1例日本和牛鏈球菌與梭菌混合感染的診斷

高存帥，劉萌萌，徐 玉，畢可東，劉煥奇

（青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東 青島266109）

2012年3月，山東省即墨市某養(yǎng)殖場(chǎng)的日本和牛犢牛發(fā)生了主要癥狀為發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難、排稀糞、關(guān)節(jié)腫大、跛行的疫病，發(fā)病率約為20%，死亡率約為10%。筆者經(jīng)綜合診斷最終確診為鏈球菌與梭菌混合感染，采取相應(yīng)治療措施后有效遏制了疫病的發(fā)展。

1 病情介紹

該場(chǎng)現(xiàn)有犢牛130多頭，均為10～50日齡左右。飼喂從散戶收購(gòu)的鮮牛奶，不經(jīng)高溫煮沸直接飼喂。3月中旬開始發(fā)病，陸續(xù)發(fā)病20多頭，呈散發(fā)，已死亡10多頭，均為20～30日齡左右的雄性犢牛。病初均排稀便，發(fā)熱，多數(shù)伴有咳嗽，呼吸困難，個(gè)別關(guān)節(jié)腫脹、跛行；發(fā)病中期糞便基本正常，精神頹廢，食欲一定程度減少，發(fā)病到死亡5～6d，死亡前2d停止排便，胃脹氣，瀕死前四肢僵直，個(gè)別神經(jīng)癥狀。采用磺胺二甲氧嘧啶、博落回注射液、乙酰甲喹，肌肉注射基本無(wú)效，注射解熱鎮(zhèn)痛藥物后退燒繼而反復(fù)。

2 臨床癥狀

病初精神委靡，食欲下降，發(fā)熱，清晨體溫41℃，先排黃色稀便，后轉(zhuǎn)為深綠色，個(gè)別便血；多數(shù)伴有咳嗽、喘，個(gè)別關(guān)節(jié)腫脹。死前胃脹氣，四肢僵硬，個(gè)別角弓反張。

3 病理剖檢

送檢2頭發(fā)病犢牛，剖檢表現(xiàn)為胸腔積液，肺臟廣泛性出血，全肺被白色纖維素性滲出物附著，隔葉布滿化膿灶（見(jiàn)中插彩版圖1），氣管環(huán)出血嚴(yán)重；心包膜增厚與肺臟粘連，心臟被覆白色纖維素性滲出物，心冠及心內(nèi)膜出血；肝臟腫大，臟面布滿黃色條紋，切面紅黃相間，膽囊腫大，充滿黃色稀薄膽汁；脾臟腫大2倍、質(zhì)地堅(jiān)硬；腎臟腫大，皮質(zhì)大面積出血；腹腔內(nèi)暗紅色渾濁的血性腹水（中插彩版圖2），腸系膜淋巴結(jié)腫大有出血，小腸漿膜散布出血點(diǎn)，腸黏膜脫落壞死；關(guān)節(jié)腔積液增多。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 組織抹片鏡檢 取肺臟、肝臟、脾臟、血液抹片，姬姆薩染色鏡檢。結(jié)果：肺臟內(nèi)白細(xì)胞增多，大量球菌呈雙球、鏈狀分布；肝臟細(xì)胞顆粒變性嚴(yán)重，有兩端鈍圓的莢膜桿菌，個(gè)別呈長(zhǎng)絲狀以及典型的鏈球菌；脾內(nèi)淋巴細(xì)胞增多、腫大，少數(shù)變性，有兩端鈍圓的莢膜桿菌；血液內(nèi)白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞增多，可見(jiàn)鏈球菌。

4.2 細(xì)菌分離培養(yǎng) 將肝臟、脾臟、肺臟及腎臟分別接種于普通瓊脂、麥康凱瓊脂及綿羊血瓊脂培養(yǎng)基。分別在37℃需氧和厭氧條件下培養(yǎng)24h，需氧條件下培養(yǎng)普通瓊脂上可見(jiàn)圓形光滑半透明的菌落，麥康凱瓊脂上有粉紅色圓形光滑的菌落，血瓊脂平板上長(zhǎng)出灰白色透明露珠狀菌落，呈α溶血；厭氧條件下培養(yǎng)血瓊脂平板上出現(xiàn)灰黃色圓形光滑的半透明菌落，有溶血環(huán)。分離細(xì)菌革蘭染色鏡檢（見(jiàn)中插彩版圖3、圖4）發(fā)現(xiàn)大量革蘭陽(yáng)性兩端鈍圓的桿菌、革蘭陽(yáng)性球菌以及少量革蘭陰性桿菌，細(xì)菌形態(tài)與組織抹片鏡檢結(jié)果基本一致。

