HGPRT基因突變試驗評價川奇消食化積口服液的致突變性

【摘 要】目的：通過HGPRT基因突變試驗研究川奇消食化積口服液的致突變性。方法：在代謝活化及非代謝活化條件下，進行川奇消食化積口服液中國倉鼠肺細胞株（V79）HGPRT基因突變試驗，測定HGPRT基因位點突變頻率。結(jié)果：與陰性對照組比，受試物四個劑量組在代謝活化及非代謝活化條件下均未產(chǎn)生細胞毒性，HGPRT基因位點突變頻率未見明顯升高。結(jié)論：川奇消食化積口服液不引起小鼠中國倉鼠肺細胞株（V79）HGPRT基因位點突變。

【關(guān)鍵詞】川奇消食化積口服液；中國倉鼠肺細胞株；HGPRT基因突變

【中圖分類號】R917 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】1004—7484（2013）11—0064—02

哺乳動物細胞HGPRT基因突變試驗具有快速、靈敏、可靠、可檢測遺傳學(xué)改變等優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于檢測外來化合物引起的突變，包括堿基對突變、移碼突變和缺失等，從而評價保健食品引起突變的可能性[1]。本文通過HGPRT基因突變試驗，研究川奇消食化積口服液的致突變性，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 細胞株

中國倉鼠肺細胞株（V79）（中國科學(xué)院上海細胞生物研究所），培養(yǎng)液采用含10%胎牛血清和適量抗菌素的DMEM培養(yǎng)基，5%CO2、37oC 及飽和濕度下作常規(guī)培養(yǎng)。

1.2 試劑

川奇消食化積口服液（南昌川奇保健品有限公司），苯并芘（Dr. Ehrenstorfer GmbH），絲裂霉素C（Sigma），6-硫代鳥嘌呤（Sigma），DMEM培養(yǎng)基（Hyclone），胎牛血清（Gibco），S9（Moltox），Giemsa染液（Sigma）。

1.3 劑量設(shè)定

預(yù)試驗結(jié)果表明，受試物溶解性良好，對培養(yǎng)系統(tǒng)pH值沒有影響，原液按照1%體積接觸V79細胞，未產(chǎn)生明顯細胞毒性。故以原液作為最高濃度向下設(shè)置三個劑量組，即1/2原液、1/4原液、1/8原液，同時設(shè)陰性對照（溶劑對照）組及陽性對照組。

1.4 試驗方法

取已去除自發(fā)性突變且生長狀態(tài)良好的V79細胞，接種于平皿中（5×105個/皿）。培養(yǎng)24小時后，在非代謝活化條件（-S9）及代謝活化條件（+S9）兩種情況下進行試驗：受試物組按照1%體積比加入受試物；陰性對照組加入等體積的DMEM培養(yǎng)基；陽性對照組-S9條件下加入MMC （終濃度0.3 μg/ml）、+S9條件下加入BaP（終濃度1 μg/ml）。接觸3小時后，消化、離心、重懸，調(diào)整終密度至5×104/ml。

1.4.1細胞毒性測定

取密度為5×104/ml的細胞懸液，梯度稀釋至20個/ml，每個劑量組接種5個平皿中（每皿10 ml，200個細胞/皿），培養(yǎng)7天后，Giemsa染色，統(tǒng)計每皿集落數(shù)，計算相對集落形成率。

3 討論

我國對化合物（包括食品污染物、藥物、化妝品等）的常規(guī)遺傳毒性評價方法包括：①細菌試驗（Ames試驗）；②哺乳動物體細胞突變試驗、小鼠骨髓細胞微核試驗、染色體畸變試驗；③哺乳類生殖細胞突變試驗[2]。

細胞在正常培養(yǎng)條件下，對6-TG的毒性作用敏感，不能生存。在致癌物和/或致突變物的作用下，某些細胞X染色體上控制HGPRT的結(jié)構(gòu)基因發(fā)生突變，不能產(chǎn)生HGPRT，表現(xiàn)出對6-TG的抗性。這些突變細胞在含有6-TG的選擇性培養(yǎng)基中能夠繼續(xù)分裂并形成集落，根據(jù)突變集落形成數(shù)，可判定受試物的致突變性[1]。本文通過HGPRT基因突變試驗，研究川奇消食化積口服液的致突變性。結(jié)果表明，按1%體積比給藥，受試物原液、1/2原液、1/4原液、1/8原液四個劑量組均未產(chǎn)生細胞毒性，在活化狀態(tài)及非活化狀態(tài)下均不具有致突變性。

參考文獻：

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部.保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范[S].2003.

[2] ICH. S2 （R1）： Guidance on genotoxicity testing and data interpretation for phar- maceuticals intended for human use[S]. 2008.