阿魏酸糖酯的性能分析

馬波

【摘 要】文章測定了合成阿魏酸糖脂的抗氧化性，結(jié)果表明用0.62%的阿魏酸糖脂浸泡的蘋果，阿魏酸葡糖酯抑制效應(yīng)在處理后4天最明顯，抑制率為36.92%，阿魏酸木糖酯抑制效應(yīng)在處理后8天最明顯，抑制率為 19.47%。對于果實的內(nèi)源乙烯釋放，經(jīng)阿魏酸葡糖酯和阿魏酸木糖酯處理的蘋果分別推遲乙烯釋放高峰期6天和4天。

【關(guān)鍵詞】阿魏酸葡糖酯；抗氧化性

植物的衰老行為中的主要矛盾是活性氧，乙烯的產(chǎn)生和脂氧合酶（Lipoxygenase，簡稱LOX）起了協(xié)同作用，所以抗氧保鮮劑，主要考察對脂氧化酶活性的抑制，及對乙烯的抑制作用，這樣可能達(dá)到預(yù)期的效果。由于阿魏酸及其衍生物是一種營養(yǎng)性的安全可靠的食品添加劑，本文通過蘋果考察了合成阿魏酸葡糖酯的抗氧化性，即利用紫外光譜和氣相色譜法系統(tǒng)的考察了阿魏酸對脂氧化酶活性的抑制和內(nèi)源乙烯釋放的抑制效果，通過測試證實阿魏酸糖酯具有較好的抗氧化性，探索開發(fā)出一種安全高效的果蔬保鮮劑。

1.材料與 儀器

1.1實驗藥品與儀器

阿魏酸葡萄糖酯，阿魏酸木糖脂（天津工業(yè)大學(xué)提供）； 亞油酸（化學(xué)純，許昌元化生物科技有限公司）； 氫氧化鈉（分析純，天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠）；乙酸-乙酸鈉緩沖液（0.1mol/L，pH4.6～5.8）；磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液（0.1mol/L，pH5.8～7.4）；紫外光度計[UV-2401PC，島津儀器（蘇州）有限公司]；氣相色譜儀（GC-Agilent 6890N，美國安捷倫科技有限公司）；高速離心機(jī)（LG10-2.4A型，北京醫(yī)用離心機(jī)廠）。

1.2實驗方法

1.2.1蘋果的處理

將5g左右的合成阿魏酸葡糖酯或阿魏酸木糖酯加熱溶于800ml去離子水中待溫度降至室溫時，將反復(fù)洗過無傷、大小均一的最新市售的紅富士蘋果浸入到濃度約為0.62%的溶液中，待5min后取出，室溫下放置待測。

1.2.2底物的制備

10mmol/L亞油酸鈉（反應(yīng)底物）溶液的制?。悍Q取70mg的亞油酸鈉， 7mlTritonX-100和4ml無氧水，用0.5mol/L氫氧化鈉滴定至溶液澄清，定容25ml，分裝于1.5ml的安瓿瓶中，-18℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3粗酶液的提取

稱取2.0g果肉放入研缽中，在液氮中充分研磨，然后將研缽內(nèi)的果肉轉(zhuǎn)移至離心試管中，取9ml緩沖液充分沖洗研缽后將其轉(zhuǎn)至離心試管中。在10000r/min下離心15min，取上層清液。

LOX活性最適pH值的測定 本文通過紫外分光光度計測定LOX活性最高時的pH值，具體方法是：將一定pH值的緩沖液作參比進(jìn)行基線測定，然后取0.025ml 10mmol/L亞油酸鈉溶液，緩沖液2.775ml和相應(yīng)緩沖液下酶液0.200ml混合均勻，在30℃恒溫水浴中反應(yīng)1min。立即測定吸光度值A(chǔ)1并計時，過1min后，記錄吸光度值A(chǔ)2。兩次測量的差值（A2-A1）為ΔA。

LOX活性單位：酶活力 果肉質(zhì)量×反應(yīng)時間

LOX活性單位：ΔOD234nm×g-1min-1

由于每次取果肉為2.0g，ΔOD=ΔA×10002

本實驗以1min內(nèi)3ml體系在234nm的吸光度增加0.001作為一個酶活力單位（U），波長設(shè)定為234nm；測定不同緩沖液下的LOX活性，需要重新校正基線。

