我院就診女性人乳頭瘤病毒基因篩查分析

尹德英，劉 霞，田 鑌

(蘭州市婦幼保健院檢驗(yàn)科，蘭州 730030)

生殖道人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)感染是常見(jiàn)的婦產(chǎn)科疾病之一，主要通過(guò)性傳播，近年來(lái)發(fā)病率逐年升高［1］。早期流行病學(xué)和基礎(chǔ)研究已經(jīng)證實(shí)HPV感染是宮頸上皮內(nèi)病變(cervical intraepithelial neoplasm，CIN)和宮頸癌的主要原因。HPV有多種基因型(亞型)，而且不同的HPV亞型的感染其致病性和后果也有顯著差異，根據(jù)HPV持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的必要條件和主要危險(xiǎn)因素，將HPV-DNA分為高危型與低危型的感染檢測(cè)也成為宮頸癌篩查的必要內(nèi)容。本文對(duì)2012年10月至2013年5月期間來(lái)我院就診895例婦科患者進(jìn)行19種HPV基因型的分型檢測(cè)，旨在了解我院就診女性HPV DNA基因分型在宮頸病變中感染狀況及分布特點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年10月至2013年5月我院就診患者宮頸病變HPV感染篩查的女性患者895例。年齡:20～61歲，從﹤25歲開(kāi)始，以5歲為一年齡段 ，分8個(gè)年齡組。

1.2 儀器和試劑 HPV-DNA提取試劑盒，分型檢測(cè)試劑盒(中山大學(xué)達(dá)安公司);ABI7300PCR實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增儀(美國(guó));核酸分子雜交水浴搖床。

1.3 標(biāo)本采集和處理 HPV篩查標(biāo)本提取樣步驟和要求按宮頸細(xì)胞學(xué)取材;常規(guī)宮頸口采樣，采集標(biāo)本放于盛有細(xì)胞保存液的小瓶中，－20℃冷凍保存待檢。

1.4 HPV分型檢測(cè)步驟 ①HPV-DNA提取;②HPV-DNA PCR擴(kuò)增;③核酸分子快速導(dǎo)流雜交;④顯色HPV分型。操作和結(jié)果判讀嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。19種HPV分為高危型和低危型。HPV亞型高危型有 16 種，包括 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、cp8304;HPV 亞型低危型有3種，分別為6、11和43。有≥2個(gè)型為多重感染(無(wú)論高危型和低危型)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 列表資料分析，以百分率作為HPV感染與宮頸病變的評(píng)價(jià)指標(biāo)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)多重感染者各亞型陽(yáng)性率重復(fù)計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 婦女HPV感染檢出率(表1) 應(yīng)用HPV基因分型的情況，895例女性中HPV基因檢測(cè)陽(yáng)性82例，陽(yáng)性率9.16%，高危 HPV亞型71例，陽(yáng)性率7.93%(71∕895)，高危人數(shù)結(jié)構(gòu)百分比占 86.58%(71∕82);低危 HPV亞型陽(yáng)性11例，占1.22%，低危人數(shù)結(jié)構(gòu)百分比13.41%(11∕82)。

表1 各年齡段婦女HPV感染檢出率［n(%)］

2.2 不同年齡組的HPV基因分布(表2和表3)82例HPV陽(yáng)性中，以HPV16亞型檢出率最高，占總陽(yáng)性率的32.93%(27∕82)，占高危38%;最低是HPV18、并為二重感染，占陽(yáng)性 1.22%，占高危1.41%;其它型別以感染率高低依次為 HPV52(12.20%)、58(10.97%)、cp8304(8.54%)、66(8.54%)、53(6.10%)、68、31、56、33 各 3 例，分別占(3.65%)，59、51、39 分別占 2.44%，多重感染占高危15.85%，其中與16、cp8304多重感染為主，感染率 28.50%，其次分別與 68、66多重分別占(21.43%，14.28%)5 個(gè)型 1 例占 7.1%，低危亞型HPV 6占總陽(yáng)性 9.76%，占低危感染 72.73%，HPV11(6.10%)，占低危感染 45.45%，低危型 43沒(méi)有檢測(cè)出。

表2 各基因型在不同年齡組的HPV基因分布［n(%)］

表3 多重感染在各年齡組的基因分布(n)

