流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用探析

【摘 要】流式細(xì)胞術(shù)是一種在功能上對(duì)單細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行定量分析和分選的檢測方法。在近些年的研究中，將流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用于免疫學(xué)檢查中，取得了很大的成效。本研究對(duì)流式細(xì)胞術(shù)的原理和在免疫檢查中的應(yīng)用做了一定的闡述，最后對(duì)流式細(xì)胞術(shù)將來的發(fā)展做了一個(gè)展望。

【關(guān)鍵詞】流式細(xì)胞術(shù)；免疫學(xué)檢查

【中圖分類號(hào)】R19 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1004-7484（2013）11-0523-01

前言：流式細(xì)胞術(shù)可以告訴的分析上萬個(gè)細(xì)胞，同時(shí)得出多個(gè)參數(shù)，具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好的特點(diǎn)，是現(xiàn)存的最先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)，在免疫檢查方面運(yùn)用很普遍。尤其在近些年，流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查方面不斷取得新的突破，不斷有新的成果面世。

1 流式細(xì)胞術(shù)的原理

流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)可以在一定的液流系統(tǒng)中， 快速測定單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞器的生物學(xué)性質(zhì)，并把特定的細(xì)胞或細(xì)胞器從群體中加以分類收集的技術(shù)。在應(yīng)用的過程中要用到流式細(xì)胞儀， 流式細(xì)胞儀的基本工作原理是采用激光作為激發(fā)光源，利用熒光染料與單克隆抗體結(jié)合的標(biāo)記技術(shù)，通過計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對(duì)流動(dòng)的單個(gè)細(xì)胞或微粒的多個(gè)參數(shù)信號(hào)進(jìn)行數(shù)據(jù)資料處理，從而對(duì)目的細(xì)胞或微粒進(jìn)行詳細(xì)的分析。常用的標(biāo)記方法為直接免疫熒光染色和間接免疫熒光染色，采用的是抗原抗體特異性結(jié)合的原理。直接免疫熒光法多用于對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)志的染色分析，選用單克隆熒光抗體，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)。每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體，特異性高，缺點(diǎn)是敏感性偏低。間接免疫熒光法是選用特異性單抗與待測細(xì)胞結(jié)合后，再用熒光二抗進(jìn)行標(biāo)記染色，形成抗原-抗體-熒光抗體復(fù)合物后上機(jī)檢測分析。此法應(yīng)用廣泛，最適宜檢測一些新的未知抗原，進(jìn)行一些研究分析。這種方法只要標(biāo)記幾類種屬特異性不相同的二抗即可。由于流式細(xì)胞儀及軟系統(tǒng)的飛速發(fā)展，為了獲取雙參數(shù)或多參數(shù)數(shù)據(jù)資料，需要進(jìn)行熒光抗體的組合標(biāo)記，常采用二色、三色、四色甚至更多標(biāo)記。

2 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)各方面的應(yīng)用

2.1淋巴細(xì)胞功能分析

淋巴細(xì)胞表面抗原的檢測不能完全了解淋巴細(xì)胞的功能，需要對(duì)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子或體外培養(yǎng)細(xì)胞后進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測定。檢測細(xì)胞因子的方法有酶連免疫斑點(diǎn)法、有限稀釋分析法、原位免疫組化法等。每種方法都有自己的特點(diǎn)，但相比較，流式細(xì)胞術(shù)法更有優(yōu)勢。它不僅可檢測細(xì)胞群中單個(gè)細(xì)胞分泌的特有或共表達(dá)的不同因子，確定產(chǎn)生細(xì)胞因子的陽性細(xì)胞的百分率，而且可同時(shí)確定陽性細(xì)胞的表型，是一種可以在單細(xì)胞水平研究細(xì)胞因子的有效方法，另外還可在同一細(xì)胞內(nèi)同時(shí)檢測兩種不同的細(xì)胞因子，也可用多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)胞內(nèi)多種細(xì)胞因子進(jìn)行測定。

2.2細(xì)胞抗原表達(dá)的研究

細(xì)胞抗原（表面抗原、胞內(nèi)抗原）的表達(dá)與細(xì)胞的其它生物學(xué)變化一樣，是細(xì)胞周期和增殖活動(dòng)中的一種現(xiàn)象。研究正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞增殖、分化及周期活動(dòng)中的抗原表達(dá)，對(duì)于加深對(duì)細(xì)胞發(fā)育、分化、成熟的了解和對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性及其寫腫瘤診斷、治療、抗藥性等的認(rèn)識(shí)十分重要.用FCM（流式細(xì)胞術(shù)）研究細(xì)胞抗原表達(dá)比傳統(tǒng)手段具有許多優(yōu)越之處。目前FCM已應(yīng)用于抗原表達(dá)的遺傳基礎(chǔ)研究、抗原表達(dá)與細(xì)胞周期關(guān)系研究、細(xì)胞不同生長期抗原表達(dá)觀察、細(xì)胞生長環(huán)境與抗原表達(dá)關(guān)系研究以及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)抗原、核抗原、細(xì)胞器抗原成分等方面研究.

