PCNA在卵巢癌患者腫瘤組織中的表達(dá)及意義

【摘 要】目的：通過(guò)檢測(cè)PCNA在卵巢良性腫瘤及卵巢癌的表達(dá)水平，分析其與卵巢癌各項(xiàng)臨床病理指標(biāo)的聯(lián)系，研究PCNA在卵巢癌發(fā)病過(guò)程中的作用，探討其在診斷治療卵巢癌的臨床意義。方法：采用免疫熒光法檢測(cè)PCNA在卵巢癌及卵巢良性腫瘤中的表達(dá)。結(jié)果：（1）卵巢癌組PCNA表達(dá)水平明顯高于卵巢良性腫瘤組，P<0.01，差異有極顯著性。（2） PCNA表達(dá)與卵巢癌患者的臨床分期，組織學(xué)分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，P<0.05。結(jié)論：PCNA對(duì)卵巢癌敏感。

【關(guān)鍵詞】PCNA；卵巢癌患者；腫瘤組織；表達(dá)及意義

【中圖分類號(hào)】R318 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1004—7484（2013）11—0007—02

卵巢腫瘤是女性生殖器常見(jiàn)腫瘤之一，其死亡率占居?jì)D科惡性腫瘤的首位[1.2]。因卵巢位于腹腔內(nèi)， 2/3以上的病人已經(jīng)是III期以上的進(jìn)行期癌。因此，發(fā)現(xiàn)新的腫瘤標(biāo)記物，早期有意義的檢測(cè)卵巢腫瘤，及時(shí)阻斷腫瘤轉(zhuǎn)移，同時(shí)又可以準(zhǔn)確判斷預(yù)后是卵巢癌防治的重要研究課題。最近幾年，國(guó)內(nèi)外研究者新發(fā)現(xiàn)PCNA mRNA一般僅積聚在增殖細(xì)胞中，在靜止細(xì)胞中則較缺乏，可很好地反映細(xì)胞動(dòng)力學(xué)的變化，代表細(xì)胞增殖的潛能。因此檢測(cè)PCNA可以反映癌細(xì)胞DNA的合成情況，為癌細(xì)胞增殖活性提供客觀指標(biāo)。本研究根據(jù)現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)條件利用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞增殖活性相關(guān)的指標(biāo)PCNA在卵巢癌中的表達(dá)，旨在探討PCNA的表達(dá)與卵巢癌盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、組織學(xué)分級(jí)等臨床病理特征間的相互關(guān)系，期望為卵巢癌的診斷、治療和預(yù)后提供有效的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源 66例卵巢癌標(biāo)本取自齊魯醫(yī)院婦科2008年7月一2009年7月手術(shù)切除的存檔組織蠟塊，每個(gè)蠟塊進(jìn)行 4μm 厚連續(xù)切片做免疫熒光。對(duì)照組為我院同期因良性病變手術(shù)切除的良性卵巢組織存檔組織蠟塊20例。按臨床分期：I-II期32例，III-IV期34例；按病理分級(jí)：G1.18例，G2 G3 48例。同期住院的卵巢良性腫瘤患者20例為卵巢良性腫瘤組。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療及激素治療。所有病例均有完整、詳細(xì)的臨床病理資料。

1.2試劑和方法：PCNA兔抗人單克隆抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。本實(shí)驗(yàn)采用免疫熒光組織化學(xué)方法，以PBS代替一抗作空白對(duì)照。

