高效液相色譜法測定枳實導(dǎo)滯丸中辛弗林含量

曲楠楠

(黑龍江省雞西市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江 雞西 158100)

枳實導(dǎo)滯丸由枳實、黃芩、黃連、大黃等8味藥材的細(xì)粉經(jīng)用水泛丸制成[1]，具有消積導(dǎo)滯、清利濕熱功能。中國藥典中其含量測定項下采用薄層掃描法測定橙皮苷的含量，未對其他成分進(jìn)行檢測。筆者用高效液相色譜(HPLC)法測定其中辛弗林的含量，簡便有效?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

HP1100型高效液相色譜儀，HP1100工作站(自動進(jìn)樣，紫外檢測器);Sartorius電子天平(CP225D);KQ－400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器;TU－1901型雙光束紫外－可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。辛弗林對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110727－200306);枳實導(dǎo)滯丸(吉林龍鑫藥業(yè)有限公司，批號為100206);甲醇(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號為20110408)為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Agilent Eclipse XDB C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－水(0.18%含磷酸和0.22%十二烷基磺酸鈉，55∶45);檢測波長:274 nm;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL;柱溫:30℃。理論板數(shù)按辛弗林峰計算，應(yīng)不低于4 000。按上述色譜條件進(jìn)樣，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取經(jīng)80℃干燥至恒重的辛弗林對照品31.02 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成每1 mL含辛弗林31 μg的溶液，作為對照品貯備液。取本品粉末約0.1 g，精密稱定，加甲醇40 mL，加熱回流90 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，定量轉(zhuǎn)移至2 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按枳實導(dǎo)滯丸的處方(枳實、大黃、黃連、黃芩、六神曲、白術(shù)、茯苓、澤瀉，來源為市售，經(jīng)我所中藥室鑒定)，不加枳實，制備陰性樣品，依法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取對照品貯備液，按上述色譜條件，分別進(jìn)樣 1，5，10，20，30 μL，以峰面積(Y)對應(yīng)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程 Y=226.07X+36.075 6，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，辛弗林質(zhì)量濃度在3.1～93 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:取對照品溶液(0.141 2 g/L)，重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果峰面積的 RSD為0.3%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，分別在 0，2，4，6，8，10 h 時重復(fù)進(jìn)樣。結(jié)果峰面積的 RSD為0.9%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:取同一批樣品(批號為100206)，依法制備5份供試品溶液，分別測定色譜峰面積。結(jié)果平均含量為0.62 mg/g，RSD為0.3%(n=5)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗:精密稱取辛弗林對照品14.12 mg，置10 mL量瓶中，制成質(zhì)量濃度為1.412 g/L的對照品溶液。精密稱取已知含量的樣品(批號為100206)約0.5 g，6份，分別加甲醇40 mL，加熱回流90 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至2 mL量瓶中，分別精密加入辛弗林對照品溶液(1.412 g/L)0.1，0.1，0.2，0.2，0.3，0.3 mL，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，用微孔濾膜濾過，進(jìn)樣。結(jié)果見表1。

表1 辛弗林加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3批不同廠家的市售樣品，按2.2項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定峰面積，用外標(biāo)法以峰面積計算。批號分別為110629，100206，101026的樣品中辛弗林含量分別為0.4698，0.623 4，0.603 3 mg/g。

3 討論

取對照品溶液，照紫外分光光度法，在200～600 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果辛弗林在274 nm波長處有最大吸收，故選擇測定波長為274 nm。

分別采用了甲醇－水(0.1%磷酸和0.1%十二烷基磺酸鈉，43∶57)、甲醇 －水(0.1%十二烷基磺酸鈉和 0.05%磷酸，52∶48)[2－3]以及文中方法進(jìn)行試驗，比較幾種流動相的適用性，發(fā)現(xiàn)文中的流動相比例更適宜待測成分的分離，故采用此種流動相。

本品的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有橙皮苷的含量測定且是薄層色譜掃描法，這給質(zhì)量監(jiān)測帶來一定的難度，也很難保證中藥“安全、有效、質(zhì)量可控”。本法的建立，對現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)是有效的補充和提高。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:876－877.

[2]許 妍，付輝政.RP－HPLC法測定枳實中辛弗林的含量[J].藥品評價，2005(6):39－40.

[3]歐陽榮.枳實不同炮制品中辛弗林的含量考察[J].中國藥房，2005，16(5):395－396.