黃綠蜜環(huán)菌培養(yǎng)基優(yōu)化及人工培養(yǎng)條件研究

摘 要：以黃綠蜜環(huán)菌為生物材料進行人工馴化研究，結(jié)果顯示，該菌適宜碳源為蔗糖，氮源為蛋白胨，適宜的碳氮比為10∶1，最佳礦質(zhì)營養(yǎng)元素是硫酸鎂，最適pH為6.5，在暗處培養(yǎng)生長最佳。此研究結(jié)果為黃綠蜜環(huán)菌的人工栽培奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：黃綠蜜環(huán)菌；培養(yǎng)基優(yōu)化；人工培養(yǎng)條件

中圖分類號 Q93-335 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2013）20-33-03

黃綠蜜環(huán)菌〔Armillaria luteovirens（Alb.et Schw. Fr.） Sing〕別名藥用黃蘑菇、金蘑菇、黃環(huán)菌、草原白蘑菇等，屬于擔(dān)子菌亞門、層菌綱、傘菌目、白蘑科、蜜環(huán)菌屬[1]。黃綠蜜環(huán)菌是一種質(zhì)地優(yōu)良的食藥用真菌，營養(yǎng)豐富、味道鮮美，富含蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、氨基酸和多種維生素。黃綠蜜環(huán)菌具有防癌之功效，抑制腫瘤生長；還有抗衰老、護膚美容、延年益壽等功效[2]。目前對該菌的研究甚少，本試驗旨在對黃綠蜜環(huán)菌培養(yǎng)基進行篩選優(yōu)化，確立人工培養(yǎng)條件，為進一步開發(fā)利用黃綠蜜環(huán)菌的食用、藥用價值奠定技術(shù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗菌株 黃綠蜜環(huán)菌菌種，購自中國農(nóng)業(yè)菌種儲藏中心。

1.2 試驗方法

1.2.1 碳源培養(yǎng)基篩選 用葡萄糖、可溶性淀粉、蔗糖、麥芽糖作為4種碳源各20g，分別加入無碳基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，另設(shè)一對照不加入碳源，重復(fù)3次共15個處理。在28℃下，暗培養(yǎng)20d，然后測量菌落直徑并做好記錄，選出黃綠蜜環(huán)菌生長的最適碳源。對照培養(yǎng)基：甘氨酸2g、磷酸二氫鉀1g、硫酸鎂0.5g、瓊脂20g，定容至1 000mL。

1.2.2 氮源培養(yǎng)基篩選 以甘氨酸、硝酸鉀、硫酸銨、尿素、蛋白胨等為5種氮源，分別加入無氮基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，另設(shè)一對照不加入任何氮源，重復(fù)3次共18個處理。在28℃下，置于暗處培養(yǎng)20d，然后測量菌落的直徑并做好記錄，選出黃綠蜜環(huán)菌生長的最適氮源。對照培養(yǎng)基：葡萄糖20g、磷酸二氫鉀1g、硫酸鎂0.5g、瓊脂20g，定容至1 000mL。

1.2.3 培養(yǎng)基碳氮比篩選 以蔗糖作為碳源，甘氨酸為氮源，配制碳氮比分別10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1等5種培養(yǎng)基，用接種針挑取大小一致的菌絲接于培養(yǎng)基中，重復(fù)3次共15個處理。在28℃下，暗培養(yǎng)20d，然后測量菌落的直徑并做好記錄，選出黃綠蜜環(huán)菌生長的最適碳氮比。

1.2.4 培養(yǎng)基中礦質(zhì)營養(yǎng)元素篩選 在PDA培養(yǎng)基中，分別加入硫酸鎂、硫酸錳、硫酸亞鐵等，制成含不同礦質(zhì)營養(yǎng)元素的培養(yǎng)基，接菌絲于培養(yǎng)基中。重復(fù)3次共9個處理。在28℃下，暗培養(yǎng)20d，然后測量菌落直徑并做好記錄，選出黃綠蜜環(huán)菌生長所需的礦質(zhì)營養(yǎng)元素。

1.2.5 菌絲生長對光照的選擇 用接種針將菌絲接種于培養(yǎng)皿的PDA培養(yǎng)基上，分別置于0lx、500lx、1 000lx、1 500lx、

2 000lx光照強度下處理，重復(fù)3次共15個處理。在28℃下培養(yǎng)20d，然后測量菌落直徑并做好記錄，探尋黃綠蜜環(huán)菌生長最適的光照條件。

