涼·山·皮·寒·藥·藥·效·初·探

邵秋紅，劉 娟，2，馬萬盛，彭 詩

（1.西南大學榮昌校區(qū) 動物醫(yī)學系，重慶 榮昌402460；2.重慶市藥效評價工程技術研究中心，重慶 榮昌402460）

涼山皮寒藥，也叫冕寧皮寒藥、雞大腿，此藥性寒，味辛苦，全草皆可以入藥，四季都可采集，有歌云：“米口袋，寒辛苦，清熱解毒黃疸除，外感發(fā)燒和痢疾，鼻血疔瘡與癰腫［1］”；涼山州一個藥農在采藥過程發(fā)現(xiàn)后，當?shù)厝擞脕碇委煾忻昂途弥尾挥目人裕?］，在2003年前后“非典”時期也被當?shù)赜米鲱A防之藥。但涼山皮寒藥現(xiàn)為民間用藥未被記錄到《中藥藥典》內，其藥效研究還未完善。

由于本藥屬于豆科的米口袋屬植物，而米口袋屬植物有很好的抑菌和抗炎效果［3－5］，又根據(jù)其多用于預防及治療感冒，特設了牛津杯法抑菌試驗、二甲苯致小鼠耳廓腫脹法抗炎試驗、免疫相關試驗（T細胞百分含量及免疫器官增重指數(shù)）、負重游泳試驗作為“皮寒藥”的藥效初探，為深入研究開發(fā)利用這一藥物資源奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 實驗動物 昆明系小鼠，體重20±2g，雄鼠，由瀘州醫(yī)學院提供。

1.1.2 試驗用菌種 巴氏桿菌、白色念珠菌、鴨疫里默氏菌、大腸桿菌K88、金黃色葡萄球菌、A型魏氏梭菌（中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所）。

1.1.3 主要藥品 涼山皮寒藥水針劑，參照文獻［6］制成，藥液濃度為生藥1g/mL（西南大學榮昌校區(qū)中藥研究與開發(fā)室研發(fā)制備）；地塞米松磷酸鈉注射液（西安康華制藥廠，批號：20110108）；α－醋酸萘酯（上海信然生物技術有限公司，批號：20110906）；副品紅（重慶川東化工有限公司，批號：20101011）；甲基綠（重慶東方試劑廠，批號：20100513）。其他所用試劑均為分析純。

1.2 涼山皮寒藥抑菌試驗 制備適量肉湯培養(yǎng)基［7］及瓊脂培養(yǎng)基，滅菌備用；制備菌液，置于37℃恒溫培養(yǎng)24h，擴菌備用。

將涼山皮寒藥水針劑采用二倍稀釋法稀釋為：1/20、1/21、1/22……1/28，每個梯度做3個重復。用牛津杯法［7］分別作巴氏桿菌、白色念珠菌、鴨里默氏菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、魏氏梭菌6種細菌的抑菌試驗，測量抑菌圈，計算平均值［8－10］確定抑菌效果。

1.3 小鼠耳廓腫脹試驗 參考文獻［6，11－12］，將50只健康小鼠隨機分為5組，分別為高劑量組、中劑量組、低劑量組、空白對照組、陽性藥物對照組（地塞米松磷酸鈉注射液組），每組10只。在每只小鼠右耳兩面涂二甲苯0.1mL/只致腫，左耳不涂為正常耳。30min后高、中、低劑量組分別腹腔注射0.75g/mL、0.5g/mL、0.25g/mL涼山皮寒藥水針劑0.5mL/只，空白對照組腹腔注射等量生理鹽水，陽性藥物組腹腔注射等體積含0.1mg地塞米松磷酸鈉注射液的生理鹽水，30min后將小鼠處死，用直徑9mm打孔器在相同位置取左右耳片，立即用電子天平稱重，計算左耳片和右耳片重量的差值（腫脹度）及抑制率［13］。

腫脹度＝右耳片重－左耳片重

抑制率（%）＝（空白對照組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度）/空白對照組平均腫脹度×100%

1.4 小鼠免疫相關試驗

1.4.1 T淋巴細胞百分含量的測定 將小鼠隨機分成4個組，分別為高劑量組、中劑量組、低劑量組、空白對照組，每組10只，每日分別按體重灌喂0.75 g/mL、0.5g/mL、0.25g/mL的涼山皮寒藥水針劑藥液及生理鹽水，給藥量均為0.1mL/10g體重，連續(xù)給藥7d。各組末次給藥1h后采血，做全血涂片，按酯酶染色法［14－15］進行染色，置油鏡下觀察。

1.4.2 免疫器官指數(shù)測定 小鼠分組與處理同1.4.1，各組末次給藥1h后脫頸處死，取脾臟，用濾紙吸干血后稱重。按公式計算免疫器官指數(shù)：免疫器官指數(shù)＝脾臟重量mg/體重g［16］。

