阿托伐他汀鈣對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血脂水平及CRP-m RNA表達(dá)的影響

高招波 魏曉琴 鄭春華 肖冬平

南昌市第一醫(yī)院心血管科，南昌 330006

動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）可致動(dòng)脈管壁增厚、變硬、管腔狹窄等，直接引發(fā)多種心腦血管事件的發(fā)生[1]。目前對(duì)AS防治思路的研究，低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）研究一直處于中心位置，大量研究證實(shí)，LDL-C水平與AS嚴(yán)重程度密切相關(guān)[2]。C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）作為AS重要的促炎癥因子，在參與AS形成和發(fā)展中扮演了重要角色[3]。本文以大鼠AS模型為載體，探討阿托伐他汀鈣對(duì)AS大鼠血脂水平和CRP-mRNA表達(dá)的影響，研究其臨床價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 資料來源

選取45只健康Wistar雄性大鼠，月齡3～4個(gè)月，體質(zhì)量190～220 g，均由南昌醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供（2012-0009），且依清潔級(jí)對(duì)大鼠專人飼養(yǎng)。

1.2 方法

1.2.1 主要藥品及試劑 阿托伐他汀鈣（美國(guó)輝瑞制藥有限公司，H20093819）；膽固醇、膽酸鈉（河南平頂山市東珠生物制品有限公司，H19993993）；丙基硫氧嘧啶購(gòu)自蘇州恒益醫(yī)藥原料有限公司；低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白購(gòu)自中科院上海生物化學(xué)研究所等。

1.2.2 主要儀器設(shè)備 PCR擴(kuò)增儀（美國(guó)Eppendorf公司）；RS-28高速低溫離心機(jī)（德國(guó)賀利氏公司）；全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)貝克曼公司）；超低溫冰箱（海爾公司）；BX60顯微鏡（德國(guó)Olympus公司）。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)方法 將45只健康Wistar雄性大鼠基礎(chǔ)喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為對(duì)照組、AS模型組和阿托伐他汀鈣治療的觀察組，各15只。對(duì)照組繼續(xù)喂養(yǎng)基礎(chǔ)飼料，AS模型組和觀察組則改喂食高脂飼料 （3%膽固醇、0.5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%豬油、81.3%基礎(chǔ)飼料）。觀察組在喂養(yǎng)高脂飼料4周后，改給予溶于生理鹽水的阿托伐他汀鈣5 mg/（kg·d）灌胃，其余2組則給予同等體積的生理鹽水灌胃。整個(gè)實(shí)驗(yàn)持續(xù)8周。

1.3 標(biāo)本采集及檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)第8周末對(duì)大鼠麻醉后分離取單側(cè)頸動(dòng)脈血，分離后提取血清和血漿，采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血脂HDL-C、LDL-C水平。采用Trizol[3]一步法提取RNA并做鑒定，RNA含量采用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)法。應(yīng)用酶聯(lián)免疫分析法測(cè)定大鼠CRP-mRNA水平；大鼠處死后取主動(dòng)脈弓縱切面，石蠟包埋，連續(xù)切片，HE染色，光鏡下觀察大鼠主動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以±s表示，采用F檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組大鼠血脂和CRP-mRNA表達(dá)水平的比較

觀察組的LDL-C低于對(duì)照組和AS模型組，HDL-C高于對(duì)照組和AS模型組（P＜0.05）。AS模型組的LDL-C高于對(duì)照組，HDL-C低于對(duì)照組 （P＜0.05）。觀察組的CRP-mRNA 表達(dá)水平低于 AS 模型組（P＜0.05）（表 1）。

表1 3組大鼠血脂和CRP-mRNA表達(dá)水平的比較（mmol/L，±s）

表1 3組大鼠血脂和CRP-mRNA表達(dá)水平的比較（mmol/L，±s）

與對(duì)照組和 AS模型組比較，*P＜0.05；與對(duì)照組比較，#P＜0.05；與AS模型組比較，▲P＜0.05

組別 n LDL-C HDL-C CRP-mRNA對(duì)照組AS模型組觀察組15 15 15 2.09±0.11 4.09±0.12#1.41±0.08*0.61±0.09 0.47±0.05#0.89±0.07*0.53±0.07 0.64±0.08 0.35±0.03▲

