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    鐵線蓮“茱莉亞”的組織培養(yǎng)研究

    2013-11-16 05:44吳榮
    綠色科技 2013年8期
    關(guān)鍵詞:增殖率嫩莖茱莉亞

    吳榮

    (西南林業(yè)大學(xué) 園林學(xué)院,云南 昆明650224)

    1 引言

    鐵線蓮屬(ClematisL.)植物是毛茛科(Ranunculaceae)世界著名的觀賞植物,共約300余種,廣布全球;我國有110種左右,全國各地都有分布[1]。早在1688年的《花鏡》中已有雄蕊瓣化的鐵線蓮重瓣變種的記載,但栽培育種工作卻很少有人做過。該屬植物為藤本中的佼佼者,有"攀援植物皇后"的美稱,目前國內(nèi)對鐵線蓮屬植物的研究主要集中在種質(zhì)資源調(diào)查、系統(tǒng)分類研究和栽培繁殖等方面[2]。鐵線蓮屬植物存在結(jié)實(shí)少或萌發(fā)時(shí)間長、發(fā)芽率低等問題,不宜采用有性繁殖,園林栽培應(yīng)用受到限制,組織培養(yǎng)方面的研究已逐漸展開[3~5]?!败锢騺啞笔氰F線蓮屬栽培觀賞植物,使用組織培養(yǎng)技術(shù)解決鐵線蓮屬一些植物種類繁育困難的問題,不但能給城市綠地增添一道亮麗風(fēng)景,還對研究鐵線蓮屬植物種質(zhì)資源保護(hù)以及開發(fā)利用有一定的參考價(jià)值。

    2 材料與方法

    春季選取從歐洲引種的2年生“茱莉亞”健壯無病蟲害的當(dāng)年生嫩莖,以其莖段和莖節(jié)為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)。以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基,附加不同濃度的NAA、6-BA和KT來誘導(dǎo)愈傷組織和側(cè)芽。

    首先將采好的材料用抹布擦一遍,有絨毛的用膠布粘掉,然后用肥皂水浸泡20min后清水沖洗30min。將材料分成莖段和莖節(jié)分裝,莖段切成6~8cm長短,莖節(jié)以將要接種的部位為中心再加0.5cm長度剪下備用,接種時(shí)帶入接種室,用75%酒精擦拭裝材料的瓶子后放入超凈臺,再在0.1%L汞溶液中浸泡滅菌3min,無菌水清洗4次以上接種。將接種好的外植體放在溫度20~22℃、光照12h/d的環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)。

    3 結(jié)果分析

    3.1 外植體的選擇

    外植體的選擇及接種到培養(yǎng)基中的形式是進(jìn)行組織培養(yǎng)建立無菌體系以及植株再生的關(guān)鍵。試驗(yàn)選取'茱莉亞'的嫩莖平躺在培養(yǎng)基中,5d后開始膨大,第11 d開始長愈傷,30d的愈傷誘導(dǎo)率為52.8%。豎插在培養(yǎng)基中的外植體有10%左右插入培養(yǎng)基部分發(fā)黃枯萎,最后死亡,40%左右沒有形成愈傷組織,大約15d左右枯死,大約30%的外植體長出黃色粒狀較堅(jiān)硬的愈傷組織,增殖緩慢。較細(xì)的外植體會在接種1d后開始發(fā)黑,7d后整個(gè)外植體死亡。所以,接種時(shí)使外植體平躺比豎插在培養(yǎng)基中的愈傷組織誘導(dǎo)率更高(表1)。

    表1 嫩莖粗細(xì)程度對成活率的影響

    從表1可以看出“茱莉亞”較細(xì)全部死亡,而較粗嫩莖的成活率高達(dá)96.3%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于較細(xì)嫩莖。

    3.2 愈傷組織的誘導(dǎo)

    將“茱莉亞”的莖節(jié)和莖段接種到 MS+2mg/L6-BA+0.05mg/L NAA+1mg/LKT培養(yǎng)基中來比較不同外植體的誘導(dǎo)效果。接種第4d莖節(jié)長出側(cè)芽,第5d莖段和莖段基部開始膨大,到第10d開始形成淡黃色至綠色愈傷組織,但是都只在切口處形成少量顆粒狀質(zhì)地較硬、顏色不一的愈傷組織,不適合增殖(表2)。

    表2 不同外植體愈傷組織及側(cè)芽誘導(dǎo)情況

    從表2中可以看出,“茱莉亞”的莖節(jié)和莖段在形成愈傷組織和側(cè)芽上的效果相差比較大,莖段愈傷組織誘導(dǎo)率為64.4%,幾乎是莖節(jié)的2倍,但是卻無法誘導(dǎo)側(cè)芽形成。從側(cè)芽誘導(dǎo)率可以看出,雖然莖節(jié)能夠誘導(dǎo)出側(cè)芽,但是誘導(dǎo)率比較低,只有18.9%,所以在誘導(dǎo)側(cè)芽方面還有待調(diào)整。