4.3 腸內(nèi)容物梭菌毒素檢測(cè) 取送檢牛病變小腸內(nèi)容物置于離心管中，加適量生理鹽水混勻，3 000 r/min離心15min，取上清液經(jīng)細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾后備用。取適量濾液尾靜脈注射一組小鼠，再取適量濾液加熱至60℃維持30min后尾靜脈注射另一組小鼠。結(jié)果注射未處理濾液組小鼠30min內(nèi)全部死亡，注射經(jīng)過(guò)處理濾液的小鼠不死亡。

4.4 藥敏試驗(yàn) 采用紙片法對(duì)分離菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。結(jié)果顯示，阿莫西林、頭孢噻呋鈉、頭孢他啶、氟苯尼考高度敏感；氨芐西林、新霉素、泰樂(lè)菌素、林可霉素中度敏感；對(duì)恩諾沙星、環(huán)丙沙星、紅霉素、慶大霉素等不敏感。

5 防治措施

加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，飼喂牛奶經(jīng)過(guò)高溫煮沸冷卻后飼喂。采用含氯消毒劑對(duì)牛舍進(jìn)行消毒，每天1次，直至疫病控制。

發(fā)病犢牛肌肉注射阿莫西林20mg/kg體重或頭孢噻呋鈉5mg/kg體重，每日2次，連用3d，首次加倍；配合注射甲硝唑75mg/kg體重或林可霉素20mg/kg體重，每日1次，連用3d。重癥者靜脈注射，抗生素中加入地塞米松磷酸鈉2.5mg。

6 小結(jié)

該場(chǎng)飼養(yǎng)的日本和牛犢牛是采用胚胎移植技術(shù)于荷斯坦奶牛，出生后的犢牛集中管理，無(wú)法吃到初乳必然導(dǎo)致犢牛抵抗力下降，加之飼喂的牛奶均是從散戶收購(gòu)且不經(jīng)過(guò)高溫煮沸直接飼喂，在乳房炎發(fā)病率較高的今天，飼喂的牛奶中極有可能被細(xì)菌污染，長(zhǎng)期攝入細(xì)菌污染的牛奶導(dǎo)致發(fā)病也就不足為奇。鏈球菌的致病性決定其在病理上兼有出血和纖維素性滲出，肺部的嚴(yán)重出血、化膿灶以及完全被纖維素滲出覆蓋等病變證實(shí)鏈球菌的感染時(shí)間較長(zhǎng)，并非急性感染，20～30日齡下的犢牛卻經(jīng)受了鏈球菌長(zhǎng)時(shí)間的感染引人深思。梭菌在自然界中分布極廣，正常牛的腸道中也可分離獲得，在抵抗力較差的家畜體內(nèi)往往大量繁殖，其外毒素通常是導(dǎo)致患畜急性死亡的原因。在剖殺的犢牛肝臟、脾臟組織抹片中均發(fā)現(xiàn)細(xì)菌形態(tài)極似梭菌，細(xì)菌分離培養(yǎng)和梭菌毒素檢測(cè)更加證實(shí)梭菌的參與。由于條件有限，無(wú)法證實(shí)何種梭菌為此次致病菌是本次診斷的遺憾。針對(duì)上述病情，應(yīng)加強(qiáng)管理采用高溫煮沸牛奶飼喂；同時(shí)，選用敏感的抗生素合理配伍是控制和治療疾病的重要手段。筆者在臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，針對(duì)深部的肺部感染由于缺氧往往會(huì)繼發(fā)厭氧菌感染，使用敏感抗生素的同時(shí)，配合林可霉素或甲硝唑往往會(huì)有良好的效果，此次致病菌中因有梭菌參與更應(yīng)使用抗厭氧菌的藥物。在獸醫(yī)臨床上，因梭菌直接或間接引發(fā)的疾病十分常見(jiàn)，梭菌雖可殺滅，但其致病性主要在于外毒素，探索實(shí)用的拮抗外毒素的方法迫在眉睫。