1.3結(jié)果判定：PCNA以胞核中出現(xiàn)紅色顆粒為陽(yáng)性，免疫組化根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例及熒光強(qiáng)度分別記分O～3分。（1） 熒光強(qiáng)度：無(wú)熒光或極弱的熒光為0分，熒光較弱但清楚可見(jiàn)為1分，熒光明亮為2分，熒光閃亮為3分。（2）陽(yáng)性細(xì)胞百分比：高倍鏡（×400）下隨機(jī)選取10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。取平均值作為陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為O分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)5%～25%為1分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)26%～50%為2分，>50%為3分。（3）根據(jù)這兩項(xiàng)指標(biāo)的計(jì)分和分為4級(jí)，即O～1分為陰性（一），2分為弱陽(yáng)性（+），3～4分為陽(yáng)性（++），5～6分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。進(jìn)行卡方檢驗(yàn)等統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PCNA在良性、惡性卵巢腫瘤的表達(dá)總陽(yáng)性率分別為15%、65.2% ，有顯著性差異（P<0.01），見(jiàn)表1。

2.2 66例卵巢癌中PCNA的表達(dá)與臨床分期、組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系表明，PCNA 表達(dá)總陽(yáng)性率與臨床分期無(wú)關(guān)（P=0.435），但陽(yáng)性+強(qiáng)陽(yáng)性率在臨床Ⅰ、Ⅱ期明顯低于Ⅲ、Ⅳ期（P<0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的PCNA 的總陽(yáng)性率及陽(yáng)性+強(qiáng)陽(yáng)性率均較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的高（ P<0.05），見(jiàn)表2。

3 討論

卵巢腫瘤是女性生殖器常見(jiàn)腫瘤，由于缺少有效的早期診斷方法，卵巢惡性腫瘤5年存活率至今仍較低，PCNA為與細(xì)胞增殖活性相關(guān)的蛋白；近幾年，分子腫瘤學(xué)研究表明，細(xì)胞周期調(diào)節(jié)失控在惡性腫瘤發(fā)生中起著關(guān)鍵作用。PCNA隨細(xì)胞增殖周期的不同而變化，G1后期開(kāi)始增加，S期達(dá)高峰，G2、M期又降低，其變化與DNA合成一致，這說(shuō)明PCNA參與DNA合成，而DNA的合成又是腫瘤細(xì)胞分裂增殖的必要條件。因此，被視為能較可靠地反映細(xì)胞群體增殖活性的客觀指標(biāo)。國(guó)外學(xué)者對(duì)全身不同部位的癌腫進(jìn)行PCNA免疫組化研究，多數(shù)認(rèn)為PCNA與腫瘤組織分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)或臟器轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后有關(guān)[3，4]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果同時(shí)顯示：PCNA的表達(dá)總陽(yáng)性率與卵巢癌的臨床分期、組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均相關(guān)，即PCNA表達(dá)在臨床分期Ⅰ-Ⅱ期、高分化、無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移組明顯低于臨床分期Ⅲ-Ⅳ期、低分化、有淋巴轉(zhuǎn)移組，提示PCNA表達(dá)與卵巢癌的進(jìn)展及癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移有關(guān)，這一結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致[5，6]。

因此，測(cè)定PCNA表達(dá)對(duì)鑒別卵巢腫瘤的良惡性、估計(jì)卵巢癌預(yù)后有一定的實(shí)用價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

[1] 曹澤毅主編.中華婦產(chǎn)科學(xué)第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：2154.

[2] 連利娟主編.林巧稚婦科腫瘤學(xué).人民衛(wèi)生出版社，2006：512.

[3] Kawai T ，Suzuki M ，Kono S ，et al. Proliferating cell nuclear antigen and ki - 67 in lung carcinoma ，correlation with DNA flow cyctometric analysis. Cancer 1994 ；74 （9） ：2468.

[4] NgIo ，Lai EC ，F(xiàn)an ST ，et al. Prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen expression in hepatocellular carcinoma.Cancer 1994 ；73

[5] Wong CD ， Shi ST ， Zhou Q ， et al. Changes in P53 and cyclinD protein levels and cell proliferation in different stages of human esophageal and gastric - cardia car-

cinogenesis. Int J Cancer 1994 ；59 ：514～519.

[6] 朱根海，寧國(guó)媛，梁茱等. 卵巢癌組織nm23、PCNA 的表達(dá)及意義. 實(shí)用腫瘤雜志1999 ；14 （2） ：92.