1.2.6 菌絲生長對pH的選擇 配制PDA培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值分別為5.5、6.5、7.5、8.5，用接種針挑取菌絲接種于培養(yǎng)基上，重復(fù)3次共12個處理。在28℃下，暗培養(yǎng)20d，然后測量一次菌落直徑并做好記錄，選出黃綠蜜環(huán)菌生長最適的pH值范圍。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌絲生長對碳源的選擇 從表1可以看出，試驗組與對照組均能促進菌絲生長。添加蔗糖的培養(yǎng)基，黃綠蜜環(huán)菌生長最好，其次是麥芽糖，黃綠蜜環(huán)菌在淀粉和葡萄糖的培養(yǎng)基上也能生長，但生長受到抑制。在對照培養(yǎng)基中雖然沒有人為地加入碳源，仍可以生長，且生長較葡萄糖與淀粉好。

2.2 菌絲生長對氮源的選擇 由表2表明，以蛋白胨作為氮源，黃綠蜜環(huán)菌菌絲長勢最佳，菌絲在無氮培養(yǎng)基上生長勢稍弱，氮源為尿素、硫氨酸、硝酸鉀、甘氨酸等則菌絲生長不良。

2.3 菌絲生長對碳氮比的選擇 由表3表明，碳氮比在10∶1至50∶1均可生長。當(dāng)C/N為10∶1時黃綠蜜環(huán)菌菌絲生長最快，隨著C/N的增大，菌絲生長速度減慢，菌絲的生長勢也逐漸減弱；當(dāng)C/N為30∶1時，菌絲生長速度最慢，且菌落菌絲稀疏、生長勢弱；當(dāng)C/N大于30∶1時，菌絲生長速度隨著C/N的增大而逐漸增強，生長勢也跟著增強，C/N為40∶1時與C/N為50∶1時生長勢相同。

2.4 菌絲生長對礦質(zhì)營養(yǎng)元素的選擇 從表4可以看出，黃綠蜜環(huán)菌在有各種礦質(zhì)營養(yǎng)元素的條件下均可以生長，其中，以硫酸鎂為礦質(zhì)營養(yǎng)元素的生長最佳，其次是硫酸亞鐵，最后是硫酸錳，菌絲外觀也變得稀疏而且菌絲的顏色也會變淺。因此在加硫酸鎂的培養(yǎng)基上生長最佳。

2.5 菌絲生長對光照的選擇 從表5可以看出，黃綠蜜環(huán)菌在弱光與暗光照條件下均可以生長，在無光條件下生長最佳，在2 000 lx與1 500lx光照強度下無法生長。隨著光照強度的增加菌絲生長會受到抑制，生長速度變慢，菌絲也變得稀疏，菌絲的顏色未見變化。

2.6 菌絲生長對pH的選擇 由表6表明，4種不同pH值對菌絲的生長勢有明顯的影響，以pH為6.5（屬弱酸性）時生長最好，且較濃密。隨著酸度的升高與降低，菌絲生長都會受到相應(yīng)的抑制。

3 討論

對于黃綠蜜環(huán)菌菌絲培養(yǎng)試驗的報道不多。柳煥章等[3]對菌絲馴化培養(yǎng)進行了初步研究，菌絲在斜面培養(yǎng)基中生長溫度范圍為10～35℃，適宜溫度25～30℃；pH值范圍（滅菌前）為4～10，適宜pH值6.0～7.0。刁治民等[4]采用液體靜置培養(yǎng)方法，發(fā)現(xiàn)黃綠蜜環(huán)菌菌絲對有機氮的利用強于無機氮，在有機氮源中對復(fù)合氮源（如酵母粉、蛋白胨）的利用比單一氮源（尿素）好，在無機氮源中對氨態(tài)氮（如氯化銨 硫酸銨）的利用強于硝態(tài)氮。筆者的部分試驗研究與以上兩位學(xué)者的研究相一致。在試驗中也存在菌絲生長發(fā)育緩慢，菌株培養(yǎng)需較長時間等問題，還應(yīng)該更進一步深入研究黃綠蜜環(huán)菌的生理特性，為黃綠蜜環(huán)菌的人工馴化栽培奠定基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1]刁治民，魏克家，吳寶鋒，等.食用菌學(xué)[M].西寧：青海人民出版社，2006.

[2]白世俊，包錦淵.黃綠蜜環(huán)菌有效成分的定性分析[J].北方園藝，2012，21（3）：161-163.

[3]柳煥章，王賀祥，劉慶紅，等.黃綠蜜環(huán)菌菌絲體培養(yǎng)條件初探[J].食用菌，2007，2（4）：16-19.

[4]刁治民.黃綠蜜環(huán)菌菌絲營養(yǎng)生理特性的初步研究[J].微生物學(xué)雜志，1997，1（1）：14-17.

（責(zé)編：陶學(xué)軍）