抗血小板抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡血小板減少患者中臨床意義的研究

李金鳳 胡飛 歐陽賢鳳

系統(tǒng)性紅斑狼瘡是一種對患者皮膚與內(nèi)臟進行全身侵犯的自身免疫性疾病，臨床具有彌漫性，對腎臟、皮膚黏膜、中樞神經(jīng)以及骨骼肌肉等有廣泛影響，累及多個臟器官與系統(tǒng)，患者血液系統(tǒng)損害后出現(xiàn)血小板顯著減少，臨床發(fā)病率較高，相關(guān)資料顯示抗血小板抗體在血小板減少中有顯著作用機制[1-2]。筆者為探討抗血小板抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡血小板減少患者的臨床意義，選取2010年3月-2013年3月32例血小板減少與32例血小板未減少患者進行分組研究，對比分析兩組患者抗血小板抗體陽性率情況，現(xiàn)將具體情況報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年3月-2013年3月本院接受診治的64例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者，其中血小板減少（血小板<100×109/L）32例為研究組，男19例，女13例，年齡21～76歲，平均（35.4±2.7）歲；血小板未減少32例為對照組，男21例，女11例，年齡23～79歲，平均（36.1±2.5）歲。所有患者臨床無輸血情況。兩組患者年齡、性別比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），具有可比性。

1.2 方法 兩組患者均采取對癥治療，并應(yīng)用ELISA法MACE試劑盒對患者進行抗血小板抗體檢測。

1.2.1 MACE-1檢測方法 抗血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa抗體進行MACE-1檢測[3]，使用O型隨機機采集50 mL血小板，分10份，對其混合離心后收集血小板扣，在血小板扣中添加體積相等細胞重懸保存液，兩者充分混合后取血小板扣重懸液15μL放入Eppendorf管[4]，向管中加入待檢血清150 μL，然后將標本放入水浴箱內(nèi)，溫度設(shè)定37 ℃，孵育半 h后致敏。在標本中添加C反應(yīng)蛋白400 μL，離心5 min，離心12 000轉(zhuǎn)/min，洗滌2次后在標本中添加裂解液120 μL，均勻后在對應(yīng)板孔中添加50 μL，GPⅡb/Ⅲa為紅色條孔[5]，封膜后繼續(xù)孵育半 h后添加洗液300 μL，連續(xù)洗板4次后拍干，用酶標記第二抗體，封膜后繼續(xù)孵育半 h，重復(fù)洗滌步驟。標本添加PNPP100 μL常溫下孵育半 h，避光，標本底部有顏色出現(xiàn)后添加終止液100 μL。酶標儀設(shè)定主波長45 mm，參比波長630 nm，讀取A值，Cutoff值設(shè)為2倍陰性對照A值，陽性標本A值大于Cutoff值[6]。

1.2.2 MACE-2檢測方法 對GPⅠa/Ⅱa、GPⅠb/Ⅸ、GPⅣ抗體進行MACE-2檢測[7]，使用O型隨機機采集50mL血小板，分10份，對其混合離心后收集血小板扣，在血小板扣中添加體積相等細胞重懸保存液，兩者充分混合后取血小板扣重懸液20 μL放入Eppendorf管，向管中加入待檢血清200 μL，對標本進行體外致敏方法與MACE-1檢測相同，洗滌2次后在標本中添加裂解液160μl，均勻后在對應(yīng)板孔中添加50 μL。GPⅠa/Ⅱa為紫色條孔，GPⅠb/Ⅸ為黃色條孔，GPⅣ為黑色條孔[8]，封膜后繼續(xù)孵育半 h后添加洗液300 μL，連續(xù)洗板4次后拍干，用酶標記第二抗體，封膜后繼續(xù)孵育半 h，重復(fù)洗滌步驟。標本添加PNPP100 μL常溫下孵育半 h，避光，標本底部有顏色出現(xiàn)后添加終止液100 μL。酶標儀設(shè)定參數(shù)同上，讀取A值，標本陽性或陰性定義同上[9]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 運用SPSS 14.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理，計數(shù)資料進行字2檢驗，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

治療前研究組與對照組抗血小板抗體陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；治療后研究組抗血小板抗體陽性率低于治療前（P<0.05）。見表1、表2。

表1 兩組治療前抗血小板抗體陽性率比較 例（%）

表2 研究組治療前后抗血小板抗體陽性率比較 例（%）

3 討論

系統(tǒng)性紅斑狼瘡屬于異質(zhì)性疾病，患者自身抗體通過和對應(yīng)的自身免疫抗原結(jié)合起來形成循環(huán)免疫復(fù)合物并經(jīng)Ⅲ型超敏反應(yīng)對患者自身組織與器官進行損傷，而且抗體與血細胞的表面抗原相結(jié)合經(jīng)Ⅱ型超敏反應(yīng)對血細胞進行損傷，導(dǎo)致患者出現(xiàn)多系統(tǒng)或多器官受累癥狀[10]。在臨床疾病診斷上根據(jù)患者臨床癥狀開展實驗室檢查，其中最主要的診斷標準為抗血小板抗體陽性檢測，有相關(guān)資料顯示患者抗血小板抗體與血小板減少有重要聯(lián)系[11]，而導(dǎo)致系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者出現(xiàn)血小板減少因素卻多種多樣，例如患者血小板產(chǎn)生不足或分布異?？蓪?dǎo)致血小板減少、患者在藥物治療過程中血小板被藥物損傷過度或感染性減少均可導(dǎo)致血小板減少，對患者血小板減少過程進行分析發(fā)現(xiàn)抗血小板抗體在整個過程中有重要作用，對血小板構(gòu)造進行分析發(fā)現(xiàn)血小板膜表面存在數(shù)量眾多的糖蛋白，這些糖蛋白又是由Ⅱb/Ⅲa結(jié)合構(gòu)成的，存在巨核細胞與血小板中，其中本研究中進行測量的GPⅡb/Ⅲa、GPⅠa/Ⅱa、GPⅠb/Ⅸ、GPⅣ數(shù)量最多，對血小板正常運轉(zhuǎn)必不可少的成分，而且GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ最常見[12]。

