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    五味佛手丸中五味子乙素的HPLC法測定

    2013-11-22 01:09:18孫小靜牛宇東馮一凡陜西省渭南市第一醫(yī)院渭南714000
    陜西中醫(yī) 2013年5期
    關(guān)鍵詞:乙素量瓶五味子

    孫小靜 牛宇東 馮一凡 李 芳 陜西省渭南市第一醫(yī)院(渭南 714000)

    五味佛手丸主要是由五味子、佛手等五味藥組成,功能補氣健脾,養(yǎng)肝益腎。五味子為方中的君藥,我們采用HPLC法測定對其進行質(zhì)量控制,結(jié)果表明,此法準(zhǔn)確,分離度效果好,精密度和重現(xiàn)性好,回收率高,陰性對照顯示制劑中其他成分對五味子乙素的測定無干擾,可作為該制劑的含量測定指標(biāo)。

    1 儀器與試藥 儀器:高效液相色譜儀(Agilent1200型);紫外檢測器;BP221S賽多利斯電子天平。試藥:甲醇為色譜純,水為重蒸餾水,其他試劑均為分析純,樣品自制,五味子乙素對照品購自中國藥品生物制品檢定所,批號為0765-20003,供含量測定用。

    2 實驗方法和結(jié)果 2.1 色譜條件 色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(200mm×4.6mm,5μm),流動相:甲醇∶水=78∶22,檢測波長:250nm,柱溫:室溫,流量:0.8mL/min。在此條件下,五味子乙素與其他組分分離效果良好,達到基線分離,陰性無干擾。

    2.2 對照品溶液的制備 精密稱取五味子乙素對照品適量,加甲醇使溶解制成每1mL含五味子乙素30μg的溶液。

    2.3 供試品溶液的制備 取本品5袋,除去包衣,研細,混勻,取約5.0g,精密稱定,加入氯仿50mL,搖散,超聲處理30分鐘,濾過,用少量氯仿分次洗滌漏斗,洗液并入濾液中,蒸干,殘渣加甲醇溶解轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻,用0.45μm的微孔濾膜濾過,即得。

    2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取五味子乙素對照品10.3mg,置50mL量瓶中,加甲醇使溶解并稀釋至刻度,搖勻,分別精密量取上述對照品溶液(200μg/mL)0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL,置10mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,備用。在上述色譜條件下,分別吸取上述溶液各10μL進樣,測定峰面積,結(jié)果見表1。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)Y,五味子乙素濃度為橫坐標(biāo)X,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,表明五味子乙素在10.0μgmL~60.0μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。回歸方程為 Y =471.19+284.65X r=0.9997。

    2.5 精密度試驗 分別精密吸取五味子乙素對照品溶液10μL,重復(fù)進樣6次,測定峰面積積分值,以峰面積計算RSD為1.01%,表明本法精密度良好。

    2.6 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液,依上述方法每隔2h測定一次,測定峰面積積分值,結(jié)果,五味子乙素峰面積的RSD為1.56%,表明供試品溶液在8小時內(nèi)基本穩(wěn)定。

    2.7 重復(fù)性試驗 取同一批樣品,平行精密稱取6份,按供試品溶液的制備方法處理,進樣測定,計算含量,結(jié)果五味子乙素的平均含量為0.0268mg/g,RSD為0.99%,表明本法重復(fù)性良好。

    2.8 回收率試驗 采用加樣回收法。分別精密稱取已知含量的供試品(010801,其五味子乙素含量為0.0268mg/g)6份,加入五味子乙素對照品適量,同重復(fù)性試驗方法制成供試品溶液,測定五味子乙素含量,計算回收率,結(jié)果見表1。

    2.9 樣品測定 同重現(xiàn)性方法對3批產(chǎn)品中的五味子乙素進行測定,結(jié)果見表2。

    表2 3批產(chǎn)品中五味子乙素含量測定

    3 討 論 采用上述測定方法測定3批產(chǎn)品中五味子乙素的含量,含量范圍為0.0260~0.0280mg/g,考慮到生產(chǎn)和含量測定提取時五味子乙素的損失,暫定本品含量測定指標(biāo)和范圍為:本品含五味子以五味子乙素計為0.023mg/g。

    實驗中對供試品的提取條件進行了考察,結(jié)果表明超聲提取時間為30分鐘時,五味子乙素已經(jīng)提取完全;提取溶劑經(jīng)對比了甲醇、氯仿作為提取溶劑,其他條件不變,結(jié)果顯示采用甲醇提取時,供試品色譜圖中雜質(zhì)峰較多,峰面積相對較小,而采用氯仿時,雜質(zhì)峰干擾較少,分離較好,基線平穩(wěn)。

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