HMGB1在panc-1荷瘤裸鼠束縛應(yīng)激模型移植瘤中的表達(dá)及意義

姜旭平，李玉軍 (青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，山東 青島 266003)

胰腺癌是一種惡性度高、預(yù)后極差的惡性腫瘤，患者5年生存率不足2%，各種綜合因素導(dǎo)致腫瘤發(fā)生和惡化。筆者旨在探討心理應(yīng)激對(duì)panc-1荷瘤裸鼠移植瘤中高遷移率族蛋白1(HMGB1)蛋白水平的影響，現(xiàn)將具體情況報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料:人胰腺癌細(xì)胞株panc-1(中國協(xié)和醫(yī)院微生物實(shí)驗(yàn)室);BALB/C(nu/nu)裸小鼠，雄性，4～6周齡，體質(zhì)量15～18 g(上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司);HMGB1抗體和caspase3抗體(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)等。

1.2 方法:①建立裸鼠胰腺癌移植瘤束縛應(yīng)激模型:裸鼠飼養(yǎng)在相對(duì)無菌的環(huán)境中，將20只裸鼠隨機(jī)分為兩組:單純荷瘤組(a組)和荷瘤加應(yīng)激組(b組)，每組10只。b組在腫瘤后給予束縛(每天10:00AM～6:00PM，共2周)，a組正常活動(dòng)。結(jié)束后處死全部裸鼠，取移植瘤，具體步驟參考文獻(xiàn)［1-3］。②免疫組化:采用PV-6001法，按試劑盒說明書進(jìn)行操作。結(jié)果判定:HMGB1表達(dá)于腫瘤細(xì)胞核，細(xì)胞質(zhì)中有微量表達(dá)，具體判定標(biāo)準(zhǔn)按許良中等所述［4］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有數(shù)據(jù)采用 SPSS16.0軟件進(jìn)行分析。數(shù)值資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗(yàn);等級(jí)資料采用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)秩和檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 荷瘤裸鼠體質(zhì)量和瘤質(zhì)量:實(shí)驗(yàn)前兩組裸鼠體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，a組實(shí)驗(yàn)后體質(zhì)量為(21.78±1.40)g，b組實(shí)驗(yàn)后體質(zhì)量為(20.26±1.10)g，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.713，P＜0.05)，束縛應(yīng)激使裸鼠體質(zhì)量增長緩慢。與a組相比，束縛應(yīng)激可使移植瘤質(zhì)量明顯增加［(0.96±0.41)g比(1.45 ±0.42)g，t=-2.685，P ＜0.05］。

2.2 免疫組化結(jié)果:b組移植瘤組織中HMGB1的陽性表達(dá)顯著高于 a組(Z=-2.500，P ＜0.05)，詳見表1。

表1 兩組裸鼠移植瘤組織中HMGB1的表達(dá)

3 討論

HMGB1是與染色體結(jié)合的非組蛋白成分之一，對(duì)維持核小體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定有著非常重要的意義，HMGB1可積極參與DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和修飾，對(duì)類固醇激素受體、NF-kB、P53等蛋白的轉(zhuǎn)錄進(jìn)行有效調(diào)節(jié)。有報(bào)道認(rèn)為，HMGB1參與腫瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制可能包括:①HMGB1的過表達(dá)引起某些基因表達(dá)失調(diào)，從而導(dǎo)致腫瘤表型;②HMGB1的過表達(dá)可使獲得腫瘤表型的細(xì)胞免于凋亡，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生;③通過與相關(guān)受體相結(jié)合(主要為RAGE和Toll-樣受體4)、改變細(xì)胞性能、調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)降解、調(diào)節(jié)血管新生、調(diào)節(jié)炎性微環(huán)境等方式促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，b組移植瘤組織中HMGB1的陽性表達(dá)顯著高于a組，提示應(yīng)激能刺激腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生HMGB1蛋白促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。其機(jī)制可能是應(yīng)激狀態(tài)引起神經(jīng)內(nèi)分泌及免疫功能改變，進(jìn)而引起體內(nèi)神經(jīng)內(nèi)分泌介質(zhì)和細(xì)胞因子的釋放失控，而HMGB1基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控與幾種類固醇激素有關(guān)，其中包括GC，而且IFN-γ、TNF-α、成熟THP-1巨噬細(xì)胞中轉(zhuǎn)化生長因子-β和人外周血中單核細(xì)胞能上調(diào)HMGB1的轉(zhuǎn)錄［5］。

總之，本文研究結(jié)果表明，心理應(yīng)激促進(jìn)PANC-1荷瘤裸鼠移植瘤生長的機(jī)制可能是通過激活神經(jīng)內(nèi)分泌信號(hào)傳導(dǎo)通路，上調(diào)HMGB1的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。

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