黃芩苷提取精制工藝研究

廖矛川，羅會(huì)畏，李 竣，高瑞希，鄒大江，黃先菊

(中南民族大學(xué)藥學(xué)院，武漢 430074)

黃芩為唇形科植物ScutellariabaicalensisGeorg的干燥根[1]，其性寒味苦，具有清熱燥濕，瀉火解毒功效，主要產(chǎn)于我國(guó)東北、河北、山西、河南、陜西、內(nèi)蒙古等地.其成分黃芩苷具有抑菌抗炎、清熱解毒、螯合金屬離子、鎮(zhèn)靜、降壓、保護(hù)神經(jīng)、抗變態(tài)反應(yīng)和清除超聲陰離子等藥理作用[2]，是黃芩的主要活性成分之一，也是黃芩和黃芪制劑的主要質(zhì)量控制指標(biāo)成分.

黃芩中黃芩苷的提取工藝，除傳統(tǒng)水提取酸沉淀法外，還有以醇和三正辛基氧化膦、堿水、磷酸三丁酯等可回收的有機(jī)溶劑為提取溶劑[3-5]的優(yōu)勢(shì)提取工藝.常用的精制方法有沉淀分離、高速逆流分離、大孔樹脂分離[6,7]等.本文采用水提法、醇提法、堿水提法，并統(tǒng)一比較樹脂法和酸沉淀法這2種工業(yè)可選用精制黃芩苷方法，確定黃芩中黃芩苷提取和精制的最佳工藝路線.

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

黃芩飲片(廣州南北行中藥飲片有限公司，產(chǎn)地黑龍江，經(jīng)中山大學(xué)張華林博士鑒定為正品黃芩)，D101型大孔樹脂(安徽三星樹脂科技有限公司)，黃芩苷對(duì)照品(110715-201016，中國(guó)藥品生物制品檢定所)，甲醇(色譜純，美國(guó)TEDIA天地試劑公司)，其他試劑均為分析純.

高效液相色譜儀(Agilent 1200series)，電子天平(CP214型，奧豪斯儀器有限公司)，低速離心機(jī)(TDZ5型，長(zhǎng)沙平凡有限公司)，真空干燥箱(DZF-6050型，上海精宏有限公司).

1.2 黃芩提取溶劑的比較

稱取50g的黃芩飲片，分別用水、60％乙醇、NaOH堿水(pH=10)回流提取3次，提取時(shí)間分別為2，2，1.5 h，每次提取溶劑量為12倍藥材量(g / mL).提取后用2層紗布過濾，2500 r/min離心，取上清液干燥得粗提粉末.3種溶劑提取平行試驗(yàn)3次，按下式計(jì)算出膏率和黃芩苷得率.

出膏率=干浸膏重量/提取用生藥重量×100％ ，

黃芩苷得率=黃芩苷重量/提取用生藥重量×100％ .

1.3 黃芩苷精制的比較

1.3.1 酸沉精制實(shí)驗(yàn)

分別精密稱取2.1中3種提取物干燥粉末各5.0 g，加入150mL蒸餾水40℃超聲溶解，用稀HCl調(diào)至pH=2.0，80℃下保溫30 min，靜置過夜，以2500 r/min離心沉淀，洗滌沉淀至pH=7.0，真空干燥沉淀.

1.3.2 大孔樹脂精制實(shí)驗(yàn)

稱取90g D101型大孔樹脂，無水乙醇濕法裝柱，無水乙醇流動(dòng)清洗，檢查乙醇流出液至乙醇液與水(1∶5)混合不呈白色渾濁為止，以大量蒸餾水洗脫至無醇味，待用.分別精密稱取2.1中3種提取物約3.0 g，以20mL水溶解，濕法上柱，使原液吸附30min，大量水淋洗，至洗脫液無色且薄層色譜檢測(cè)不出糖類成分，再以75％乙醇洗脫至無色，收集洗脫液，真空干燥成粉末.

1.4 黃芩提取物黃芩苷含量測(cè)定

1.4.1 色譜條件

色譜柱：Syncronis C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇/0.4％磷酸(50∶50)；檢測(cè)波長(zhǎng)280nm；流速：1mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL.理論塔板數(shù)以黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000.在上述條件下，得黃芩苷的高效液相色譜圖(見圖1).

a)黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品；b)水提取物；c)堿水提取物；d)醇提取物；e～g)酸沉精制的水提取、堿水提取物、醇提取物；h～j)大孔樹脂精制的水提取、堿水提取物、醇提取物

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱定黃芩苷對(duì)照品10 mg，置于50mL容量瓶中，加50％甲醇溶解、定容、搖勻，制得200μg/mL黃芩苷對(duì)照品溶液.分別精密吸取對(duì)照品溶液0.25,0.50,1.00,2.00,4.00,8.00mL至10mL容量瓶中，以流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得濃度為5，10，20，40，80，160μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液.分別吸取稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL進(jìn)樣，測(cè)定黃芩苷的峰面積.并以峰面積(A)對(duì)質(zhì)量濃度ρ(μg/mL)，回歸方程：A=58.121ρ-52.263，r=0.9992，表明黃芩苷在5～160μg/mL范圍內(nèi)線性良好.

