儲存溫度與時間對血清標本生化檢驗結(jié)果的影響

【摘 要】目的：對不同保存溫度和時間對血清免疫球蛋白含量的影響進行分析和探討。方法：采用全自動生化分析儀進行分析。并使用免疫比濁法來對當天和4℃以及-20℃所保存3d、6d血清中的IgA；IgG；IgM含量進行分別測試。結(jié)果：在4℃下保存3d的血清，只有IgA的含量出現(xiàn)明顯性的升高。差異顯著（P<0.05）。保存6d的血清，IgA、IgG的含量也出現(xiàn)了明顯性的增加，差異顯著，（P<0.05）。在-20℃下進行保存的血清，在保存3d、6d時，其的IgA和IgG以及IgM水平?jīng)]有明顯性的變化，差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結(jié)論：經(jīng)過實驗表明，在4℃下對血清進行保存3d，IgA的含量出現(xiàn)了明顯性的變化。然而IgG在6d時也出現(xiàn)了很明顯的升高情況。但是IgM卻沒有出現(xiàn)變化。在-20℃條件下對血清進行保存3～6d時，IgA和IgG以及IgM的含量都沒有出現(xiàn)明顯性的變化。在-20℃下進行保存6d以內(nèi)的血清，適合進行IgA、IgG、IgM的檢測。

【關鍵詞】溫度；血清免疫球蛋白；免疫比濁法；生化分析；時間

【中圖分類號】R55 【文獻標識碼】A 【文章編號】1004-7484（2013）11-0607-01

正常成人每天合成的免疫球蛋白為2～5g[1]。但是在受到感染以后，其的合成量可增加7倍左右[2]。因此，對Ig的測定可以作為檢測多種疾病的依據(jù)，同時在臨床上，還將其作為臨床診斷和觀察以及預后的重要觀察指標。然而，對血清Ig的檢測結(jié)果也同時受到多種因素的影響，比如檢測儀器；標本處理；操作技術；實驗試劑等。在同一實驗室的不同批次或不同實驗室中對其進行檢測，也會出現(xiàn)一定的差異。但是，在國內(nèi)對血清標本的放置時間和保存溫度對IG的檢測結(jié)果存在的影響，報道的非常少。本文采用全自動生化檢測儀器對不同溫度和時間對血清進行保存，并對Ig進行檢測，主要是探討臨床上保存血清的最佳條件。以下是詳細報道。

1 資料和方法

1.1 一般資料 我校在2012年6月～2013年10月期間，一共選擇了200名健康的體檢學生。都是男性，年齡在22～30歲之間，平均年齡為（27.5±2.0）歲。他們都沒有感染性和系統(tǒng)性的疾病，同時沒有出現(xiàn)肝腎和心血管等疾病。

1.2 方法

使用干燥的試管對他們進行靜脈抽血，大約為5ml。在室溫下放置1h，使用3500rpm進行離心10min，最后去最上層的血清，分開裝到5根試管中。分別放置到室溫和4℃以及-20℃的環(huán)境中進行保存。在室溫下進行保存的血清，在保存2h后，對其進行檢測IgA、IgG、IgM。保存在4℃和-20℃的血清，分別在第3d和第6d進行檢測。IgA、IgG、IgM的定量測定試劑盒由上?？迫A生物工程股份有限公司生產(chǎn)。用Hitachi 7180全自動生化分析儀（日立公司生產(chǎn)）進行免疫比濁法測定，所有操作均嚴格按照試劑盒說明書進行[3]。

1.3 統(tǒng)計學方法 對所有的數(shù)據(jù)都使用均數(shù)±標準差（x±s）來進行表示[4]。并使用SAS15.0軟件進行統(tǒng)計和分析。并采X2檢驗。差異顯著具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

2 結(jié)果

在4℃下保存3d的血清，只有IgA的含量出現(xiàn)明顯性的升高。差異顯著（P<0.05）。保存6d的血清，IgA、IgG的含量也出現(xiàn)了明顯性的增加，差異顯著，（P<0.05）。在-20℃下進行保存的血清，在保存3d、6d時，其的IgA和IgG以及IgM水平?jīng)]有明顯性的變化，差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。詳細見以下表1。

