摘要:金正日花以觀花為主,嬌嫩艷麗、姿態(tài)優(yōu)美,枝葉翠綠,株型豐滿,被譽(yù)為“世界上最美麗的花”。通過(guò)對(duì)外植體的建立、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)、叢生芽的繼代增殖培養(yǎng)、試管苗生根培養(yǎng)、馴化移栽、小苗的后期管理等幾個(gè)有效的措施便得到大批量?jī)?yōu)質(zhì)的植株。
關(guān)鍵詞:金正日花;葉片組培
中圖分類號(hào):S6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼: A 文章編號(hào): 1674-0432(2013)-20-14-1
金正日花為多年生球根秋海棠的一種,是日本園藝學(xué)家Kamo Mototeru經(jīng)多年雜交選育而成。該花因培育者十分祟敬朝鮮領(lǐng)導(dǎo)人金正日而得名。金正日花以觀花為主,嬌嫩艷麗、姿態(tài)優(yōu)美,枝葉翠綠,株型豐滿,花大如茶花,該花株高約40厘米,莖稈直立粗壯,葉片肥厚、心形,地下塊莖為不規(guī)則扁球形,花朵高度重瓣,花徑可達(dá)10厘米以上,花期長(zhǎng)達(dá)120天。由于金正日花的種子非常細(xì)小,并需人工授粉才能獲得,且其莖葉多汁,扦插容易腐爛,常規(guī)繁殖難度很大,而采用生物技術(shù)手段恰好能夠克服這些缺點(diǎn),生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)組培苗。
1 外植體的建立
“金正日”花的組織培養(yǎng)以植株上的嫩葉作為外植體效果最好。在去外植體前10天左右,把植株放置溫室內(nèi),防止往葉片上噴水。接種前選取剛長(zhǎng)出的直徑約2厘米的健壯無(wú)病的嫩葉。先用細(xì)毛刷輕輕刷去表面塵土,并于流水下沖洗干凈,再放入三角瓶?jī)?nèi)加少量多菌靈,放入搖床震蕩清洗15分鐘后,用自來(lái)水沖洗30分鐘備用。在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室超凈工作臺(tái)下,用無(wú)菌水沖洗一次,接著用0.1%升汞溶液消毒4~8分鐘,再用無(wú)菌水沖洗4次。然后將葉片分割成1平方厘米左右的小塊,接種于培養(yǎng)基中,每瓶培養(yǎng)基接種一塊葉片。
2 愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)
外植體培養(yǎng)5~7天后,將無(wú)菌的外植體轉(zhuǎn)接到以下4種培養(yǎng)基:
MS+(6BA 0.5 mg/L +NAA'0.1 mg/L)+糖30g/L+瓊脂9g/L
MS+(6BA 0.5 mg/L +2,4-D1mg/L)+糖30g/L+瓊脂9g/L
MS+(6BA 1 mg/L +NAA'0.5 mg/L)+糖30g/L+瓊脂9g/L
MS+(6BA 1 mg/L +2,4-D1mg/L)+糖30g/L+瓊脂9g/L
光照保持在1200LX(勒克斯)每天光照8~12小時(shí),溫度控制在20℃~25℃。經(jīng)過(guò)21~28天培養(yǎng)后,外置體首先形成愈傷組織。其中MS+(6BA 1 mg/L +NAA'0.5 mg/L)+糖30g/L+瓊脂9g/L的培養(yǎng)基,有利于提高愈傷組織的分化率。
3 叢生芽的繼代增殖培養(yǎng)
外植體形成愈傷組織,隨后分化出叢生芽和小葉。將叢生芽分割后,分成數(shù)叢轉(zhuǎn)移到MS+6BA0.4 mg/L+ NAA'0.1 mg/L+糖30g/L +瓊脂9g/L、MS+6BA0.6 mg/L+ NAA'0.1 mg/L+糖30g/L +瓊脂9g/L、MS+6BA0.8 mg/L+ NAA'0.1 mg/L+糖30g/L +瓊脂9g/L、MS+6BA1.0 mg/L+ NAA'0.1 mg/L+糖30g/L +瓊脂9g/L的培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng),繼代培養(yǎng)的光照、溫度同誘導(dǎo)階段相同,如果光照過(guò)強(qiáng),不利于叢芽的伸長(zhǎng)。以MS+6BA0.8 mg/L+ NAA'0.1 mg/L+糖30g/L+瓊脂9g/L的培養(yǎng)基,增殖最多,繁殖系數(shù)達(dá)7.6倍以上。
4 試管苗的生根培養(yǎng)
繼代培養(yǎng)30天左右,能誘導(dǎo)生根苗占60%左右,這時(shí)候可將叢生芽接入:1/2MS+IAA0.3mg/L+糖20g/L+瓊脂9g/L 、1/2MS+IAA0.5mg/L+糖20g/L+瓊脂9g/L、1/2MS+IAA0.7mg/L+糖20g/L+瓊脂9g/L、1/2MS+IAA0.9mg/L+糖20g/L+瓊脂9g/L的生根培養(yǎng)基中,其中,1/2MS+IAA0.5mg/L+糖20g/L+瓊脂9g/L的培養(yǎng)基生根最好,生根率達(dá)90%以上。采取誘導(dǎo)生根和繼代培養(yǎng)同時(shí)進(jìn)行的方法。在生根過(guò)程中,光照需要加強(qiáng),強(qiáng)度為1500LX(勒克斯)左右,每天10~12小時(shí)。
5 試管苗的生根馴化移栽
生根移栽問(wèn)題一直是植物繁殖中的難點(diǎn),我們的試管苗高度達(dá)2~3厘米,并且長(zhǎng)出3~4條1厘米左右的新根時(shí),將生根試管苗放在室外光線明亮的地方,閉瓶煉苗2~3天,再逐漸開(kāi)始瓶煉苗2~3天。讓植株經(jīng)受試管外環(huán)境的鍛煉后取出試管苗,洗凈基部粘附的培養(yǎng)基,移植于配置好的營(yíng)養(yǎng)土中,遮陰保濕,空氣溫度保持在60%~70%,當(dāng)植株萌發(fā)新根后讓其逐漸見(jiàn)光,并降低溫度,直至暴露在外界。
6 小苗的后期管理
小苗移栽后,要保持一定的溫度和濕度,這點(diǎn)是小苗能不能成活的關(guān)鍵?!敖鹫铡被ㄉL(zhǎng)適宜的溫度為18℃~25℃,超過(guò)30℃莖葉萎縮,35℃以上,植株枯死,若低于15℃就處于休眠狀態(tài)??諝鉂穸瓤刂圃?0%~60%,濕度太低容易引起卷葉,不宜成活。濕度太高,容易腐爛?!敖鹫铡被ǖ厣喜糠指缓海瑢?duì)水分要求不高,澆水時(shí)用噴壺噴灑,枝能保持濕潤(rùn),營(yíng)養(yǎng)土中又不積水。澆水時(shí)間,春季、夏季一般以早晚為好,冬季以中午為佳。
參考文獻(xiàn)
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