survivin， VEGF和PCNA在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義

【摘 要】目的：探討survivin， VEGF和PCNA在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義。方法：應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)42例膠質(zhì)瘤和15例正常腦組織標(biāo)本中survivin， VEGF和PCNA蛋白的表達(dá)。結(jié)果：survivin， VEGF和PCNA蛋白在正常腦組織中均無(wú)表達(dá)，三者在腦膠質(zhì)瘤中的陽(yáng)性率分別為54.76%（23/42）、57.14%（24/42）、61.90%（26/42），腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)率均顯著高于正常腦組織（p<0.01）；膠質(zhì)瘤中三者表達(dá)呈直線趨勢(shì)，兩兩相關(guān)。結(jié)論：survivin， VEGF和PCNA蛋白表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)；在膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中可能存在VEGF， survivin和PCNA因子調(diào)控通路。聯(lián)合檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤中survivin， VEGF和PCNA蛋白表達(dá)，可能進(jìn)一步闡明膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，更有利于對(duì)腦膠質(zhì)瘤的惡性生物學(xué)行為進(jìn)行評(píng)價(jià)和判斷，還可能為膠質(zhì)瘤的手術(shù)治療、靶向治療及臨床評(píng)預(yù)后評(píng)價(jià)提供新思路。

【關(guān)鍵詞】膠質(zhì)瘤；survivin；VEGF；PCNA

【中圖分類號(hào)】R322.81 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1004—7484（2013）11—0012—01

1材料與方法

1.1組織標(biāo)本：標(biāo)本選自于2005年3月-20013年7月在唐河縣人民醫(yī)院神經(jīng)外科神經(jīng)外科住院手術(shù)治療，并經(jīng)病理診斷為膠質(zhì)瘤，病理科保存完好的石蠟包埋的標(biāo)本。共42例患者。

1.2實(shí)驗(yàn)方法：免疫組化的實(shí)驗(yàn)步驟按鏈霉菌抗生物素蛋白—過氧化物酶連接（SP）法說明書進(jìn)行。即用型兔抗人survivin、VEGF、PCNA、多克隆抗體（一抗）均購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。用已知陽(yáng)性的組織做陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照，以除外假陽(yáng)性結(jié)果。

1.3結(jié)果判定：survivin蛋白陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞漿或細(xì)胞核中出現(xiàn)淡黃色，棕黃色或棕褐色的顆粒，VEGF蛋白陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞漿中出現(xiàn)淡黃色，棕黃色或棕褐色的顆粒，PCNA定位于細(xì)胞核，腫瘤細(xì)胞呈棕褐色為陽(yáng)性。每例切片在400倍視野下隨機(jī)選取最高密度區(qū)域的5個(gè)不重復(fù)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞共1000個(gè)細(xì)胞，分別計(jì)數(shù)每個(gè)視野細(xì)胞總數(shù)（N）及陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù)（n），求出每例標(biāo)本的陽(yáng)性指數(shù)（LI）。根據(jù)腫瘤細(xì)胞數(shù)量，陽(yáng)性程度分級(jí)：survivin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤4%為陰性（-），5%-25%為弱陽(yáng)性（+），26%-50%為陽(yáng)性（++），≥50%為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）；VEGF陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤1%為陰性（-），1%-10%為弱陽(yáng)性（+），11%-30%為陽(yáng)性（++），≥31%為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）[1]。PCNA分級(jí)同survivin。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：研究資料采用Excel 2003建數(shù)據(jù)庫(kù)，結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，選擇精確模塊：兩組間陽(yáng)性率的比較采用卡方檢驗(yàn)；兩組間陽(yáng)性指數(shù)（LI）均值的比較采用t檢驗(yàn)；兩因素間的相關(guān)關(guān)系分析采用直線相關(guān)。取α<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，α<0.01差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果：

2.1 survivin蛋白中的表達(dá)：正常腦組織中survivin蛋白無(wú)表達(dá)；42例膠質(zhì)瘤組織中，23例表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為54.76%；腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)率高于正常腦組織（p<0.01）。在23例Ⅰ、Ⅱ級(jí)膠質(zhì)瘤標(biāo)本中陰性14例、弱陽(yáng)性4例、陽(yáng)性4例、強(qiáng)陽(yáng)性1例，陽(yáng)性率為39.13%（9/23），LI值為（9.52±14.37）%，在19例Ⅲ、Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤標(biāo)本中陰性5例、弱陽(yáng)性3例、陽(yáng)性7例、強(qiáng)陽(yáng)性4例，陽(yáng)性率為73.68%（14/19），LI值為（26.11±22.16）%，低度惡性（WHOⅠ+Ⅱ）組膠質(zhì)瘤陽(yáng)性指數(shù)均值低于高度惡性（WHOⅢ+Ⅳ）組。

