非小細(xì)胞肺癌中CD44和nm23-H1的表達(dá)及臨床意義

李雪曼，楊桂芳

(1.武漢大學(xué)中南醫(yī)院病理科，湖北武漢430030;2.武漢市第三醫(yī)院胸外科，湖北武漢430060)

肺癌是嚴(yán)重危害人類健康的惡性腫瘤之一，近年來(lái)，肺癌的發(fā)病率呈全球上升趨勢(shì)，是全世界目前發(fā)病率和病死率最高的癌癥。尋求新的腫瘤標(biāo)志物與治療靶點(diǎn)已成為肺癌研究的熱點(diǎn)。CD44是一種與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的重要黏附分子，nm23-H1是目前研究最多的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，但它們是否為肺癌轉(zhuǎn)移的基因標(biāo)志物尚無(wú)定論。大量研究表明［1］，CD44可促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，但其在肺癌研究方面的相關(guān)文獻(xiàn)頗為少見(jiàn)。此外，已有nm23-H1基因與黑色素瘤、肝癌等多種人類腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的報(bào)道［2］，但關(guān)于 nm23-H1基因缺失與肺癌的關(guān)系，目前國(guó)內(nèi)少見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CD44和nm23-H1蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)情況，并探討其與肺癌臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本

42例非小細(xì)胞肺癌癌標(biāo)本為2011年7月至2012年10月手術(shù)切除或取活檢(纖支鏡或經(jīng)皮肺穿刺)所得，經(jīng)病理診斷為原發(fā)性肺癌，術(shù)前均未行放療和化療。其中男 29例，女13例;年齡39～81歲，平均63.5歲。鱗狀上皮細(xì)胞癌20例，肺腺癌14例，大細(xì)胞未分化癌8例。按2009年國(guó)際肺癌研究協(xié)會(huì)(IASLC)TNM分期分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ期9例，Ⅱ期7例，Ⅲ期16例，Ⅳ期10例(均為纖支鏡或肺穿刺取活檢所得標(biāo)本);分化程度:低分化12例，中分化24例，高分化6例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例。另取癌旁組織21例(距腫瘤邊緣3 cm)和肺部良性病變組織14例(分別為肺大泡8例，肺囊腫3例，肺脂肪瘤1例及錯(cuò)構(gòu)瘤2例)作為對(duì)照。所有病理標(biāo)本均用SP法進(jìn)行免疫組化染色。

1.2 方法

1.2.1 試劑 一抗為小鼠抗人CD44單克隆抗體，小鼠抗人nm23-H1單克隆抗體。二抗為羊抗小鼠FTTC-IgG，抗體及鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶(SP)試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色 應(yīng)用SP法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。已知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗為陰性對(duì)照。CD44主要定位于細(xì)胞膜，細(xì)胞膜呈棕黃色為陽(yáng)性。nm23-H1主要定位于細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)深棕色顆粒染色為陽(yáng)性。隨機(jī)觀察10個(gè)高倍鏡視野計(jì)算均值。

1.2.3 結(jié)果判定 CD44及nm23-H1蛋白表達(dá)根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占觀察同類細(xì)胞總數(shù)的百分率分為陽(yáng)性或陰性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5%為-;5% ～25%為+;25% ～50%為++;≥50%為+++。這兩種蛋白表達(dá)呈+～+++時(shí)，均為陽(yáng)性，染色結(jié)果由陽(yáng)性細(xì)胞的染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞的百分率共同決定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)及百分?jǐn)?shù)表示，率的比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 非小細(xì)胞肺癌組織中CD44和nm23-H1蛋白的表達(dá)

非小細(xì)胞肺癌中CD44和nm23-H1的表達(dá)，見(jiàn)圖1。其中CD44蛋白在肺癌組織中呈陽(yáng)性表達(dá)，nm23-H1蛋白呈陰性表達(dá)。

圖1 非小細(xì)胞肺癌中CD44和nm23-H1蛋白的表達(dá)(免疫組織化學(xué)染色×400)Fig 1 Expression of CD44 and nm23-H1 in lung tissues from patients with non-small cell lung cancer(Immunohistochemistry×400)

2.2 各組標(biāo)本中CD44和nm23-H1蛋白的表達(dá)

免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，CD44在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織，癌旁組織高于良性病變組織，而 nm23-H1則與之相反(P均 ＜0.01)，見(jiàn)表1。

表1 3組不同組織中CD44和nm23-H1蛋白的表達(dá) 例Tab 1 Expression of CD44 and nm23-H1 in different groups

2.3 CD44和nm23-H1蛋白表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分級(jí)的關(guān)系

非小細(xì)胞肺癌組織中CD44和nm23-H1蛋白表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分級(jí)的關(guān)系，見(jiàn)表2。結(jié)果顯示，CD44蛋白的表達(dá)與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期呈正相關(guān)，nm23-H1蛋白表達(dá)與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期呈負(fù)相關(guān)，兩者表達(dá)陽(yáng)性率均與腫瘤分化程度無(wú)明顯相關(guān)性。

表2 非小細(xì)胞肺癌組織中CD44和nm23-H1蛋白表達(dá)與肺癌臨床病理特征的關(guān)系Tab 2 Relationship between CD44 and nm23-H1 expression and clinical characteristics in non-small cell lung cancer