1.5 抗疲勞試驗 小鼠分組與處理同1.4.1，各組末次給藥1h后，在小鼠尾部按體重的5%負重游泳（水溫25℃～30℃，水深0.3m），記錄游泳時間。判斷標準：以小鼠沉入水底時間超過10s時為力竭［17］。

1.6 統(tǒng)計方法 用SPSS19.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，單因素方差分析組間差異，數(shù)據(jù)以±SD表示。

2 結果

2.1 抑菌試驗結果 從表1中可以看出，涼山皮寒藥水針劑對巴氏桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、A型魏氏梭菌、鴨疫里默氏菌有一定抑制作用。

表1 涼山皮寒藥各濃度抑菌直徑 （mm）

2.2 涼山皮寒藥對小鼠耳廓腫脹的影響 由表2可見，各給藥組均降低小鼠耳廓腫脹率，與空白對照組比較，高、中劑量組均差異極顯著（P＜0.01），低劑量組差異顯著（P＜0.05）；高、中劑量組抗炎作用優(yōu)于陽性藥物對照組，差異極顯著（P＜0.01）。涼山皮寒藥水針劑對小鼠耳腫脹抑制率的結果為：中劑量組＞高劑量組＞陽性藥物對照組＞低劑量組。

2.3 T淋巴細胞百分含量及免疫器官指數(shù)測定結果 由表3結果可知，各濃度的涼山皮寒藥對T淋巴細胞百分比、小鼠的脾臟指數(shù)均有不同程度提高，但與空白對照組比，差異不顯著（P＞0.05）。

表2 涼山皮寒藥對二甲苯誘導的小鼠耳廓腫脹的影響

表3 不同濃度涼山皮寒藥對小鼠T淋巴細胞酯酶染色率及小鼠的免疫器官指數(shù)的影響

2.4 抗疲勞試驗結果 由表4結果可知，各濃度的涼山皮寒藥均能增加小鼠游泳的時間，與空白對照組比較，高濃度組差異極顯著（P＜0.01）、中濃度組差異顯著（P＜0.05）。

表4 不同濃度涼山皮寒藥對小鼠負重游泳時間測定

3 分析與討論

涼山皮寒藥首載于1972年四川西昌地區(qū)衛(wèi)生局出版的《西昌中草藥》一書中，現(xiàn)今，只有在民間臨床中應用此藥，有學者對其進行了形態(tài)學、質量標準、解熱鎮(zhèn)痛及安全性的初步研究［18－20］，但藥效方面的研究還有待完善，因此根據(jù)其臨床用藥情況對其進行可能的藥效研究是很有必要的。

抑菌試驗檢驗藥物是否對某種細菌具有抑制作用、最適抑菌濃度范圍，對革蘭陽性菌的抑制作用強還是對革蘭陰性菌的抑制效果強，從而對其進一步的研究提供方向。本試驗結果顯示，涼山皮寒藥對革蘭陽性菌與陰性菌均有一定抑制作用。

炎癥是機體對損傷所產生的防御反應，發(fā)生發(fā)展過程一般被認為分為3期，早期以毛細血管擴張、通透性亢進為主，中期為血小板吸附及白細胞游走，晚期為肉芽組織增生［21］。二甲苯致小鼠耳腫脹模型屬于炎癥反應的早期［22］。目前藥物抗炎的機理主要分為兩類：通過抑制磷脂酶而使花生四烯酸生成減少而起抗炎作用，以及通過抑制環(huán)加氧酶最終使前列腺素等炎性介質生成減少［23］。本試驗表明，涼山皮寒藥二甲苯所致的炎癥有一定抑制作用。

機體免疫系統(tǒng)中淋巴細胞增殖是機體對非己抗原刺激產生免疫應答過程中的重要事件，淋巴細胞增殖效果決定效應淋巴細胞的數(shù)量，反映機體的免疫狀態(tài)［24］。T淋巴細胞主要參與機體細胞免疫反應，其含量的檢測對多種疾病的診斷具有極為重要的意義。脾臟是體內最大的淋巴器官，免疫細胞中以B淋巴細胞為主（約占50%～60%），而B淋巴細胞是參與體液免疫的主要細胞。免疫器官的重量在一定程度上可反映免疫器官內淋巴細胞的數(shù)量，從而間接了解體內淋巴細胞總體水平，脾臟指數(shù)增加，說明到達脾臟的藥物可促進脾臟白細胞活化增殖［25］。本試驗結果表明，涼山皮寒藥對T淋巴細胞有增值的趨勢，對細胞免疫有一定的增強作用。

疲勞是機體生理過程不能維持其機能的特定水平，不能維持預定的運動強度的一種生理或病理現(xiàn)象［26－27］；游泳時間長短可以反應動物運動疲勞的程度［28］，游泳時間的延長，表明機體抗疲勞作用的增強，從而降低發(fā)病率，也能間接反映了機體組織、臟器的健康狀況。本試驗結果表明，涼山皮寒藥對機體的抗疲勞有顯著的增強作用。

4 結論

涼山皮寒藥對部分革蘭陽性菌和革蘭陰性菌有一定的抑制作用，對小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用，對小鼠增強免疫力與抗疲勞有一定效果。

［1］ 四川西昌地區(qū)衛(wèi)生局.《西昌中草藥上冊》［M］.西昌：西昌地區(qū)人民印刷廠，1972：627.

