金黑子牌野生黑枸杞茶的抗氧化活性研究

【摘 要】目的：研究金黑子牌野生黑枸杞茶的抗氧化作用。方法：采用體外實(shí)驗(yàn)觀察金黑子牌野生黑枸杞茶對(duì)H2O2誘導(dǎo)的紅細(xì)胞氧化溶血和大鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化的保護(hù)作用。結(jié)果：金黑子牌野生黑枸杞茶能夠抑制H2O2誘導(dǎo)的紅細(xì)胞氧化溶血和肝組織勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。結(jié)論：金黑子牌野生黑枸杞茶具有顯著的抗氧化活性

【中圖分類號(hào)】R285 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1004—7484（2013）11—0192—02

黑枸杞（Lycium ruthenicum Murr.）又稱蘇枸杞。為我國(guó)西部青海、西藏等高原沙漠地區(qū)一種地道的野生藥用植物資源。維醫(yī)、藏醫(yī)很早就有用黑枸杞入藥的記載[1]。黑枸杞味甘、性平，富含蛋白質(zhì)、枸杞多糖、氨基酸、維生素、礦物質(zhì)、微量元素等多種營(yíng)養(yǎng)成分。尤其含有豐富的黑果色素—天然原花青素（Proantho Cyanidins，PC），是迄今為止，發(fā)現(xiàn)PC含量最高的天然野生植物[2，3]。黑枸杞茶是應(yīng)用青海柴達(dá)木產(chǎn)黑枸杞制備的一種功能性食品，為了驗(yàn)證其功效，進(jìn)一步促進(jìn)的野生黑枸杞的開發(fā)和利用，本實(shí)驗(yàn)對(duì)黑枸杞茶的體外抗氧化活性進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1材料與儀器

金黑子牌野生黑枸杞茶，由青海紫陽(yáng)生物科技有限公司提供，批號(hào)：2013060501、2013061301，試驗(yàn)時(shí)用礦泉水浸泡5分鐘后釋放天然色素，呈紫蘭色，經(jīng)過(guò)濾離心取上清液用于實(shí)驗(yàn)。

大鼠10只，體重180～220g。浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（浙）2008-0033H202，南昌白云藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；生理鹽水，南京小營(yíng)藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)；三氯乙酸，成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn)；2- 硫代巴比妥酸，廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心生產(chǎn)；康師傅礦泉水，南京頂津食品有限公司生產(chǎn)。

SpectraMax 190酶標(biāo)儀，美國(guó)分子儀器公司產(chǎn)品。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1對(duì)H2O2誘導(dǎo)的紅細(xì)胞氧化溶血的影響[4] 取大鼠，眼球取血，分離紅細(xì)胞，生理鹽水洗滌三次后制成體積分?jǐn)?shù)0.5 %的紅細(xì)胞懸液。取紅細(xì)胞懸液1.0mL于試管中，加入不同濃度（0.0500g/ml、0.0250g/ml、0.0125g/ml）的金黑子牌野生黑枸杞茶（由于黑枸杞茶浸泡后有顏色，為排除樣品本身顏色帶來(lái)的誤差，每個(gè)濃度都設(shè)立一個(gè)參照組，即：除將0.5 %的紅細(xì)胞懸液改為等體積的生理鹽水外，其他均相同），對(duì)照以蒸餾水代替，最后加100mmol/L雙氧水0.1 mL，混勻后于37℃水浴60min，取出后用生理鹽水將反應(yīng)混合物稀釋5倍，3000 r/min離心5min，上清液于415nm處比色，測(cè)出樣品管的吸光度為A，對(duì)照管吸光度為A0。對(duì)紅細(xì)胞氧化溶血的抑制率為：抑制率=[（A0- A0對(duì)照）-（A-A對(duì)照）]/ （A0- A0對(duì)照）*100%。