2.2 VEGF蛋白的表達(dá)：正常腦組織中VEGF蛋白無(wú)表達(dá)；42例膠質(zhì)瘤組織中，24例表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為57.14%；在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)率高于正常腦組織（p<0.01）。在23例Ⅰ、Ⅱ級(jí)膠質(zhì)瘤標(biāo)本中陰性13例、弱陽(yáng)性5例、陽(yáng)性4例、強(qiáng)陽(yáng)性1例，陽(yáng)性率為43.48%（10/23），LI值為（5.87±9.14）%，在19例Ⅲ、Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤標(biāo)本中陰性5例、弱陽(yáng)性3例、陽(yáng)性5例、強(qiáng)陽(yáng)性6例，陽(yáng)性率為73.68%（14/19），LI值為（16.89±15.94）%，低度惡性（WHOⅠ+Ⅱ）組膠質(zhì)瘤的表達(dá)率和陽(yáng)性指數(shù)均值低于高度惡性（WHOⅢ+Ⅳ）組。

2.3 PCNA蛋白的表達(dá)：正常腦組織中PCNA蛋白無(wú)表達(dá)；42例膠質(zhì)瘤組織中，26例表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為61.90%；在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)率高于正常腦組織（p<0.01）。在23例Ⅰ、Ⅱ級(jí)膠質(zhì)瘤標(biāo)本中陰性12例、弱陽(yáng)性5例、陽(yáng)性4例、強(qiáng)陽(yáng)性2例，陽(yáng)性表達(dá)率為47.83%（11/23），LI值為（14.74±16.68）%，在19例Ⅲ、Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤標(biāo)本中陰性4例、弱陽(yáng)性3例、陽(yáng)性5例、強(qiáng)陽(yáng)性7例，陽(yáng)性率為78.95%（15/19），LI值為（35.21±24.51）%，低度惡性膠質(zhì)瘤組（WHOⅠ+Ⅱ）PCNA蛋白的表達(dá)率和陽(yáng)性指數(shù)均值低于高度惡性膠質(zhì)瘤組（WHOⅢ+Ⅳ）。

2.7 分析三者之間的兩兩相關(guān)性：繪制三維散點(diǎn)圖顯示三者之間的兩兩相關(guān)性：survivin與VEGF蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.875，p<0.01）；survivin與PCNA蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.826，p<0.01）；VEGF與PCNA蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.858，p<0.01）。

3 討論

本組實(shí)驗(yàn)資料中survivin， VEGF和PCNA蛋白表達(dá)之間呈顯著正相關(guān)關(guān)系，提示三者的蛋白表達(dá)具有一致性以及三者在膠質(zhì)瘤的發(fā)生中起著協(xié)調(diào)作用，它們共同參與了膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展，共同為腫瘤的浸潤(rùn)生長(zhǎng)創(chuàng)造有利的生存內(nèi)環(huán)境；通過以上的分析，我們還認(rèn)為：在膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中可能存在VEGF， survivin和PCNA因子調(diào)控通路，在某種始動(dòng)因素的作用下，細(xì)胞出現(xiàn)惡變傾向，隨著細(xì)胞的分化增殖，原有血管不足以滿足腫瘤細(xì)胞的需要，局部處于相對(duì)缺血缺氧狀態(tài)，誘導(dǎo)VEGF表達(dá)，VEGF可上調(diào)survivin的表達(dá)，抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，促進(jìn)其增殖，從而促進(jìn)新生血管的生成，利于不斷地?cái)z取氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并排除代謝產(chǎn)物；同時(shí)survivin蛋白通過競(jìng)爭(zhēng)性地與周期蛋白（Cyclin）和周期蛋白依賴性蛋白激酶（CDK）的復(fù)合物（主要為Cyclin D—CDK4）結(jié)合，解除了對(duì)PCNA的抑制，通過增強(qiáng)DNA多聚酶6的活性，參與DNA的復(fù)制、合成、細(xì)胞的增殖分裂，即細(xì)胞分化增殖，將會(huì)繼續(xù)導(dǎo)致局部處于相對(duì)缺血缺氧和上述循環(huán)。

聯(lián)合檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤中survivin， VEGF和PCNA蛋白表達(dá)，可能進(jìn)一步闡明膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，更有利于對(duì)人腦膠質(zhì)瘤的惡性生物學(xué)行為進(jìn)行評(píng)價(jià)和判斷，還可能為膠質(zhì)瘤的手術(shù)治療、臨床評(píng)預(yù)后價(jià)及靶向治療提供新的思路。

參考文獻(xiàn)：

[1] 許良中，楊文濤。免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)[J]。中國(guó)癌癥雜志，1996，6：229-231。