胞、 Th2細(xì)胞和Th17細(xì)胞， 用Cellsquest軟件獲取并分析數(shù)據(jù)。

1.3.3 外周血單核細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ、 IL-4、 IL-17的檢測 取上述凍存PBMC培養(yǎng)上清， 采用ELISA法檢測上清中IFN-γ、IL-4、IL-17水平， 具體操作按試劑盒提供的說明書進(jìn)行，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品均設(shè)3個復(fù)孔， 酶標(biāo)測試儀450 nm處讀數(shù)。

1.3.4 綜合護(hù)理措施處理病人至少10個月 （1）休息：給病人提供安靜、舒適的休息環(huán)境，注意勞逸結(jié)合，生活要有規(guī)律，保持心情舒暢，以減少病人的胃腸蠕動及體力消耗；（2）嚴(yán)密觀察病情：注意監(jiān)測病人的體溫、脈搏、心率、血壓的變化，同時觀察病人的皮膚彈性、有無脫水表現(xiàn)。還應(yīng)注意觀察腹瀉、腹部壓痛及腸鳴音情況，如出現(xiàn)鼓腸、腸鳴音消失，腹痛加劇等情況，要考慮中毒性巨結(jié)腸的發(fā)生，積極采取搶救措施；（3）飲食護(hù)理：應(yīng)給予高熱量、富營養(yǎng)而少纖維、易消化、軟食物，禁食生、冷食物及含纖維素多的蔬菜、水果，忌食牛乳和乳制品。急性發(fā)作期病人應(yīng)進(jìn)食無渣流質(zhì)或半流質(zhì)飲食，病情嚴(yán)重者應(yīng)禁食，并給以胃腸外營養(yǎng)，使腸道得以休息，利于減輕炎癥，控制其癥狀；（4）腹瀉護(hù)理：由于病人腹瀉次數(shù)較多，協(xié)助病人作好肛門及周圍皮膚的護(hù)理，如手紙要柔軟，擦拭動作宜輕柔，便后用肥皂與溫水清洗肛門及周圍皮膚，清洗后輕輕拭干，必要時給予護(hù)膚軟膏涂擦，以防皮膚破損。同時注意觀察糞便的量、性狀，排便次數(shù)；（5）心理護(hù)理與中醫(yī)調(diào)理：由于本病的病程特點(diǎn)，病人易出現(xiàn)抑郁和焦慮。為此應(yīng)耐心向病人做好衛(wèi)生宣教工作，使其積極配合治療。同時幫助病人認(rèn)識到不良心理狀態(tài)不利于本病的修復(fù)，從而建立起戰(zhàn)勝疾病的信心和勇氣。

1.3.5 統(tǒng)計學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)結(jié)果用 表示，采用SPSS14.0軟件分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 UC患者綜合護(hù)理處理前后外周血Th1/Th2、Th17細(xì)胞亞群的變化 細(xì)胞膜表面標(biāo)志和胞內(nèi)細(xì)胞因子染色流式細(xì)胞儀測定結(jié)果顯示， UC患者綜合護(hù)理處理前，外周血中CD4+IFN-γ+Th1細(xì)胞、Th1/Th2細(xì)胞比值、CD4+IL-17+Th17細(xì)胞的數(shù)量均高于健康對照組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義；綜合護(hù)理處理后，外周血中CD4+IFN-γ+Th1細(xì)胞、Th1/Th2細(xì)胞比值、CD4+IL-17+Th17細(xì)胞的數(shù)量與健康對照組比較，均無顯著性差異，見表1。

3 討論

綜合護(hù)理是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)臨床護(hù)理的重要方式，特別是在一些慢性病患者中可能發(fā)揮重要作用，綜合使用可能改善機(jī)體的免疫狀態(tài)。潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative colitis，UC）是一種常見的慢性免疫性疾病，目前還難以找到特異而有效的治療方法。研究發(fā)現(xiàn)，Th17細(xì)胞是一種新型的CD4+效應(yīng)T細(xì)胞，它與傳統(tǒng)的Th細(xì)胞相比，是一群不同的T細(xì)胞亞型，在自身免疫病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作用[3，4]，它可能加重自身免疫的病情。近年來研究表明UC患者Th細(xì)胞免疫失衡與其發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)，但其具體機(jī)制尚未完全明確[5]。既往研究發(fā)現(xiàn)UC發(fā)生發(fā)展與Th1、Th2細(xì)胞數(shù)量和比例失衡密切相關(guān)， 而近年發(fā)現(xiàn)，有一種特殊產(chǎn)生細(xì)胞因子IL-17的輔助型T細(xì)胞，在炎癥疾病與自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用，該細(xì)胞不同于傳統(tǒng)的Th1、Th2細(xì)胞，是一種新型的輔助性T細(xì)胞，定義為Th17細(xì)胞。動物模型證實(shí)IL-17促進(jìn)炎性細(xì)胞因子IL-6、 TNF-α的合成并參與炎癥反應(yīng)， 提出以分泌IL-17為主的Th17細(xì)胞在一些炎性疾病的發(fā)病中具有比Th1/Th2更重要的作用[6，7]。我們檢測UC患者Th1、Th2及Th17細(xì)胞亞群數(shù)量和比例， 發(fā)現(xiàn)綜合護(hù)理處理前，它們的比值均高于健康對照組，但是經(jīng)過較長時間的綜合護(hù)理后，患者的免疫狀態(tài)有較大的改善， 有利于患者的康復(fù)，為臨床治療提供新的理論依據(jù)。

在綜合護(hù)理處理前，我們通過FCM檢測外周血中Th細(xì)胞數(shù)量和比例的變化， 發(fā)現(xiàn)UC患者Th1、Th17細(xì)胞數(shù)量均高于健康對照組， 而Th2細(xì)胞無明顯差異， 導(dǎo)致Th1/Th2相對比例升高。同時通過ELISA分析體外培養(yǎng)PBMC上清中相應(yīng)細(xì)胞因子的水平， 證明IFN-γ、 IL-17水平也高于健康對照組。研究結(jié)果提示， 在UC患者外周血中， Th1與Th17細(xì)胞亞群處于主導(dǎo)地位，但是在綜合護(hù)理處理幾周后，患者的免疫相關(guān)的細(xì)胞因子慢慢恢復(fù)平衡，患者的生活狀也也相應(yīng)改善，有利于UC患者的治療，但具體機(jī)制與方法有待進(jìn)一步探索[8，10]。

綜上所述， 我們的研究表明UC患者Th相關(guān)細(xì)胞及其因子的失衡可能在UC的發(fā)病機(jī)制中起到較大作用，可通過綜合護(hù)理的方式調(diào)節(jié)Th細(xì)胞的平衡來控制潰瘍性結(jié)腸炎患者機(jī)體的免疫狀態(tài)，提高患者的生活質(zhì)量。

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