3 討論

免疫比濁法是目前臨床上測定血清IgA、IgG和IgM的主要方法，包括透射比濁法和散射比濁法。兩種方法的測定原理和儀器不同，其結(jié)果有所差異。透射比濁法主要檢測抗原抗體復合物所形成的濁度，用全自動生化分析儀檢測；散射比濁法是從不同角度測量抗原抗體復合物微粒的散射光強度和濁度的變化，用蛋白分析儀檢測。一般認為散射比濁法的靈敏度高、重復性好，但國內(nèi)研究顯示散射比濁法和透射比濁法準確性、精密度均比較好。但散射和濁法和透射比濁法測定Ig的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)偏差均在可接受范圍，變異系數(shù)均小于3%，說明二者均為IgG、IgA、IgM的可靠測定方法。全自動生化分析儀的應用，使Ig的檢測速度大為加快。如果使用性能較好的全自動生化分析儀及相應的配套試劑，就能保證IgA、IgG和IgM透射比濁法測定結(jié)果與散射比濁法一致。日立7180全自動生化分析儀具有處理能力大、測試速度高、標本用量小等優(yōu)點，在精密度、線性、準確度等方面性能良好。

血清標本的分離與保存、檢測儀器和試劑、操作技術等因素均對Ig檢測結(jié)果有影響，在檢測過程中必須做好各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證措施，減少或消除檢驗誤差。用全自動生化分析儀測定血清樣品，新鮮標本較好。由于免疫比濁法測定的是溶液濁度，故脂血、溶血標本對測定結(jié)果影響很大。適宜的溫度可加快抗原與抗體結(jié)合，從而加速了濁度反應。在0～56℃之間，溫度越低，反應越慢，但反應生成的抗原抗體復合物結(jié)合致密、牢固，易于觀察；溫度越高，反應越快，但反應生成的抗原抗體復合物不穩(wěn)定，易解離。溫度過高（>56℃）可能引起抗血清球蛋白變性及某些血清球蛋白破壞。因此，多數(shù)抗原抗體反應以37℃為宜。

經(jīng)過實驗表明，在4℃下對血清進行保存3d，IgA的含量出現(xiàn)了明顯性的變化。然而IgG在6d時也出現(xiàn)了很明顯的升高情況[6]。但是IgM卻沒有出現(xiàn)變化。在-20℃條件下對血清進行保存3～6d時，IgA和IgG以及IgM的含量都沒有出現(xiàn)明顯性的變化。在4℃時對血清進行保存時，IgA和IgG的含量升高，然而IgM的含量卻沒有變化，主要是因為血清中的IgA、IgG大多是單體。IgA和IgG的分子肽鏈相對于IgM來說，更容易被血清中的蛋白酶水解掉各種的片段。然而這些被水解的片段又會與試劑中的相應的抗體進行結(jié)合。研究結(jié)果表明：在4℃下保存6d的血清不適合進行Ig的檢測。但是在-20℃下保存的血清卻可以進行Ig的檢測。

參考文獻：

[1] 王琥，柳長柏，黃宇彬. 溫度、血清以及肝素等因素對TAT穿膜效應的影響[J]. 生物技術，2010，02：58-61.

[2] 吳莉，高新蕾，高萬振，裴召輝，王集輝. 試驗環(huán)境溫度對小牛血清邊界潤滑條件下超高分子量聚乙烯往復磨損行為的影響[J]. 塑料，2010，02：55-57.

[3] 李士平，宋樹豪，范成浩，王安. 溫度與飼糧維生素C水平對后備蛋鴨血清免疫和抗氧化指標的影響[J]. 動物營養(yǎng)學報，2010，04：923-928.

[4] 吳丹華，鄭萍萍，張玉玉，王春琳. 溫度脅迫對三疣梭子蟹血清中非特異性免疫因子的影響[J]. 大連海洋大學學報，2010，04：370-375.