心脈康片成型工藝研究及辛弗林的含量測(cè)定

劉 仔 陳繼英 柯穎川 楊光英

1.廣東省東莞市中醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 東莞 523000；2.廣東省東莞市食品藥品檢定所，廣東 東莞 523000

心脈康片是根據(jù)李斐媛等[1]運(yùn)用軟堅(jiān)散結(jié)法防治動(dòng)脈粥樣硬化的經(jīng)驗(yàn)方，運(yùn)用現(xiàn)代的制藥技術(shù)研制而成的中藥制劑。心脈康片相對(duì)傳統(tǒng)的心脈康湯具有服用攜帶方便、穩(wěn)定性好、易于儲(chǔ)存等優(yōu)點(diǎn)。近年來(lái)對(duì)心脈康方及心脈康片進(jìn)行了較深入的臨床研究。余沛揚(yáng)等[2]報(bào)道，64例腦動(dòng)脈硬化癥患者隨機(jī)分為治療組 （心脈康方組）33例和對(duì)照組（尼莫地平組）31例，療程均為4周。結(jié)果顯示心脈康湯劑與尼莫地平對(duì)腦血管硬化癥主要癥狀及平均血流速度有改善，但心脈康方組湯劑對(duì)頭暈頭痛、頭昏感、精神萎靡、行動(dòng)遲緩、健忘等臨床癥狀的改善優(yōu)于尼莫地平。鄧志剛等[3]報(bào)道，頸動(dòng)脈內(nèi)膜-中層（IMT）增厚與斑塊形成的患者，隨機(jī)分成心脈康組、血脂康組、西藥組，分別給予心脈康片、血脂康膠囊、辛伐他汀6個(gè)月，三組患者的頸動(dòng)脈IMT與斑塊均有消退，但以心脈康組更為顯著。而且心脈康片能更有效降低頸動(dòng)脈粥樣硬化患者血清hsCRP，從而降低急性心肌梗死、急性腦梗死等心腦血管并發(fā)癥[4]。筆者先前已經(jīng)對(duì)心脈康片中的主要成分枳實(shí)、三棱、莪術(shù)進(jìn)行定性鑒別和莪術(shù)中莪術(shù)醇進(jìn)行含量測(cè)定[5]；本文主要從成型工藝和測(cè)定心脈康片中另一個(gè)重要的有效成分辛弗林含量的角度對(duì)心脈康片進(jìn)行更深入的研究，為了更好地制備和控制該制劑的質(zhì)量提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

熱循環(huán)回流提取濃縮回收機(jī)組（衡陽(yáng)永暉制藥設(shè)備有限公司）；V型高效混合機(jī)（V-500，衡陽(yáng)永暉制藥設(shè)備有限公司），槽型混合機(jī)（CH-200，衡陽(yáng)永暉制藥設(shè)備有限公司）；搖擺式顆粒機(jī) （YK160，衡陽(yáng)永暉制藥設(shè)備有限公司）；超微粉碎機(jī)（WFJ-15，衡陽(yáng)永暉制藥設(shè)備有限公司）和熱風(fēng)循環(huán)烘箱（CT-C，衡陽(yáng)永暉制藥設(shè)備有限公司）；旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)（ZP-19，上海天祥·健臺(tái)制藥設(shè)備有限公司）；片劑四用測(cè)定儀78X-02型 （上海西域機(jī)電系統(tǒng)有限公司）；電子分析天平FA1104N（上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司）；Agilent1200高效液相色譜儀 （美國(guó)Agilent公司）；AG-245電子分析天平（瑞士梅特勒公司）。

1.2 試藥

醋鱉甲（批號(hào)：20110902）、醋三棱（批號(hào)：20120215）、醋莪術(shù)（批號(hào)：20120123）、枳實(shí)（批號(hào)：20120118）、膽南星（批號(hào)：20120116）和有瓜石斛（批號(hào)：20120121），均為東莞市國(guó)藥集團(tuán)中藥飲片公司提供；心脈康片 （批號(hào)：20120623、20120701、20120705，本院自制）；辛弗林對(duì)照品（批號(hào)：0727-200105，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純，其他所用試劑均為AR級(jí)。