有資料顯示患者體內(nèi)輔助性T細胞與抗原遞呈細胞對自身抗體（大部分為抗血小板抗體）進行調(diào)節(jié)，其介質(zhì)產(chǎn)生的免疫破壞在患者血小板減少發(fā)病機制中有重要作用，由于血小板對人體內(nèi)止血有重要作用，而血小板膜糖蛋白對血小板功能有重要影響，是血小板自身抗體被自身或其他細胞識別的靶抗原，其中GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ是導(dǎo)致血小板減少的常見抗血小板抗體，可以使血小板黏附聚集釋放功能異常出現(xiàn)臨床出血，在膜糖蛋白受損后由于血小板活化，將多種細胞因子釋放增強血管通透性，加重出血與血管炎[13]，在與膜糖蛋白結(jié)合過程中造成血小板受損，血小板生成減少，被致敏后對巨噬系統(tǒng)進行影響，造成血小板生成出現(xiàn)障礙，此外還經(jīng)細胞毒T細胞對血小板進行溶解，這表明細胞免疫與體液免疫在血小板減少中發(fā)揮共同作用。本研究中研究組的GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ抗體較對照組顯著增多（P<0.05），這兩種抗體之間以及對血小板減少在臨床上有關(guān)聯(lián)性，而且對患者病情發(fā)展與轉(zhuǎn)歸有重要影響。相比較而言GPⅠa/Ⅱa與GPⅣ檢測率較小，筆者對其可能導(dǎo)致血小板較少的作用機制尚無充分認識，有待于進一步研究探討。綜上所述，抗血小板抗體對系統(tǒng)性紅斑狼瘡血小板減少患者病情變化有顯著影響，臨床相關(guān)性顯著，對患者轉(zhuǎn)歸有重要意義。

[1]楊仁池.免疫性血小板減少癥的命名、定義與療效評價的標準化-關(guān)于ITP國際工作組報告的解讀[J].中華血液學(xué)雜志，2009 30（3）：215-216.

[2]楊林花，李智婷，劉秀娥，等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者網(wǎng)織血小板和血小板生成素檢測及其臨床意義[J].中國藥物與臨床，2004，4（6）：432-436.

[3]Kuwana M，Kaburaki J，Okazaki Y，et al.Two types of autoantibodymediated thrombocytopenia in patients with systemic lupus erythematosus[J].Rheumatology，2006，45（7）：851-854.

[4]陳穎娟，賴蓓，楊拓，等.抗血小板抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡血小板減少患者中臨床意義的研究[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2011，15（4）：241-244.

[5]Katsumata Y，Suzuki T，Kuwana M，et al. Anti-c-Mpl （thrombopoietin receptor） autoantibody-induced amegakaryocytic thrombocytopenia in a patient with systemic sclerosis[J]. Arthritis Rheum，2003，48（6）：1647-1651.

[6]F ü reder W，F(xiàn)irbas U，Nichol J L，et al.Serum thrombopoietin levels and anti-thrombopoietin antibodies in systemic lupus erythematosus[J].Lupus，2002，11（4）：221-226.

[7]徐亮，王元，陳順樂.系統(tǒng)性紅斑狼瘡重癥血小板減少患者血清對巨核祖細胞的影響[J].現(xiàn)代免疫學(xué)雜志.2005，25（1）：56-60.

[8]Z Zhao H，Li S，Yang R.Thrombocytopenia in patients with systemic lupus erythematosus： significant in the clinical implication and prognosis[J].Platelets，2010，21（5）：380-385.

[9]周蕾 鞏路，于新立，等.血小板生成素與系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并血小板減少的相關(guān)性研究[J].天津醫(yī)藥，2007，35（7）：491-493.

[10]Brunner H I，Mina R，Pilkington C， et al.Preliminary criteria for global flares in childhood‐onset systemic lupus erythematosus[J].Arthritis care & research，2011，63（9）：1213-1223.

[11]羅雄燕，武麗君，吳鳳霞，等.巨核細胞增殖與分化障礙在系統(tǒng)性紅斑狼瘡伴發(fā)血小板減少中的作用[J].中華臨床醫(yī)師雜志（電子版），2010，4（2）：21-24.

[12]Ichikawa N，Ishida F，Shimodaira S， et al.Regulation of serum thrombopoietin levels by platelets and megakaryocytes in patients with aplastic anaemia and idiopathic thrombocytopenic purpura[J].Thrombosis and haemostasis，1996，76（2）：156.

[13]楊拓，黃慈波，賴蓓，等.抗c-mpl抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡并發(fā)血小板減少中的作用[J].北京大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2012，2：17.