2.2 3組大鼠主動(dòng)脈的病理結(jié)果

對(duì)照組：大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜、中膜和外膜分界清楚，光鏡下見內(nèi)皮細(xì)胞完整，內(nèi)膜光滑；中膜主要由呈同心排列的彈性纖維膜組成，基質(zhì)內(nèi)可見環(huán)形的平滑肌細(xì)胞；外膜較薄，為疏松結(jié)締組織，內(nèi)含少量平滑肌細(xì)胞（圖1A）。AS模型組：大鼠主動(dòng)脈可見多處隆起于內(nèi)膜表面的斑塊，斑塊表面為纖維膜，深部為大量粥糜樣物質(zhì)（圖1B）。觀察組：大鼠主動(dòng)脈可見內(nèi)膜增厚且血管平滑肌細(xì)胞增生，彈性膜薄厚不均，內(nèi)皮細(xì)胞不完整，內(nèi)皮下有少量壞死物，有少量淋巴細(xì)胞和泡沫細(xì)胞，中膜萎縮，有斷裂分離現(xiàn)象，但尚無(wú)明顯的斑塊形成（圖1C）。

3 討論

AS的病因目前尚不完全清楚，早期AS多見損傷性的脂質(zhì)條紋，有研究發(fā)現(xiàn)其多由大量膽固醇的巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞構(gòu)成[4]。大量膽固醇酯在巨噬細(xì)胞內(nèi)積聚，形成泡沫細(xì)胞，可能是AS形成早期的特征性病理生理過程[5-7]。LDL-C作為AS的炎癥指標(biāo)，高度參與了膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)發(fā)揮抗AS作用，其具有抗AS作用在于膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)[8]，其與AS發(fā)生有密切關(guān)系，為判斷和治療AS提供了重要的參考依據(jù)。

他汀類調(diào)脂藥在AS、冠心病的防治中占有重要地位，不僅能通過抑制三羥基三甲基戊二酰輔酶A還原酶阻斷羥甲戊酸途徑及增加肝臟LDL-C受體表達(dá)，從而降低血漿LDL-C的濃度，還能升高HDL-C水平[9]。本實(shí)驗(yàn)采取高脂飲食喂養(yǎng)直接導(dǎo)致大鼠HDL-C降低和LDL-C升高，阿托伐他汀鈣灌胃后顯示，LDL-C明顯降低，HDL-C明顯升高，提示阿托伐他汀鈣對(duì)降低AS大鼠LDL-C、提高HDL-C有顯著效果。LDL-C水平與AS及心腦血管疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)有密切聯(lián)系，降低LDL-C水平對(duì)減少AS的發(fā)生有積極意義[10]。

有研究發(fā)現(xiàn)，在肺炎衣原體所致的AS模型中觀察到斑塊中出現(xiàn)明顯的炎癥改變，同時(shí)伴有CRP-mRNA和蛋白表達(dá)明顯升高，提示AS可能與CRP-mRNA和高蛋白表達(dá)有一定的關(guān)聯(lián)[11-14]。有研究發(fā)現(xiàn)他汀類藥物可降低頸動(dòng)脈粥樣斑塊累及的平滑肌細(xì)胞CRP-mRNA表達(dá)而抑制炎癥反應(yīng)[15]。本研究顯示，服用阿托伐他汀鈣治療的觀察組CRP-mRNA表達(dá)水平明顯低于AS模型組，提示他汀類藥物降低了AS模型大鼠AS段CRP-mRNA的表達(dá)，可為臨床抗心血管藥物治療提供新思路。

綜上所述，阿托伐他汀鈣可降低AS大鼠LDL-C水平，升高HDL-C水平，并抑制AS段CRP-mRNA表達(dá)，從而延緩AS的進(jìn)程。

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