2 成型工藝的研究

2.1 片型的選擇

中藥片劑按其制備用的原料特性有四種類(lèi)型：提純片、全粉末片、全浸膏片和半浸膏片[6]。筆者根據(jù)處方特點(diǎn)選擇了半浸膏片，也就是將處方部分飲片細(xì)粉與其余藥料制得的稠膏混合制成的片劑。本品由醋鱉甲、醋三棱、醋莪術(shù)、枳實(shí)、膽南星和有瓜石斛六味中藥材組成。經(jīng)過(guò)大量的預(yù)實(shí)驗(yàn)研究，初步擬定心脈康片的制法為：將醋三棱和醋莪術(shù)各一半藥材粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，得粉①；剩余醋三棱、醋莪術(shù)及另外四味加水提取濃縮成稠膏，干燥成干膏，粉碎成細(xì)粉，得粉②；將粉①與粉②混勻，加輔料適量，制成顆粒，壓片。根據(jù)此制法，下面重點(diǎn)對(duì)心脈康片的成型工藝進(jìn)行研究。

2.2 成型工藝的研究

2.2.1 填充劑的選擇 采用單因素實(shí)驗(yàn)法，以制粒難易、壓片情況、片劑的外觀、硬度和崩解時(shí)限為考察指標(biāo)對(duì)淀粉、糖粉、糊精3種填充劑進(jìn)行考察。結(jié)果見(jiàn)表1，淀粉為填充劑時(shí)均出現(xiàn)裂片現(xiàn)象，糖粉為填充劑時(shí)均出現(xiàn)粘沖現(xiàn)象，糊精壓制的片劑外觀和硬度較好。因此選擇糊精為填充劑。

表1 填充劑的選擇試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2.2 潤(rùn)濕劑和黏合劑的選擇 采用單因素實(shí)驗(yàn)法，以制粒難易、顆粒的硬度、壓片情況、片劑的外觀、硬度和崩解時(shí)限為考察指標(biāo)，對(duì)水、不同濃度的乙醇、淀粉漿、羧甲基纖維素鈉溶液進(jìn)行考察。結(jié)果見(jiàn)表2，以水、淀粉漿、羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑時(shí)，軟材的黏性太大，制粒過(guò)篩困難，而且制得的顆粒偏硬，壓片時(shí)出現(xiàn)裂片，片劑外觀不夠光滑。以50%乙醇為黏合劑時(shí)，容易制粒和壓片，片劑外觀、硬度和崩解時(shí)限都符合要求。因此，選擇50%乙醇為潤(rùn)濕劑。

表2 潤(rùn)濕劑和黏合劑的選擇試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2.3 顆粒烘干溫度和時(shí)間的選擇 壓片物料中的醋三棱粉和醋莪術(shù)粉含有揮發(fā)油，為了更好地保留有效成分，選擇60℃為顆粒烘干溫度。以干顆粒的水分含量為指標(biāo)，對(duì)顆粒烘干時(shí)間進(jìn)行考察。試驗(yàn)結(jié)果顯示：當(dāng)烘干時(shí)間為2 h時(shí)，干顆粒的水分含量在4%～6%。因此選擇2 h為顆粒的烘干時(shí)間。

2.2.4 潤(rùn)滑劑的選擇 壓片前必須加入潤(rùn)滑劑，增加顆粒流動(dòng)性，減少顆粒與沖模的摩擦力。常用潤(rùn)滑劑有滑石粉和硬脂酸鎂，經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定硬脂酸鎂為潤(rùn)滑劑更適用于本品。采用單因素實(shí)驗(yàn)法，以是否粘沖和片劑外觀為考察指標(biāo)，對(duì)硬脂酸鎂的用量進(jìn)行考察。試驗(yàn)分別考察了質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.3%、0.5%、0.8%的硬脂酸鎂，結(jié)果表明，當(dāng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.3%時(shí)有粘沖現(xiàn)象；質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%和0.8%時(shí)，無(wú)粘沖現(xiàn)象，而且片劑外觀完整光潔。從物料成本考慮，選擇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的硬脂酸鎂為心脈康片的潤(rùn)滑劑。

2.2.5 最佳成型工藝 經(jīng)過(guò)選優(yōu)心脈康片的最佳成型工藝確定為：以糊精為填充劑，50%乙醇為潤(rùn)濕劑，干法制粒，60℃烘干2 h，0.5%硬脂酸鎂為潤(rùn)滑劑，壓片，即得。

2.3 成型工藝的驗(yàn)證

根據(jù)“2.2.5”項(xiàng)下的成型工藝制備三批心脈康片（批號(hào)：20120623、20120701、20120705）；結(jié)果顯示：三批樣品外觀完整光潔，硬度平均為4.6 kg，崩解時(shí)間分別為16、14、17 min，片重差異均符合片劑的要求。

