纖維支氣管鏡檢測(cè)EGFR在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義

doi：10.3969/j.issn.1007-614x.2013.19.68

現(xiàn)有的研究表明，表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）相關(guān)信號(hào)通路在肺癌的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。EGFR酪氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKIS）是目前針對(duì)EGFR治療非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的重要分子靶向藥物。EGFR的不同存在狀態(tài)與TKIS的療效相關(guān)。EGFR在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)，免疫組化法是一種有效的檢測(cè)NSCLC標(biāo)本中蛋白質(zhì)水平的方法[1]，但多數(shù)集中在NSCLC手術(shù)切除標(biāo)本的研究上[2]，對(duì)于纖維支氣管鏡（簡(jiǎn)稱(chēng)纖支鏡）活檢小標(biāo)本的研究較少。在此我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)對(duì)纖支鏡NSCLC活檢標(biāo)本的EGFR基因進(jìn)行檢測(cè)，探討EGFR在非小細(xì)胞肺癌患者中的表達(dá)、檢測(cè)及臨床意義。

資料與方法

一般資料：2009年10月～2012年10月160例經(jīng)病理診斷為NSCLC的活檢標(biāo)本，其中男101例，女59例，年齡31～83歲，中位數(shù)62歲；有吸煙史112例；組織學(xué)類(lèi)型：腺癌104例，鱗癌44例，腺鱗癌5例，大細(xì)胞癌7例。所檢患者均為初次診斷。另外收集10例正常肺組織活檢標(biāo)本和10例癌前病變肺組織活檢標(biāo)本進(jìn)行對(duì)照。

試劑方法：石蠟包埋組織HE染色。免疫組織化學(xué)采用EnVisim二步法，抗體EGFR。CK5/6（標(biāo)記鱗癌），CK8（標(biāo)記腺癌），所有一抗均為單克隆抗體，均為工作液。參照試劑盒說(shuō)明操作，關(guān)鍵步驟如下：切片常規(guī)脫蠟至水，高壓修復(fù)抗原，3%H2O2孵育10分鐘，滴加一抗4℃過(guò)液，滴加二抗37℃孵育20分鐘。DAB染色，蘇木精對(duì)比染色，透明封固，以PBC代替做空白對(duì)照。結(jié)果判定：EGFR表達(dá)主要定位于胞漿/胞核是棕黃色或棕褐色顆粒狀。

采用參考文獻(xiàn)的方法進(jìn)行打分[1]，0分無(wú)色，1分淺著色，2分深著色，3分棕褐色；按400視野下陰性細(xì)胞所占百分比打分：0陰性，1分陽(yáng)性細(xì)胞≤25%，2分26%～50%，3分51%～75%，4分≥75%。染色結(jié)果分1級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為著色強(qiáng)度乘以陽(yáng)性細(xì)胞比例，0分陰性（-），1～3分弱陽(yáng)性（+），4～6分中度陽(yáng)性（++），8～12分強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。采用χ2檢驗(yàn)分析免疫組織化學(xué)結(jié)果；以P<0.05為具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P>0.05差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

160例NSCLC患者中，EGFR陽(yáng)性66例（41.2%）。其中男45例（44.6%），女21例（35.6%）；腺癌55例（52.8%），鱗癌6例（13.6%）。腺鱗癌2例（40%），大細(xì)胞肺癌3例（42.8%）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，腺癌鱗癌兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），大細(xì)胞癌、腺鱗癌與腺癌相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

160例中有120例獲得手術(shù)切除標(biāo)本，將纖支鏡活檢標(biāo)本和手術(shù)切除標(biāo)本EGFR基因檢測(cè)結(jié)果對(duì)比，活檢標(biāo)本陽(yáng)性率低于手術(shù)標(biāo)本，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

10例正常肺組織中只有1例EGFR表達(dá)弱陽(yáng)性。10例癌前病變肺組織中2例EGFR弱陽(yáng)性表達(dá)。由此可見(jiàn)肺癌組織中EGFR的表達(dá)明顯高于正常肺組織，而且EGFR在正常肺組織、癌前病變和肺癌組織中的表達(dá)是逐級(jí)升高的[3]。

討 論

結(jié)果顯示，EGFR基因檢測(cè)肺NSCLC，腺癌陽(yáng)性率高于鱗癌，與大細(xì)胞肺癌差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；腺癌中男性與女性患者EGFR基因陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；EGFR陽(yáng)性率與患者性別年齡無(wú)關(guān)，同相關(guān)資料一致[4，5]。160例中有135例獲得手術(shù)切除標(biāo)本，將其EGFR基因檢測(cè)結(jié)果與纖支鏡活檢結(jié)果相比較，陽(yáng)性率稍高但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此可見(jiàn)EGFR基因檢測(cè)可行性好，對(duì)臨床進(jìn)一步行手術(shù)切除、放化療或者靶向治療提供很好的參考價(jià)值。

近年來(lái)肺癌的發(fā)病率和死亡率迅速上升，躍居腫瘤第1位。雖然治療技術(shù)有了很大提高，但5年生存率沒(méi)有明顯改善[6]。因此預(yù)防并控制遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是肺癌治療中亟待解決的問(wèn)題。我們應(yīng)用纖支鏡技術(shù)檢測(cè)EGFR基因不僅可行，而且實(shí)現(xiàn)了早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療；方法安全、直觀(guān)是中小醫(yī)院可普及的一項(xiàng)檢測(cè)方法；并且具有創(chuàng)傷小、痛苦少、費(fèi)用低等人性化優(yōu)勢(shì)，具有重要現(xiàn)實(shí)意義。

參考文獻(xiàn)

1 李榕，韓寶惠，等.EGFR檢測(cè)在肺癌中的臨床意義[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2004，9（4）：420-425.

2 梁智勇，曾暄，張靜，等.非小細(xì)胞肺癌290例表皮生長(zhǎng)因子受體基因突變和拷貝數(shù)的檢測(cè)分析[J].中華病理學(xué)雜志，2008，37（10）：654-659.

3 Eberhand DA，Giaccone G，Johnson BE，et al.Biomarkers of response to epidermal growth factor receptor inhibitors in Non-Small-Cell Lung Cancer Working Group：standardardization for use in the clinical trial setting.J Clin Oncol，2008，26（6）：983-994.

4 林云恩，何莎，等.纖維支氣管鏡非小細(xì)胞肺癌活檢標(biāo)本的表皮生長(zhǎng)因子受體基因檢測(cè)[J].中華病理學(xué)雜志，2011，40（2）：529-5807.

5 曾暄，武莎斐，等.非小細(xì)胞肺癌EGFR和HERI基因狀態(tài)及相關(guān)性[J].中華病理學(xué)雜志，2006，35（7）：398-402.

6 Parkin DM，Bray FI，Devesa SS.Cancer burden in the year 2000.The global picture[J].Eur J Canceren，2001，37（8）：4-66.