1.4.3 樣品含量的測(cè)定

精密稱定不同方法下的黃芩樣品各25mg，置于50mL容量瓶中，加入30mL 50％甲醇溶解.超聲處理(功率250W，頻率33kHz)30min，放冷，加50％甲醇定容至刻度，搖勻?yàn)V過，取濾液按下式計(jì)算黃芩苷含量:

黃芩苷含量(％)=[對(duì)應(yīng)濃度(μg/mL)×20×100]/樣品重(mg)×100％.

2 結(jié)果與分析

2.1 黃芩提取結(jié)果

黃芩經(jīng)不同溶劑提取后，水提液為黃色渾濁液體，堿水為紅色油狀，醇提液為黃色澄清液體，結(jié)果見表1.由表1可知，堿水提取物中黃芩出膏率為(53.23±1.40)％，明顯高于水和60％乙醇提取物(P<0.01)；60％乙醇提取物中黃芩苷得率為(11.84±1.14)％，高于水和堿水提取物(P<0.01)；3種提取方法中60％乙醇提取物中黃芩苷含量為(25.13±1.89)％，高于水和堿水提取物中黃芩苷含量(P<0.05).

表1 黃芩不同提取方法比較 (n=3)

**P<0.01；*P<0.05

2.2 酸沉精制結(jié)果

不同提取方法樣品經(jīng)酸沉淀精制后結(jié)果見表2.由表2可知，醇提取酸沉淀出膏率為(42.17±1.24)％，明顯高于水和堿水提取物(P<0.01)；酸沉精制醇提物和水提取黃芩苷含量分別為(60.33±1.02)％和(69.29±1.54)％，明顯優(yōu)于堿水提取物(P<0.01)；醇提物黃芩苷得率為(25.40±1.02)％，高于水和堿水提取物(P<0.01).

表2 不同提取物酸沉法比較(n=3)

**P<0.01；*P<0.05

2.3 大孔樹脂精制結(jié)果

不同提取方法樣品經(jīng)大孔樹脂精制后結(jié)果見表3.由表3可知，大孔樹脂精制后，黃芩出膏率醇提物和大孔水提物分別為(43.96±1.67)％和(34.90±1.52)％，明顯優(yōu)于堿水提物(P<0.01)；醇提物黃芩苷含量為(46.68±1.47)％，黃芩苷得率為(20.66±1.51)％，均高于水和堿水提取物(P<0.01).

表3 不同提取物大孔樹脂精制比較(n=3)

**P<0.01；*P<0.05

2.4 各工藝路線比較分析

各工藝路線總黃芩苷得率和總出膏率的計(jì)算公式為：總黃芩苷得率=總出膏率×總黃芩苷含量，總出膏率為各種方法出膏率之積，總黃芩苷含量為精制所得黃芩苷含量；得出黃芩出膏率最高的方法是醇提取大孔樹脂精制法為20.73％，黃芩苷得率最高的方法是醇提取酸沉淀法為11.93％，黃芩苷含量最高的方法是水提取酸沉淀法為69.29％.

3 討論

黃芩苷為黃酮類化合物，脂溶性較大，在水中溶解度小，堿性條件下易溶解.根據(jù)其化學(xué)性質(zhì)的特點(diǎn)采用了水、60％乙醇，堿水三種溶劑提取黃芩藥材.結(jié)果顯示堿水溶劑提取后黃芪出膏率明顯高于水和60％乙醇的提取方法，但其所得雜質(zhì)太多，長(zhǎng)時(shí)間加熱提取易破壞提取物的有效成分.D101型大孔樹脂是一種球狀、非極性聚合物吸附劑，常用于富集各種中草藥中黃酮、皂苷等天然成分及復(fù)方，具有使用方便、價(jià)格低廉的優(yōu)勢(shì)，使用大孔樹脂富集黃芩苷樣品相比酸沉法損失量明顯較小，故在不要求獲得高純度產(chǎn)品的條件下可以考慮使用大孔樹脂富集黃芩苷.本實(shí)驗(yàn)采用大孔樹脂精制醇提物，黃芩出膏率最高；酸沉淀法精制醇提取物，黃芩苷得率最高；酸沉淀法精制水提物，黃芩苷含量最高.故在實(shí)際應(yīng)用中以大孔樹脂精制醇提物和酸沉法精制水提物，能獲得較高的黃芩出膏率和黃芩苷含量，為黃芩苷的開發(fā)利用提供基礎(chǔ).

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典：I部[M].北京: 化學(xué)工業(yè)出版社,2010: 282-283.

[2]張建春,張 華,施 瑛,等.黃芩苷的研究近況[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2005,16(3): 247-249.

[3]黎萬壽,陳 幸.黃芩苷提取工藝研究[J].中草藥,2000,31(2): 107.

[4] Kitazaki H,Ishimaru M,Inoue K.et a1.Separation of baicalein from baicalin by solvent extraction[J].Kagaku Kagaku Ronbun.1996,22(2): 287.

[5]Tsumura & Co.Method of separating and recovering flavone compound having glycoside structure and flavone compound not having glycoside structure: JP,WO/1996/002528 [P].1996-02-01.

[6] 劉彬果，鐘 蕾，郭文勇,等.大孔吸附樹脂法對(duì)黃芩總黃酮富集純化工藝的研究[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004,25(5): 562-564.

[7] Lu H T,Jiang Y,Chen F.Application of high-speed counter-current chromatography to the preparative separation and purification of baicalin from the Chinese medicinal plant Scutellaria baicalensis[J].J of Chromatogr A,2003,1017(1/2):117-123.