頂空氣相色譜法測定水楊酸甲酯乳糖苷中殘留溶劑研究

北京協(xié)和藥廠（100050）何秀峰 劉冬 夏鵬飛 沈瓏瑛 趙立敏

水楊酸甲酯苷類化合物具有解熱、鎮(zhèn)痛、消炎等與水楊酸相類似的作用，對(duì)水楊酸進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，合成了新的水楊酸類衍生物—水楊酸甲酯乳糖苷（MSG）[1]，本品在二甲基亞砜中易溶，在甲醇中溶解，在水和乙醇中微溶，在乙腈、丙酮、乙酸乙酯和二氯甲烷中不溶。該產(chǎn)品按照其生產(chǎn)工藝要求，在合成反應(yīng)中分別使用了甲醇、乙醇、二氯甲烷及乙酸乙酯共4種有機(jī)溶劑，其中甲醇為重結(jié)晶用溶劑。

參照國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心《化學(xué)藥物殘留溶劑研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》要求及有關(guān)文獻(xiàn)[2][3][4]，并經(jīng)大量試驗(yàn)研究，建立了同時(shí)測定水楊酸甲酯乳糖苷中甲醇、二氯甲烷等上述4種殘留有機(jī)溶劑含量的頂空氣相色譜法。按照ICH及《中國藥典》2010版關(guān)于殘留溶劑的有關(guān)規(guī)定[2][4][5]，制定各溶劑的限度為：本品1g中含甲醇不得超過300μg，乙醇及乙酸乙酯不得超過500μg，二氯甲烷不得超過60μg。根據(jù)該原料的溶解特征，筆者根據(jù)其溶解特性以二甲基亞砜為溶媒，采用外標(biāo)法進(jìn)行試驗(yàn)，經(jīng)方法學(xué)考察結(jié)果表明各組分的分離度、重現(xiàn)性良好，試驗(yàn)方法合理，簡單易行，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為水楊酸甲酯乳糖苷中甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯殘留溶劑的有效測定方法。

1 儀器與試藥

Agilent 7890A氣相色譜儀、Agilent G1888頂空進(jìn)樣裝置，配有Agilent MSD ChemStation 操作控制及積分軟件；METTLER TOLEDO AL-204-IC電子分析天平。

甲醇（美國Dikma公司，批號(hào)：94951），乙醇（北京化工廠，批號(hào)：20090921），二氯甲烷（北京化工廠，批號(hào)：20091011），乙酸乙酯（北京化工廠，批號(hào)：20021025），二甲基亞砜（北京化工廠，批號(hào)：20091105）。

水楊酸甲酯乳糖苷（批號(hào)：100510、100517、100524），由寧波天衡制藥有限公司提供。

1.1 對(duì)照品貯備液的制備 分別取無水乙醇、乙酸乙酯適量，精密稱定，加入二甲基亞砜制成每1mL含乙醇、乙酸乙酯各10mg溶液，作為乙醇、乙酸乙酯對(duì)照品貯備液；取甲醇適量，精密稱定，加二甲基亞砜制成每1mL含甲醇6mg溶液，作為甲醇對(duì)照品貯備液；取二氯甲烷適量，精密稱定，加二甲基亞砜制成每1mL含二氯甲烷1.2mg溶液，作為二氯甲烷對(duì)照品貯備液。

1.2 混合對(duì)照品溶液的制備 精密量取上述對(duì)照品貯備溶液各1mL，置于50mL量瓶中，加入二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品溶液；精密量取上述對(duì)照品貯備溶液各0.8mL、1.2mL，分別置于2個(gè)50mL量瓶中，加入二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為80%混合對(duì)照品溶液、120%混合對(duì)照品溶液用于回收率的測定。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用色譜柱為DB-624交聯(lián)毛細(xì)管柱（30m×0.53 mm，i.d，3μm），以氦氣為載氣，氫火焰離子化檢測器（FID），進(jìn)樣口溫度為250℃，檢測溫度250℃。柱溫采用程序升溫：80℃保持，保持5min，后以10℃/min升至220℃，保持3min；流速為2.5mL/min，分流比為1∶30。頂空條件：頂空瓶預(yù)熱溫度90℃，加熱時(shí)間30min；定量環(huán)溫度120℃，平衡時(shí)間0.5min，填充時(shí)間0.5min，進(jìn)樣時(shí)間1.0min；傳輸線溫度180℃。