1.2.2對(duì)大鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化的影響[5] 取大鼠，頸椎脫臼處死，迅速取出肝臟，用冷的生理鹽水洗凈血液，用生理鹽水制成4%組織勻漿， 取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的大鼠肝勻漿懸浮液1 mL，加入不同濃度（0.050g/ml、0.0250g/ml、0.0125g/ml）的金黑子牌野生黑枸杞茶（由于黑枸杞茶浸泡后有顏色，為排除樣品本身顏色帶來(lái)的誤差，每個(gè)濃度都設(shè)立一個(gè)參照組，即：除將4 %的大鼠肝勻漿懸浮液改為等體積的生理鹽水外，其他均相同）溶液 0.2 mL，在 37 ℃溫育 1 h后，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù) 15%的 TCA（三氯乙酸） 1 mL終止反應(yīng)，再加入0.67%的 TBA（2- 硫代巴比妥酸）1 mL用沸水浴顯色 15 min，冷卻后于 3 000 r/min 下離心10 min，于波長(zhǎng) 532 nm 處測(cè)定上清液吸光度，以吸光度表示 MDA 含量的多少，吸光度越大，表明MDA 的含量越多。抑制率計(jì)算如下：抑制率=[（A0- A0對(duì)照）-（A-A對(duì)照）]/ （A0- A0對(duì)照）*100%。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1金黑子牌野生黑枸杞茶對(duì)H2O2誘導(dǎo)的紅細(xì)胞氧化溶血的作用，見(jiàn)表1。結(jié)果表明， 金黑子牌野生黑枸杞茶能夠抑制H2O2誘導(dǎo)的紅細(xì)胞氧化溶血， 并且隨著劑量的增加，抑制作用也增加，呈現(xiàn)了良好的量效關(guān)系。

3討論

黑枸杞具有一定的醫(yī)療保健功能。藏醫(yī)用于治療心熱病、心臟病、月經(jīng)不調(diào)、停經(jīng)等病癥。維吾爾醫(yī)生常用黑枸杞果實(shí)及根皮治療尿道結(jié)石、月經(jīng)不調(diào)、癬疥、齒齦出血等病癥。民間用作滋補(bǔ)強(qiáng)壯、明目及降壓。有關(guān)黑枸杞的開發(fā)早期多作為一種天然來(lái)源色素資源，現(xiàn)有的研究已經(jīng)對(duì)其中所含有的營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行了分析，并對(duì)其中原花青素、枸杞多糖等有效成分進(jìn)行了提取、分離和有效成分生理功能的分析。多項(xiàng)研究證實(shí)黑枸杞提取成分、黑枸杞色素具有良好的抗氧化活性；黑枸杞多糖具有明顯的抗疲勞作用[6、7]。這些結(jié)果為黑枸杞在保健、藥用方面的開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。但目前已經(jīng)上市的黑枸杞相關(guān)產(chǎn)品極少。

現(xiàn)代研究表明，過(guò)氧化損傷是引起多種疾病和老化的重要因素，過(guò)多的自由基會(huì)攻擊蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA 等生物大分子，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，干擾人體的正常代謝活動(dòng)，與許多疾病如腫瘤、炎癥、衰老的發(fā)生有密切的關(guān)系，因此生物體內(nèi)活性氧的生成與清除的平衡對(duì)生命過(guò)程的正常進(jìn)行是十分重要。開發(fā)天然抗氧化產(chǎn)品一直是保健食品、藥品研究 熱點(diǎn)。

紅細(xì)胞膜易受到氧化損傷而導(dǎo)致溶血現(xiàn)象的發(fā)生因此，紅細(xì)胞膜常被用作分析和篩選天然抗氧化劑的實(shí)驗(yàn)體系。丙二醛（MDA）是膜脂過(guò)氧化最重要的產(chǎn)物之一，因此測(cè)定肝組織勻漿中MDA可以反應(yīng)肝細(xì)胞膜過(guò)氧化損傷程度。本研究結(jié)果顯示，金黑子牌野生黑枸杞茶不僅對(duì)過(guò)氧化所致紅細(xì)胞溶血的抵抗作用，而且能明顯抑制肝勻中MDA的生成，均表明其在細(xì)胞水平上具有較好的抗氧化活性，可以有效的減弱體外的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。研究報(bào)道顯示，黑枸杞含有豐富的原花青素及其它黃酮類成分，原花青素是迄今為止人類所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)、最有效的自由基清除劑之一，一種良好的氧游離基清除劑和脂質(zhì)過(guò)氧化抑制劑，具有較強(qiáng)的自由基清除和抗氧化活性[3、8]，因此，金黑子牌野生黑枸杞茶的抗氧化活性與其富原花青素等有關(guān)。

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