兒童與成人彌漫大B細胞淋巴瘤的Hans、Choi免疫分型和C-MYC基因特征

徐紅艷，黃 慧，楊文萍*，黃傳生，鐘梅慧

(1.江西省兒童醫(yī)院病理科;2.江西省腫瘤醫(yī)院病理科，江西南昌330006)

彌漫大B細胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)是成人最常見的成熟B細胞淋巴瘤，占成人非霍奇金淋巴瘤(NHL)的30% ～40%［1］，國外報道僅占兒童NHL的10%［2］。目前，國內(nèi)外報道DLBCL的病例大多是針對成人或所有的發(fā)患者群，缺少系統(tǒng)的兒童與成人DLBCL的免疫分型及分子遺傳學(xué)特征的比較研究，研究表明兒童和成人DLBCL在免疫表型及分子遺傳學(xué)等方面有一定的差異，此差異與患者的治療及預(yù)后密切相關(guān)［3－4］。因此本研究從收集到的NHL中隨機選取了17例兒童DLBCL作為實驗組，43例成人DLBCL作為對照組，進行免疫表型及C-MYC基因檢測，旨在了解兒童與成人DLBCL的免疫分型及分子遺傳學(xué)特征，為臨床的治療及預(yù)后判斷提供有價值的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病例資料

隨機選取了江西省兒童醫(yī)院病理科1984年9月－2011年7月和江西省腫瘤醫(yī)院病理科2005年1月－2011年7月資料較完善的存檔標(biāo)本60例，其中兒童組17例，成人組43例。診斷標(biāo)準參照2008年WHO造血與淋巴組織腫瘤分類［1］。所有標(biāo)本均經(jīng)4%中性甲醛液固定、石蠟包埋、4 μm厚切片、HE染色、光鏡觀察。隨訪截止時間為2012-03-31，采用電話或書信形式進行隨訪，臨床資料來源于病歷記載。

1.2 免疫組化染色

免疫組化SP法染色試劑盒和一抗(均Invitrogen公司)，操作按試劑盒說明書進行。30%以上的腫瘤細胞出現(xiàn)棕黃色為陽性。免疫表型根據(jù)Hans分型將DLBCL分為生發(fā)中心B細胞型(GCB型)和非生發(fā)中心 B細胞型(non-GCB型)(圖1A)［2］，根據(jù)Choi分型將DLBCL分為GCB型和活化的B細胞型(ABC 型)(圖1B)［3］。

1.3 FISH檢測

所用探針為C-MYC雙色分離重排探針(北京金菩嘉醫(yī)療科技有限公司)。實驗操作和結(jié)果判定參照文獻［5］。正常信號為2黃，基因斷裂信號為1紅、1綠及1黃。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)分析軟件，生存曲線分析采用Kaplan-Meier法，單因素生存曲線比較采用Logrank檢驗，率的比較用χ2檢驗，不滿足χ2檢驗條件時用Fisher精確概率法。

2 結(jié)果

2.1 病理組織形態(tài)

兒童DLBCL中15例為中心母細胞特征(圖2):細胞較大，核圓形、卵圓形，可見2～4個核仁靠近核膜或單個核仁，核分裂象多;2例表現(xiàn)為細胞多形性、間質(zhì)較多的纖維組織間隔。成人DLBCL中33例為中心母細胞型;8例呈中心母細胞和免疫母細胞混合性形態(tài)特征;1例為間變大細胞變型;1例為富T細胞變型。

圖3 免疫表型陽性Fig 3 Immune phenotype positive

2.2 免疫組化結(jié)果

17例兒童 DLBCL中 CD10(圖 3A)、BCL-6(圖3B)、MUM1、FOXP1、GCET1 和 CD5 的表達率分別為9、8、5、5、11 和 0例。43例成人 DLBCL 中 CD10、BCL-6、MUM1(圖 3C)、FOXP1(圖 3D)、GCET1(圖3E)和 CD5(圖 3F)的表達率分別 1、28、28、29、11 和4例。Hans分型:17例兒童DLBCL中GCB型11例(64.7%)，non-GCB型6例(35.3%);43例成人DLBCL中 GCB型 9例(20.9%)，non-GCB型 34例(79.1%)。Choi分型:17例兒童DLBCL中GCB型13例(76.5%)，ABC型4例(23.5%);43例成人DLBCL中GCB型13例(30.2%)，ABC型30例(69.8%)。兒童組Hans分型和Choi分型總一致率為76.4%(13/17)，成人組Hans分型和Choi分型總一致率為74.4%(32/43)。