［2］ 何德昭.涼山州民間草藥“皮寒藥”加陳皮治療感冒72例［J］.成都中醫(yī)藥大學學報，2004，27（3）：11－12.

［3］ 王軍憲，朱蓉.米口袋的化學成分研究［J］.西北植物學報，1989，9（2）：127－130.

［4］ 李可，李曉明，王斌貴，等.狹葉米口袋化學成分研究［J］.中國中藥雜志，2008，33（14）：1711－1713.

［5］ 黃海蘭，徐波.米口袋清除自由基活性及其成分研究［J］.青島大學學報：自然科學版，2006，19（4）：30－35.

［6］ 寧康健，尹莉，呂錦芳，等.三黃制劑對小鼠耳廓抗炎作用的研究［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2008，27（1）：39－41.

［7］ 侯永清，張挺.不同提取工藝對中草藥抑菌效果的影響［J］.飼料工業(yè)，2003，24（2）：9－10.

［8］ 薛密，王倩，王海濤，等.10味中草藥抑菌作用研究［J］.安徽農業(yè)科學，2009，37（13）：5970－5972.

［9］ 楊睿，王倩，王海濤，等.苦丁茶等10味中草藥抑菌作用研究［J］.安徽農學通報，2009，15（6）：34－36，41.

［10］劉建，王海雁，趙淑江.牛津杯法測定五倍子對大黃魚病原弧菌的體外抑菌活力［J］.2009，33（11）：44－47.

［11］李正國，宋華榮，羅燕，等.中藥復方制劑的小鼠抗炎試驗［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2009，28（2）：44－47.

［12］徐叔云，卞如濂，陳修，等.藥理實驗方法學［M］.3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：911－913.

［13］王憲齡，李連珍，荊云，等.牡丹皮鎮(zhèn)痛抗炎作用的實驗研究［J］.河南中醫(yī)，2005，25（12）：26－28.

［14］宋陽，席研，葛鵬.玉屏風散對小鼠T淋巴細胞酯酶染色率的影響［J］.中國誤診學雜志，2008，8（13）：2062－2063.

［15］王淑芳，王改利.中藥免疫增強劑在肉兔飼料中的應用效果［J］.中國養(yǎng)兔，2008（5）：4－6.

［16］趙迎虎，張明軍，劉進輝，等.中藥制劑對小鼠耐力及免疫器官影響［J］.中國獸醫(yī)雜志，2010，46（1）：14－16.

［17］張林，韋堅義，韓德剛.地黃抗疲湯對小鼠抗疲勞作用的實驗研究［J］.泰山醫(yī)學院學報，2009，30（3）：162－163.

［18］趙芙蓉，蔣桂華，楊莎.皮寒藥的形態(tài)組織學研究［J］.華西藥學雜志，2012，27（5）：506－508.

［19］趙芙蓉，蔣桂華，陳孝雨.皮寒藥質量標準初步研究［J］.成都中醫(yī)藥大學學報，2011，34（3）：53－56.

［20］趙芙蓉，蔣桂華，陳孝雨.皮寒藥解熱鎮(zhèn)痛作用及初步安全性研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2011，22（10）：2518－2519.

［21］洪美玲.病理學［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1999：50.

［22］李麗.巖黃連抗炎作用的實驗研究［J］.中國民族民間醫(yī)藥雜志，2009，18（23）：20－21.

［23］劉志堅，方仲家，徐建偉.白英水提取物對耳廓腫脹小鼠的影響［J］.2011，46（6）：455.

［24］吳江濤，劉珂.紫錐菊提取物對小鼠單核巨噬細胞系統(tǒng)功能的影響［J］.煙臺大學學報（自然科學工程版），2001，14（2）：133.

［25］劉紅.竹節(jié)人參提取物抗疲勞的實驗研究［J］.湖北民族學院學報（醫(yī)學版），2001，18（3）：4－6.

［26］Jung K A，Han D，Kwon E K，etal.Anti fatigue effect of Rubus core an us Miquel extract in mice［J］.J Med food，2007，10（4）：689－693.

［27］Koh J H，Kim K M，Kim J M，etal.Anti fatigue and anti stress effect of hot－water fraction from mycelia of Cordyceps sinensis［J］.Bio 1pharm Bull，2003，26（5）：6912－6914.

［28］陳艷珍，薛軍.中藥組方對小鼠免疫功能的影響［J］.中國飼料添加劑，2007，8：19－22.