    3.3 愈傷組織增殖

    將“茱莉亞”誘導(dǎo)出愈傷組織的莖段和莖節(jié)轉(zhuǎn)接到 MS+3.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+1.5 mg/LKT和 MS+3.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+2.0mg/LKT中增殖很快,3d后就能明顯觀察到愈傷組織的增大,第13d愈傷組織增大1倍,10d后'茱莉亞'莖節(jié)長出第一個(gè)叢生芽,形成的愈傷組織呈黃綠色光澤,質(zhì)地較軟,適合愈傷組織的增殖分化(表3)。

    表3 不同KT濃度對外植體的增殖情況

    由表3可以看出,不同濃度KT對愈傷增殖效果差異很大,1.5mg/LKT對莖節(jié)愈傷組織增殖率可以達(dá)到90%而2.0mg/LKT對莖節(jié)愈傷組織的增殖率僅有11.7%。由此可見,不是KT濃度越高對愈傷誘導(dǎo)率越有利。1.5mg/LKT對'茱莉亞'莖段和莖節(jié)的愈傷組織增殖效果相差不大,分別是98.3%和90%。莖節(jié)在1.5 mg/LKT和2.0mg/LKT中生長情況相差很大。在2.0mg/LKT中,'茱莉亞'繼代培養(yǎng)產(chǎn)生的側(cè)芽很少而初代培養(yǎng)出的側(cè)芽長得比較強(qiáng)壯,而且誘導(dǎo)產(chǎn)生了少量叢生芽。

    4 結(jié)論與討論

    4.1 結(jié)論

    (1)粗嫩莖的成活率遠(yuǎn)高于細(xì)嫩莖,達(dá)到96.3%??赡茌^粗的嫩莖含營養(yǎng)較多,形成層薄壁細(xì)胞多,與培養(yǎng)基接觸面大,易于吸收營養(yǎng),消毒過程中不容易被殺死,存活力強(qiáng)。外植體平放在培養(yǎng)基中愈傷組織誘導(dǎo)率高于豎插。

    (2)MS+2.0mg/L6-BA+0.05mg/LNAA+1.0 mg/LKT對“茱莉亞”莖段愈傷組織的誘導(dǎo)優(yōu)于莖節(jié),達(dá)到64.4%,但無法誘導(dǎo)形成側(cè)芽。

    (3)MS+3.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+1.5 mg/LKT適合“茱莉亞”愈傷組織的增殖,不管是莖段還是莖節(jié),增殖率都在90%以上,莖段的增殖率甚至高達(dá)98.3%。

    4.2 討論

    (1)外植體平躺在培養(yǎng)基中愈傷組織誘導(dǎo)率高于豎插,可能是“茱莉亞”對激素濃度比較敏感,豎插在培養(yǎng)基中部分因切口吸收激素快且濃度過高而抑制生長,最后枯萎死亡;而平躺的外植體與培養(yǎng)基接觸面積較大,吸收激素速度及濃度合適,因而促進(jìn)了生長。

    (2)新萌蘗莖段和幼嫩新梢本身含病毒少或無毒,處于植物生理上線、營養(yǎng)生長中心和頂端分生組織,幼年的組織都比老年的組織有較高的形態(tài)發(fā)生能力[6],但是幼嫩外植體易損傷,消毒時(shí)間不宜過長也不能太短。

    (3)在增值過程中KT濃度不是越高越好。1.5 mg/LKT對'茱莉亞'的愈傷組織增殖效果很好,對側(cè)芽誘導(dǎo)效果很不明顯;2.0mg/LKT對愈傷組織增殖和側(cè)芽誘導(dǎo)效果都不明顯,這可能是因?yàn)镹AA和6-BA協(xié)同作用的結(jié)果。在植物組織培養(yǎng)中,植物生長調(diào)節(jié)劑是培養(yǎng)基中必不可少的成分,它能以極微小的量影響植物細(xì)胞分化、分裂和發(fā)育,影響植物的形態(tài)建成、開化、結(jié)實(shí)、成熟、脫落、衰老和休眠、萌發(fā)等許多的生理生化活動(dòng)。

    [1]中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志[M].北京:科學(xué)出版社,1980.

    [2]蔡艷飛,李世峰,李 涵,等.中國鐵線蓮屬植物研究進(jìn)展[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào),2009,25(4):195~198.

    [3]倪 新,馬 毓.紅花鐵線蓮的組織培養(yǎng)[J].植物學(xué)通報(bào),1984,2(2/3):71~73.

    [4]澤仁旺姆,尼 珍,潘 多.西藏甘青鐵線蓮的再生植株[J].西藏科技,2002,113(9):61.

    [5]張啟香,方炎明,呂 梅,等.鐵線蓮'Multi-Blue'不定芽及體細(xì)胞胚發(fā)生的初步研究[J].園藝學(xué)報(bào),2007,34(2):365~368.

    [6]李淑瑜.大葉女貞快繁體系研究[D].河南:河南農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.

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