2.3 FISH結(jié)果

17例兒童DLBCL中C-MYC基因斷裂5例(29.4%)(圖4);43例成人DLBCL中C-MYC基因正常信號43例(100%)。

2.4 統(tǒng)計學(xué)分析

圖4 C-MYC基因斷裂Fig 4 C-MYC gene disruption(×1000)

兒童DLBCL的Hans及Choi分型與成人比較(P＜0.05);兒童DLBCL的Hans及Choi分型不同亞型的3年生存率(OS)比較無差異;成人DLBCL Hans及Choi分型不同亞型3年OS比較(P＜0.05)(圖5);成人DLBCL組年齡＞55歲患者CD5陽性率明顯高于年齡≤55歲者(P＜0.01);兒童DLBCL中CMYC基因斷裂顯著高于成人DLBCL(P＜0.01)。

3 討論

圖5 成人DLBCL Hans分型不同亞型及DLBCL Choi分型不同亞型的3年OSFig 5 Hans and Choi typing different subtypes of OS for 3 years in adult DLBCL

2000年通過對基因表達譜結(jié)果將DLBCL分為GCB型和ABC型，GCB型5年生存率為50%以上，而ABC型5年生存率不到20%［5］。隨后根據(jù)CD10、BCL-6、MUM1蛋白表達情況，將DLBCL分為GCB型和non-GCB型，CD10和BCL-6陽性表達者預(yù)后較好［6］。后來在 Hans分型的基礎(chǔ)上新增了GCET1及FOXP1，將84例DLBCL分為GCB型和ABC型，其中GCB型49例，ABC型35例，兩者的5年生存率分別為61%和41%。約75%兒童DLBCL為GCB型，而成人只有22% ～50%為GCB型［7－11］，這可以解釋兒童 DLBCL 預(yù)后較成人DLBCL好的原因。本研究兒童組Hans分型和Choi分型總一致率為75%(9/12)，成人組Hans分型和Choi分型總一致率為76.7%(33/43)。兒童組以GCB型為主，分型與預(yù)后無關(guān);成人組以non-GCB型或ABC型為主，GCB型的3年OS顯著高于non-GCB型或ABC型。

有研究把DLBCL分為CD5+DLBCL和CD5－DLBCL，約10%DLBCL表達CD5，多發(fā)生于老年女性結(jié)外組織，預(yù)后較差［8］，也有研究表明 CD5+DLBCL并不提示預(yù)后較差［9］。本研究兒童DLBCL組未見CD5陽性表達，成人DLBCL組CD5表達4例(9.3%)，年齡為56～73歲之間，其中3例為發(fā)生在頸部淋巴結(jié)的男性患者，1例發(fā)生在女性乳腺，4例患者生存時間為3～62月，死亡2例。

有報道在兒童DLBCL中，C-MYC基因重排率為25% ～35%［10］。報道的16例10～18歲兒童結(jié)內(nèi)DLBCL中，有6例(37%)存在C-MYC基因易位，其中5例為GCB型［11］。兒童結(jié)內(nèi)DLBCL中C-MYC基因易位者預(yù)后也較好，可能與兒童DLBCL多為GCB型有關(guān)。在成人DLBCL中，C-MYC基因重排率為 5% ～ 15%［12］，且與預(yù)后不良有關(guān)［13］。本組17例兒童DLBCL中，4例(23.5%)存在C-MYC基因重排，均為GCB型，病變部位分別為頸部淋巴結(jié)1例(7歲)、胃1例(13歲)、腸系膜淋巴結(jié)1例(6歲);其中1例術(shù)后2個月死亡(未化療)，1例至隨訪結(jié)束時生存 34個月，失訪 1例。43例成人DLBCL中，無 C-MYC基因重排病例，與文獻報道［14－15］有差異，可能與實驗所選標(biāo)本或本地區(qū)的特點有關(guān)。

總之，兒童DLBCL以GCB型為主，預(yù)后較好;成人DLBCL以non-GCB或ABC型為主，預(yù)后相對較差，兒童DLBCL的C-MYC基因斷裂明顯高于成人，且以GCB型為主，預(yù)后較好。但由于本組兒童病例較少，還有待于今后積累資料進一步研究。

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