3 討論

黏附分子蛋白CD44基因位于11號(hào)染色體短臂上，其作用主要有以下幾個(gè)方面:①介導(dǎo)淋巴細(xì)胞與高內(nèi)皮微靜脈的結(jié)合，促使淋巴細(xì)胞歸巢;②參與細(xì)胞與細(xì)胞之間，細(xì)胞與間質(zhì)之間的相互作用;③激活和促進(jìn)淋巴細(xì)胞的作用;④介導(dǎo)信號(hào)間轉(zhuǎn)導(dǎo);⑤ 參與細(xì)胞的遷移與增殖，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期;⑥控制藥物的吸收和調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性;⑦與腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移有關(guān)［3-4］，病理情況下，CD44可介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與宿主細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)間的相互作用。有研究顯示，非小細(xì)胞肺癌患者血清中CD44的表達(dá)與肺癌臨床分期和轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，與生存期呈負(fù)相關(guān)［5］;CD44表達(dá)越高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越強(qiáng)［6］。本研究結(jié)果與上述研究基本相符，非小細(xì)胞肺癌組織中CD44表達(dá)率明顯高于癌旁組織，而癌旁組織CD44表達(dá)高于良性病變組織，推測(cè)CD44蛋白表達(dá)可能與細(xì)胞的增殖、再生以及惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)。

核苷二磷酸激酶(NDBK)為nm23基因編碼的蛋白產(chǎn)物，參與多種生物活動(dòng)，在細(xì)胞信號(hào)傳遞﹑細(xì)胞分化﹑維持細(xì)胞的正常骨架等過(guò)程中起到重要作用［7］。NDBK可能通過(guò)兩種途徑參與細(xì)胞調(diào)節(jié):①影響細(xì)胞微管的聚合及解聚。當(dāng)nm23蛋白出現(xiàn)缺失或結(jié)構(gòu)改變時(shí)，既可引起微管聚合的異常，導(dǎo)致癌細(xì)胞異倍體的增加，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，又可通過(guò)影響細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)，促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。②通過(guò)調(diào)節(jié)G蛋白的信號(hào)傳遞，發(fā)揮負(fù)調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展［8］。本研究結(jié)果顯示，nm23-H1在肺良性病變組織中的表達(dá)明顯高于非小細(xì)胞肺癌組織及癌旁組織;在非小細(xì)胞肺癌中，nm23-H1蛋白的表達(dá)隨癌細(xì)胞浸潤(rùn)程度的加深而逐漸降低，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的陽(yáng)性表達(dá)較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者明顯降低，提示nm23-H1在肺癌的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著負(fù)性調(diào)節(jié)作用。

本研究結(jié)果顯示，肺癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者CD44蛋白表達(dá)明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)者，提示CD44蛋白的表達(dá)與肺癌的轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)肺癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，nm23-H1蛋白的表達(dá)明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，提示nm23-H1基因?qū)δ[瘤的抑制作用，說(shuō)明其與肺癌的轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。nm23-H1蛋白表達(dá)越低或缺失者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越強(qiáng)［9］。不排除CD44的過(guò)度表達(dá)和nm23-H1的低表達(dá)在肺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起協(xié)同作用。

本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌組織中CD44和nm23-H1的表達(dá)，結(jié)果顯示，兩者的異常表達(dá)與肺癌的發(fā)生、分化、轉(zhuǎn)移及臨床分期關(guān)系密切，這為肺癌的診斷、分級(jí)、高危轉(zhuǎn)移人群的篩選提供了可靠的依據(jù)，也為非小細(xì)胞肺癌的治療提供了新的靶點(diǎn)，關(guān)于兩者的過(guò)表達(dá)及低表達(dá)與肺癌復(fù)發(fā)及預(yù)后的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。

［1］龔道軍，謝志徽.肝細(xì)胞癌組織中 MMP-9，CD44V6與nm23-H1表達(dá)的相關(guān)性及意義［J］.肝膽胰外科雜志，2006，18(6):352-354.

［2］徐艷萍，金春順，孫立群，等.nm23-H1等位基因缺失與喉癌轉(zhuǎn)移相關(guān)性研究［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2009，29(18):2296-2297.

［3］趙京，孫玉鄂，張連斌.CD44的表達(dá)與人類非小細(xì)胞肺癌淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)性的初步研究［J］.中國(guó)肺癌雜志，2000，3(2):115-117.

［4］Lopez JI，Camenisch TD，Stevens MV，et al.CD44 attenuates metastatic invasion during breast cancer progression［J］.Cancer Res，2005，65(15):6755-6763.

［5］黃蘭卿，梁紅衛(wèi)，容永璋，等.肺癌患者血清中sCD44V6含量及內(nèi)鏡活檢組織中CD44V6表達(dá)的臨床意義［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2005，22(10):1231-1232.

［6］梁傳余，劉春青.CD44基因表達(dá)與喉癌生物學(xué)行為的關(guān)系［J］.四川醫(yī)學(xué)，2003，24(12):1222-1223.

［7］Liotta LA，Steeg PS.Clues to the function of Nm23 and Awd proteins in development，signal transduction，and tumor metastasis provided by studies of Dictyostelium discoideum［J］.J Natl Cancer Inst，1990，82(14):1170-1172.

［8］周清華.肺癌基礎(chǔ)研究與臨床治療進(jìn)展［M］.北京:科學(xué)出版社，1999:8-9.

［9］張賢芬，趙書(shū)佑，張麗君.轉(zhuǎn)移抑制基因nm23-H1在喉癌、下咽癌及其轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)［J］.山東大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，17(5):282-284.