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    四跨膜蛋白CD151在子宮頸癌中的表達及意義*

    2013-12-04 12:25:10張靜艷孫玉榮
    中國醫(yī)學創(chuàng)新 2013年22期
    關鍵詞:膜蛋白子宮頸癌免疫組化

    張靜艷 孫玉榮

    CD151是四次跨膜蛋白家族的重要成員,其具有四次跨膜蛋白的一般特征,參與調控細胞信號轉導、細胞增殖及移行等過程。研究證實, CD151在多種腫瘤中存在過表達,參與了腫瘤的遷移、侵襲,并與腫瘤的預后呈正相關[1]。CD151有可能成為腫瘤治療的新靶點。本研究采用S-P免疫組化方法檢測子宮頸癌組織中的CD151的表達,并結合臨床病理資料進行分析,以探討其與子宮頸癌分化程度、臨床分期及淋巴結轉移的關系。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 100例標本取自齊齊哈爾醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院腫瘤外科2008-2011年間行根治性切除子宮頸癌患者,且術后經病理學證實診斷。按UICC標準分級及TNM分期。所有患者術前均未接受放、化療。同時選取同一手術切除標本遠端的正常宮頸黏膜組織24例作為對照。標本均在手術切除后15 min內采集。

    1.2 實驗試劑 鼠抗人CD151單克隆抗體,由美國ABCAM公司生產,免疫組織化學SP試劑盒和 DAB 顯色試劑盒由上海長島生物技術公司生產。

    1.3 實驗方法

    1.3.1 切片制作 新鮮標本于10%中性甲醛溶液固定并過夜,常規(guī)乙醇梯度脫水后,二甲苯透明及石蠟包埋,以 5 μm厚度切片,制成玻片。

    1.3.2 免疫組化學染色 免疫組化主要染色步驟:(1)切片二甲苯脫蠟,梯度乙醇水化;(2)3%雙氧水甲醇滅活內源性過氧化物酶;(3)枸櫞酸緩沖液進行抗原修復;(4)滴加一抗、二抗和三抗并進行DAB顯色;(5)蘇木素復染;(6)常規(guī)脫水、透明、封片。使用PBS代替一抗進行陰性對照。

    1.3.3 染色結果判斷 以細胞膜和細胞質見棕褐色顆粒為CD151表達陽性細胞。每例切片選5個高倍視野,按陽性細胞總數占同類計數細胞總數的百分比,將染色結果分為陰性與陽性,陽性細胞總面積<50%為陰性、≥50%為陽性[2]。

    1.4 統(tǒng)計學處理 應用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學處理,正態(tài)性檢驗用Kolmogorov-Smirnov法,方差齊性檢驗用Levene法。參數檢驗用單因素方差分析,組間兩兩比較運用SNK檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 免疫組化檢測子宮頸癌中CD151蛋白表達 CD151蛋白的陽性信號主要表達于細胞膜,呈棕黃色或棕褐色顆粒樣表現。(圖1)。24例正常組織中,CD151陽性表達3例,陽性率為12.5%(3/24)。100例子宮頸癌患者中,CD151陽性表達為63例,陽性率為63%。腫瘤組織中CD151陽性表達率明顯高于正常宮頸組織(P<0.01)。

    圖1 CD151在宮頸組織中的表達(DAB,×400)

    2.2 CD151蛋白在子宮頸癌中表達與臨床病理特征的關系 CD151蛋白表達與子宮頸癌患者年齡無關(P>0.05),而與腫瘤TNM分期、分化程度、淋巴結轉移有關(P<0.05)。見表1。

    表1 CD151蛋白表達與子宮頸癌患者臨床病理特征間關系 例(%)

    低級別和高級別子宮頸癌中CD151蛋白表達陽性率分別為31.3%、65.0%(P<0.01)。早期及中晚期子宮頸癌CD151蛋白表達陽性率分別為45.5%和76.8%(P=0.005)。淋巴結轉移組及未發(fā)生淋巴結轉移組CD151蛋白表達陽性率分別為76.6%和39.0%,比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

    3 討論

    子宮頸癌是婦女發(fā)病率最高的惡性腫瘤,在所有惡性腫瘤中所占比例為35%~72%,但由于部分患者發(fā)現較晚,失去治療機會[3]。

    四跨膜蛋白超家族( transmenbrane 4 super family,TM4SF)可以與自身或其他細胞表面的整合素、生長因子受體結合形成四跨膜網絡,并對后者的生物學功能產生重要影響[4],在細胞的增殖、融合,腫瘤生長、遷移及血管生成中起重要作用[5-6]。四跨膜蛋白超家族已檢出30多個成員,例如CD9、CD82等絕大多數被認為是抑癌基因,其產物與腫瘤發(fā)展、預后呈負相關。而新近發(fā)現的CD151卻與腫瘤發(fā)生及預后呈正相關[7],并且是該家族成員中唯一的癌基因[8]。

    作為四跨膜蛋白家族的重要成員,CD151最早在血小板表面被發(fā)現。其不僅具有四跨膜蛋白的一般特征,如參與細胞黏附、增殖及血管生成,研究證實,CD151在多種腫瘤中存在過表達,并且參與腫瘤細胞的浸潤、侵襲與轉移[9]。鑒于CD151與腫瘤發(fā)展的正相關性,在腫瘤惡性進展中的重要作用,本實驗采用免疫組織化學法檢測CD151在子宮頸癌的表達,并探討其與腫瘤的分化、臨床分期及淋巴結轉移的關系。

    本研究結果表明,CD151蛋白在子宮頸癌組織中的表達水平明顯高于正常組織,提示 CD151蛋白與子宮頸癌的發(fā)生呈正相關。研究結果表明,CD151在子宮頸癌組織中過表達與腫瘤的分化程度、TNM分期及淋巴結轉移等惡性表型明顯有關,進一步證實CD151的過表達參與子宮頸癌的浸潤及轉移。因此CD151的檢測可作為子宮頸癌的早期篩查、臨床診斷的指標。已有體內實驗證實抗CD151抗體可抑制腫瘤的侵襲與轉移[10],CD151的檢測有望為子宮頸癌的預后評價提供一種新的分子生物學指標。

    [1]Zoller M.Gastrointestinal tumors:metastasis and tetraspanins[J].Z Gastroentero,2006,44(7):573-586.

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