2.2 分離度試驗(yàn) 精密量取混合對(duì)照品溶液5.0mL于20mL頂空瓶中，按上述方法進(jìn)行測定，記錄色譜圖。甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯的分離度均＞1.5，取對(duì)照溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，所得待測各溶劑峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5.0%，符合《中國藥典》2010年版二部的相關(guān)規(guī)定。

2.3 線性范圍及標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱取甲醇75.0mg、乙醇、乙酸乙酯各125.0mg、二氯甲烷15.0mg，置于一個(gè)10mL量瓶中，以二甲基亞砜稀釋至刻度搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線儲(chǔ)備溶液。精密量取該溶液2.0mL置于一個(gè)10mL量瓶中加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。按比例精密稀釋成不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液6瓶，按上述方法進(jìn)行測定，以濃度為橫坐標(biāo)，以各溶劑峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見附表1。

附表1 線性范圍與回歸方程

附表2 水楊酸甲酯乳糖苷的平均回收率

附表3 三批水楊酸甲酯乳糖苷的殘留溶劑測定結(jié)果（%）

2.4 最小檢測限 按照信噪比3∶1，本方法溶液中甲醇、乙醇、二氯甲烷及乙酸乙酯的最小檢測限分別為0.35μg/mL、0.61μg/mL、0.52μg/mL、0.54μg/mL。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品混合溶液各5.0mL至6個(gè)頂空瓶中，照上述方法測定，根據(jù)甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯的峰面積計(jì)算RSD%分別為3.25%、2.28%、4.27%、2.33%，均小于5.0%。

2.6 回收率試驗(yàn) 分別精密稱取水楊酸甲酯乳糖苷200mg置于18個(gè)20mL頂空瓶中，其中5份分別加入80%混合對(duì)照品溶液5mL、5份加入混合對(duì)照品儲(chǔ)備液5mL、5份加入120%混合對(duì)照品儲(chǔ)備液5mL、3份加入5mL二甲基亞砜，充分混勻，作為供試品溶液；取混合對(duì)照品溶液5mL，置于頂空瓶中，封蓋、搖勻，作為對(duì)照品溶液。按照上述方法進(jìn)行測定，通過積分確定其峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算試樣中甲醇、乙醇、二氯甲烷及乙酸乙酯的平均回收率，結(jié)果見附表2。

2.7 樣品測定 精密稱取水楊酸甲酯乳糖苷3批供試品各200mg（每批兩份平行），于6個(gè)頂空瓶中分別加入二甲基亞砜5.0mL，封蓋，超聲溶解，照上述方法進(jìn)行測定，結(jié)果3批供試品中均未檢出乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯的有機(jī)溶劑殘留，甲醇?xì)埩袅糠弦?guī)定，結(jié)果見附表3。

3 討論

3.1 預(yù)熱溫度及時(shí)間的選擇 本試驗(yàn)根據(jù)樣品的熱穩(wěn)定性以及溶解度分別選擇于70、90及110℃條件下預(yù)熱，經(jīng)過比較在溫度相對(duì)較低的條件下，樣品的回收率較低，而過高的溫度對(duì)于樣品的穩(wěn)定性以及低沸點(diǎn)的溶劑也會(huì)造成一定影響；筆者又對(duì)預(yù)熱時(shí)間進(jìn)行了考察，分別在預(yù)熱20、30、40min后進(jìn)行測定。最終筆者選擇了90℃、預(yù)熱30min作為預(yù)熱條件。

3.2 預(yù)熱條件下樣品的穩(wěn)定性 本品在90℃條件下進(jìn)行了熱破壞實(shí)驗(yàn)，分別于30、45、90min取樣采用HPLC方法進(jìn)行測定，未檢測到水楊酸乳糖苷，說明甲酯鍵在該條件下比較穩(wěn)定，不會(huì)在加熱過程中發(fā)生斷裂產(chǎn)生甲醇。

3.3 水楊酸甲酯乳糖苷殘留溶劑的測定水楊酸甲酯乳糖苷為一個(gè)新的非甾體抗炎藥，目前筆者正在進(jìn)行其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及制劑處方的研究。本文建立的水楊酸甲酯乳糖苷中殘留溶劑的測定方法能夠同時(shí)測定生產(chǎn)工藝中涉及的4種有機(jī)溶劑的殘留，所建立的方法準(zhǔn)確、可靠，可用于水楊酸甲酯乳糖苷中殘留溶劑的測定，保障藥品的安全、有效。