3 辛弗林的含量測(cè)定

3.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil 100-5 C18反相柱 （5 μm×250 mm×4.6 mm）；流動(dòng)相：甲醇-磷酸二氫鉀水溶液（50∶50）；流速：1 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：275 nm；進(jìn)樣量：20 μL。在上述色譜條件下，辛弗林與其他組分峰能達(dá)到基線分離。

3.2 溶液的制備

3.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥4 h的辛弗林對(duì)照品適量，加水稀釋成24.5 μg/mL的溶液作對(duì)照品溶液。

3.2.2 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取樣品細(xì)粉（10片），置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)定重量，加熱回流1.5 h，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液10 mL，蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，搖勻，通過(guò)聚酰胺柱（60～90 目，2.5 g，內(nèi)徑 1.5 cm，干法裝柱），用水25 mL洗脫，收集洗脫液，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，作供試品溶液。

3.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取缺少枳實(shí)的心脈康片處方藥材，按照制備工藝配制心脈康片，然后按照供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

3.3 方法的專(zhuān)屬性考察

按照“3.1”項(xiàng)下的色譜條件，對(duì)對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液進(jìn)行分析，結(jié)果陰性對(duì)照溶液無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

3.4 線性關(guān)系的考察

精密稱(chēng)取辛弗林對(duì)照品16.32 mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別取此溶液 1.0、2.0、4.0、8.0、20.0 mL，置 50 mL 量瓶中，用水稀釋得系列標(biāo)準(zhǔn)液。取儲(chǔ)備液及系列標(biāo)準(zhǔn)液各20 μL進(jìn)樣，記錄峰面積。以峰面積A對(duì)濃度X（μg/mL）計(jì)算，得回歸方程：A=9318.3X+623.2（r=0.9999，n=6），呈良好線性關(guān)系。結(jié)果表明，辛弗林對(duì)照品的進(jìn)樣量在0.06528～1.30560 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖1 辛弗林對(duì)照品、心脈康片和陰性對(duì)照溶液的HPLC圖譜

3.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取上述對(duì)照品溶液按照“3.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，測(cè)得峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.23%（n=6），實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在該條件下儀器精密度良好。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一批供試品溶液（批號(hào)：20120623），分別在配制后 0、2、4、6、8、24 h 進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)得峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.36%（n=6），表明供試品溶液在配制后24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn)

分別精密稱(chēng)取同一批心脈康片樣品（批號(hào)：20120623）6份，按照供試品溶液制備方法制備，依法測(cè)定辛弗林含量，結(jié)果平均含量為 1.4132 mg/g，RSD 為 1.2%（n=6），表明該方法重現(xiàn)性較好。

3.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取6份同一批（批號(hào)：20120623）已知含量（1.4132 mg/g）的樣品粉末1 g，分別置于具塞錐形瓶中，精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液（0.1632 mg/mL）10 mL，照本品含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定并計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為98.35%，RSD為1.19%（n=6），表明本方法準(zhǔn)確度良好。見(jiàn)表3。

3.9 樣品含量的測(cè)定

取三批心脈康片樣品 （批號(hào)：20120623、20120701、20120705），按“3.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作，以“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，每批樣品測(cè)定3次取平均值，按外標(biāo)法計(jì)算每1克心脈康片中辛弗林的含量，結(jié)果分別為1.41、1.36、1.44 mg。本品每1克心脈康片含辛弗林不得少于1.25 mg。

表3 辛弗林加樣回收率結(jié)果

4 討論

心脈康片是選擇半浸膏片法進(jìn)行制備的，醋三棱和醋莪術(shù)一半粉碎成細(xì)粉入藥，既可以作為填充劑，又可以使片劑具有較好的崩解時(shí)限。筆者考察了水、不同濃度的乙醇溶液、1%羧甲基纖維素鈉溶液、10%淀粉漿為制粒的黏合劑和潤(rùn)濕劑，其中以50%乙醇作為制粒的潤(rùn)濕劑壓片，片劑的外觀、硬度、片重差異和崩解時(shí)限均達(dá)到要求，效果較好。50%乙醇本身無(wú)黏性，但是可潤(rùn)濕物料并誘發(fā)片中干浸膏本身的黏性，使能聚結(jié)成軟材并制成顆粒。經(jīng)過(guò)三批樣品的制備，證實(shí)了該成型工藝合理可行。經(jīng)過(guò)辛弗林含量測(cè)定方法學(xué)的考察，證實(shí)該含量測(cè)定方法準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好，適用于測(cè)定心脈康片中辛弗林的含量，可以更好地控制該制劑的質(zhì)量。