3 討論

本研究中HPV檢測(cè)陽(yáng)性率9.16%，與之前有報(bào)道的甘肅地區(qū)的感染率29.5%相比較低，并低于浙江省臺(tái)州地區(qū)35.08%，北京地區(qū)的57.1%，深圳17.5%，呼和浩特地區(qū)13.04%及山西省高發(fā)區(qū)的27.5%，與西藏地區(qū) 9.19% 相接近［2］。最常見(jiàn)的HPV基因型為16型，與全球范圍內(nèi)的最常見(jiàn)感染亞型一致，除52，58，cp8304感染亞型也呈上升趨勢(shì)，而與國(guó)外常見(jiàn)的HPV18型較少見(jiàn)，提示HPV感染的型別具有人群和地域特點(diǎn)。

3.1 HPV感染的分型分布 國(guó)際癌癥研究所(IARC)新近發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌患者中除HPV16外，HPV45，31，33 較常見(jiàn)，多數(shù)亞洲國(guó)家研究顯示［3-5］，HPV52，58 的感染率高于 HPV45，31，33。本研究發(fā)現(xiàn)，不同年齡組各基因型陽(yáng)性感染率不同，HPV16是最常見(jiàn)的基因型，在總體及各年齡組中的陽(yáng)性率均居首位，與世界范圍的研究結(jié)果一致［3-7］。HPV52，58僅次于HPV16，符合亞洲人群研究結(jié)果。

3.2 HPV感染對(duì)比分析 本研究中HPV cp8304，66，53陽(yáng)性率較高，HPV18陽(yáng)性率較低，與以往采用其他方法的研究結(jié)果不同，有關(guān)研究香港2 080例中國(guó)籍?huà)D女宮頸癌篩查中，結(jié)果均提示除HPV16，52，58 外，HPVcp8304，53，66 在中國(guó)人中較常見(jiàn)，而HPV18的感染率低于其他國(guó)家，顯示具有人群和地域特點(diǎn);對(duì)潮州農(nóng)村地區(qū)HPV感染率的調(diào)查表明:人乳頭狀瘤病毒52，16，58，33，68 和 18 型為該地區(qū)最為常見(jiàn)的感染類(lèi)型，其中52和/或58型的感染率顯著高于16和/或18型的感染率［8］;2009年有研究報(bào)道:甘肅地區(qū)HPV 感染亞型依次16，52，58，31，18，6，68，53，33，11，而 cp8304，66，僅占 0.1% ～3.1%，出現(xiàn)上述結(jié)果還可能與下列情況有關(guān):①以往研究較少檢測(cè)cp8304，53，66，其感染狀況未被認(rèn)識(shí);②上述基因型在宮頸癌患者中并不常見(jiàn)，而以往多數(shù)研究集中在宮頸癌患者，對(duì)普通人研究較少。

3.3 HPV感染的年齡分布 本研究發(fā)現(xiàn)＜35歲女性低危HPV相對(duì)占優(yōu)勢(shì)，以HPV6的陽(yáng)性遠(yuǎn)較其他年齡段高，且隨年齡增加陽(yáng)性率明顯遞減，而＞25歲女性高危型感染逐漸增多，尤其在40～45歲年齡組，高危型HPV16，52，58的陽(yáng)性率較高，雖然在年輕人群中HPV感染多是一過(guò)性的，且低危型的感染較多見(jiàn)，但35歲之后高危型HPV的持續(xù)感染是宮頸癌的直接原因，存在宮頸癌發(fā)生的高危因素，應(yīng)重視該現(xiàn)象，結(jié)合宮頸陰道鏡、宮頸液基細(xì)胞(TCT)、宮頸組織活檢以及HPV DNA定量，早期防治。

3.4 關(guān)于HPV多重感染 宮頸癌的發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚，但HPV感染已被流行病學(xué)和生物學(xué)證明是引起宮頸癌及癌前病變的必要因素［9］。HPV多重感染是否增加宮頸癌的發(fā)生?對(duì)此問(wèn)題爭(zhēng)議較多，有學(xué)者認(rèn)為多重感染并不增加宮頸癌的發(fā)生，HPV感染的型別數(shù)與宮頸病變級(jí)別有關(guān)，但也有不少學(xué)者認(rèn)為多重感染與宮頸病變有關(guān)。Ho等［10］認(rèn)為HPV多重感染出現(xiàn)持續(xù)感染的危險(xiǎn)性更大，其是宮頸病變發(fā)生的原因，因此多重感染易導(dǎo)致宮頸病變。Lee等［11］認(rèn)為，多重感染發(fā)生宮頸癌的危險(xiǎn)比單一型感染者增加約1.5倍，因此本研究結(jié)果值得重視。

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