2.3使用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行移植免疫判斷 通過流式細(xì)胞術(shù)

可以準(zhǔn)確進(jìn)行移植免疫判斷，對(duì)移植器官的成活情況做出準(zhǔn)確了解。 在這個(gè)過程中，通過交叉配型以及群體反應(yīng)性抗體檢測，可有效完成該項(xiàng)檢測活動(dòng)。 由于交叉配型陽性移植患者的排異反應(yīng)明顯高于交叉配型陰性移植患者，通過流式細(xì)胞術(shù)對(duì)交叉配型進(jìn)行檢測，可實(shí)現(xiàn)對(duì)移植器官的免疫情況進(jìn)行檢測。 還可以對(duì) IgA、IgG、IgM 進(jìn)行檢測，給醫(yī)生提供更加具體詳細(xì)的臨床信息，從而輔助醫(yī)生進(jìn)行臨床治療方案作出選擇。

2.4對(duì)淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行分析

血液中淋巴細(xì)胞免疫表型（亞群）分析是 FCM最主要的功能之一。通過 FCM 分析淋巴細(xì)胞免疫表型，不僅對(duì)于了解淋巴細(xì)胞的分化、功能、鑒別新的淋巴細(xì)胞亞群有重要價(jià)值，而且通過研究大多數(shù)疾病的特異性淋巴細(xì)胞亞群或某些細(xì)胞表面標(biāo)志的存在、缺乏、過度表達(dá)等，對(duì)免疫性疾病、感染、腫瘤等疾病的診斷、治療、免疫功能重建等都有重要的臨床意義。在檢測血液中淋巴細(xì)胞免疫表型時(shí)，F(xiàn)CM 的高靈敏度、高速度和多參數(shù)分析比其他方法更精確，故 FCM 被認(rèn)為是血液中淋巴細(xì)胞免疫表型分析的標(biāo)準(zhǔn)方法圖。FCM 可以同時(shí)檢測一種或幾種淋巴細(xì)胞表面抗原，將不同的淋巴細(xì)胞亞群（包括CD4+、CD8+）區(qū)分開來，并計(jì)算出 CD4+/CD8+的比例，通過對(duì)病人淋巴細(xì)胞各亞群數(shù)量的測定來監(jiān)控病人的免疫狀態(tài)，如正常人群淋巴細(xì)胞 T4/T8 比值大約為 2/1，但在人體細(xì)胞免疫力低下時(shí)可出現(xiàn)比例倒置。這一技術(shù)將對(duì)人體細(xì)胞免疫功能的評(píng)估、免疫功能性疾病的分析以及各種血液病及腫瘤的診斷和治療起到重要作用。

3 對(duì)流式細(xì)胞術(shù)的前景展望

流式細(xì)胞儀不斷改進(jìn)、測定方法迅速發(fā)展以及高質(zhì)量試劑的研制，為提高FCM檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和分析能力提供了保障。長期以來FCM的應(yīng)用一直陷于對(duì)細(xì)胞或顆粒的分析，隨著膠乳顆粒在流式細(xì)胞分析中的應(yīng)用，“液相芯片”技術(shù)的出現(xiàn)實(shí)現(xiàn)了流式細(xì)胞儀對(duì)可能性物質(zhì)的分析，實(shí)現(xiàn)了樣本分析時(shí)的低樣本量、多參數(shù)檢測。流式細(xì)胞儀從單純大型儀器發(fā)展為適應(yīng)各種實(shí)際應(yīng)用的便攜式、臺(tái)式、高分辨率、高質(zhì)量分選的研究型流式細(xì)胞儀；采用的熒光試劑，從非配套試劑發(fā)展為配套的試劑盒。另外，流式微球陣列技術(shù)也屬于液相芯片技術(shù)。這些技術(shù)將FCM的應(yīng)用領(lǐng)域進(jìn)一步擴(kuò)展，發(fā)展了一種新的技術(shù)平臺(tái)?？梢灶A(yù)見，在未來免疫學(xué)基礎(chǔ)研究和臨床檢測領(lǐng)域，流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用范圍會(huì)進(jìn)一步擴(kuò)大，應(yīng)用深度會(huì)進(jìn)一步加強(qiáng)。雖然，這種方法還具有一些自身的缺點(diǎn)，如價(jià)格昂貴、對(duì)操作人員要求高等，但是這些缺點(diǎn)一定會(huì)隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步逐步被克服。

結(jié)語：流式細(xì)胞術(shù)在一定程度上促進(jìn)了免疫學(xué)檢查的發(fā)展，而在一些方面流式細(xì)胞術(shù)的技術(shù)還有很多提高和發(fā)展的空間?？傊?，流失細(xì)胞術(shù)技術(shù)憑借快速、高效的特征已廣泛應(yīng)用各個(gè)領(lǐng)域，大大促進(jìn)了現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)以及醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展。我們要重視這一方面的研究，投入更多的資金、人才和技術(shù)更好的做好流式細(xì)胞術(shù)的研究，促進(jìn)醫(yī)學(xué)上免疫學(xué)檢查的更好發(fā)展。

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