筆者對(duì)心脈康片辛弗林含量測(cè)定的流動(dòng)相中的磷酸二氫鉀水溶液配制方法進(jìn)行考察，《中國(guó)藥典》2010年版的配制方法為：取磷酸二氫鉀0.6 g，十二烷基磺酸鈉1.0 g，冰醋酸1 mL，加水溶解并稀釋至1000 mL[7]，所配制得到的溶液氣泡非常多，經(jīng)過(guò)加熱或超聲處理后依然不減少，與甲醇以（50∶50）混合配制得到溶液，經(jīng)微孔濾膜法抽濾后氣泡仍然比較多，以此配制得到的流動(dòng)相使色譜柱的壓力增大，影響色譜柱的使用壽命。后來(lái)筆者把十二烷基磺酸鈉的用量調(diào)整為0.5 g，也就是磷酸二氫鉀水溶液配制方法為：取磷酸二氫鉀0.6 g，十二烷基磺酸鈉0.5 g，冰醋酸1 mL，加水溶解并稀釋至1000 mL，配制得到的溶液氣泡比較少，與甲醇以（50∶50）配制得到的混合溶液，經(jīng)微孔濾膜法抽濾后幾乎沒(méi)有氣泡，作為流動(dòng)相時(shí)，色譜柱的壓力平穩(wěn)，而且色譜效果比較好。

動(dòng)脈粥樣硬化是以血管中層內(nèi)膜厚度增厚、粥樣斑塊形成為主要表現(xiàn)的波及全身大、中型彈力型血管的系統(tǒng)性疾病[8]；是一類(lèi)由遺傳、環(huán)境因素及其之間的相互作用引起的多基因疾病[9]。動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成是人類(lèi)沉寂的殺手。血液在動(dòng)脈內(nèi)凝固是引發(fā)心肌局部缺血、冠心臟、中風(fēng)的一個(gè)重要因素，現(xiàn)全球28%的死亡率歸結(jié)于動(dòng)脈粥樣硬化血栓所導(dǎo)致，而且呈不斷上升趨勢(shì)[10]，多見(jiàn)于40歲以上男性及絕經(jīng)期女性，以腦力勞動(dòng)者較多見(jiàn)，對(duì)人們健康危害甚大。因此具有軟堅(jiān)散結(jié)，化痰通絡(luò)功效的醫(yī)院制劑心脈康片成功研發(fā)，可為廣大心血管患者，特別是痰濁瘀血互結(jié)型的動(dòng)脈粥樣硬化的患者帶來(lái)新的療效好、價(jià)格便宜、質(zhì)量可靠的藥品；并有利于我國(guó)中醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展，具有重大的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)意義，推廣和應(yīng)用前景廣闊。

[1]李斐媛，葉小漢.從積聚內(nèi)生論治動(dòng)脈粥樣硬化[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，27（6）：633-635.

[2]余沛揚(yáng)，許獻(xiàn)文.軟堅(jiān)散結(jié)法治療腦動(dòng)脈硬化癥的臨床觀察[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2011，17（18）：157.

[3]鄧志剛，陳靜，葉小漢，等.軟堅(jiān)散結(jié)方對(duì)頸動(dòng)脈粥樣硬化治療的臨床觀察[J].中醫(yī)臨床研究，2012，4（10）：19-20.

[4]鄧志剛，陳靜，葉小漢，等.心脈康對(duì)頸動(dòng)脈硬化患者高敏C反應(yīng)蛋白及臨床事件的影響[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2012，10（15）：601-602.

[5]柯穎川，吳謀，陳繼英.心脈康片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].科技創(chuàng)新導(dǎo)報(bào)，2010，（34）：226-227.

[6]狄留慶，劉漢清.中藥藥劑學(xué)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2011：170.

[7]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：230.

[8]趙杰，張明輝，楊玉斌，等.老年高血壓患者動(dòng)脈粥樣硬化差異的比較及可能的危險(xiǎn)因素分析[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)，2012，14（8）：16-17.

[9]Roy H，Bhardwaj S，Herttuala YS.Molecular genetics of atheros clerosis[J].Hum Genet，2009，125（5-6）：467-491.

[10]趙明中.全球性動(dòng)脈粥樣硬化血栓病人健康調(diào)查啟動(dòng)——REACH調(diào)查研究以及提高居全球致死率榜首的動(dòng)脈粥樣硬化血栓疾病的認(rèn)識(shí)[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊，2004，6（3）：234.