阿魏酸糖酯對LOX活性的影響 分別提取未用阿魏酸糖酯處理的、用阿魏酸葡糖酯處理的及用阿魏酸木糖酯處理的蘋果果肉的粗酶液，將最適pH值的緩沖液倒入比色皿中，進(jìn)行基線測定，然后移取0.025ml亞油酸鈉，緩沖液2.775ml，酶液0.200ml于樣品池中，在30℃恒溫水浴中反應(yīng)1min，立即測量A1并計時，過1min后，再進(jìn)行測量A2，求出ΔA，每隔2天進(jìn)行測量1次，持續(xù)22天。

乙烯的定性與定量 本實驗中利用氣相色譜通過純乙烯對果肉釋放的乙烯進(jìn)行定性和定量，定量分析采用氣相色譜外標(biāo)法。

氣相色譜條件：進(jìn)樣量8ml，檢測器 FID。N2流速：35ml/min，H2流速：50ml/min，AIR流速：375ml/min，色譜柱溫：50℃，進(jìn)樣口溫度：120℃，檢測器溫度：150℃。

阿魏酸糖酯對乙烯釋放量的影響 將處理過的蘋果，每次均勻取果肉10g，放入135ml醫(yī)用藥瓶中，將瓶用膠塞封嚴(yán)。過13.5h后進(jìn)行氣相色譜測試，每次進(jìn)樣8ml，通過氣相色譜的積分面積從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對應(yīng)的乙烯體積x。

乙烯釋放量（y）=釋放乙烯的體積（x）果肉質(zhì)量×釋放時間

[單位：nl/（g·h）]

2.結(jié)果與討論

2.1 LOX活性最適pH值的測定

本文以離體煙臺優(yōu)級紅富士蘋果試驗材料，在pH4.8～7.4范圍內(nèi)測定了LOX活性變化。最適pH值為6.4，在pH6.4附近，LOX活性也較高。因此應(yīng)選pH=6.4為酶活性測定的pH值。

2.2未處理、葡糖酯處理、木糖酯處理的LOX活性變化

從圖2可以看出三個處理LOX活性總體都呈上升趨勢，未處理的紅富士蘋果的LOX均高于木糖脂和葡糖酯，阿魏酸葡糖酯抑制效應(yīng)在處理后4天最明顯，抑制率為36.92%，16天后開始上升。阿魏酸木糖酯抑制效應(yīng)在處理后8天最明顯，抑制率為 19.47%，12天后開始上升。

理的LOX活性變化。由此可以得出阿魏酸葡糖酯和阿魏酸木糖酯對離體后的紅富士蘋果的LOX活性有較好的抑制作用，且阿魏酸葡糖酯的抑制作用比阿魏酸木糖酯的效果要更好一些。這是可能是由于葡糖酯有五個羥基，更容易使脂氧合酶失去活性，而木糖酯有4個羥基，其抑制效果要遜于葡糖酯。

2.3未處理、葡糖酯處理、木糖酯處理的蘋果乙烯釋放量變化

通過在相同色譜條件下測定純乙烯和果肉釋放氣體，證實釋放氣體為乙烯。并由不同濃度的純乙烯做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用外標(biāo)法對不同時間釋放的乙烯進(jìn)行定量。

蘋果乙烯釋放量變化。

阿魏酸葡糖酯和阿魏酸木糖酯處理的蘋果，明顯抑制蘋果果實內(nèi)源乙烯發(fā)生，分別推遲釋放乙烯高峰期為6天和4天出現(xiàn)，而且后期抑制釋放量仍是阿魏酸葡糖酯比阿魏酸木糖酯的抑制作用效果更好一些。

3.結(jié)論

實驗結(jié)果表明合成的阿魏酸葡糖酯和阿魏酸木糖酯對離體后的紅富士蘋果果實有一定的抗氧化保鮮效果：其中對于果實的LOX（脂氧合酶）活性，阿魏酸葡糖酯抑制效應(yīng)在處理后4天最明顯，抑制率為36.92%，阿魏酸木糖酯抑制效應(yīng)在處理后8天最明顯，抑制率為 19.47%，對于果實的內(nèi)源乙烯釋放，阿魏酸葡糖酯和阿魏酸木糖酯分別推遲乙烯高峰期6天和4天出現(xiàn)。結(jié)果表明阿魏酸葡糖酯的抗氧作用比阿魏酸木糖酯的效果要更好。由于阿魏酸本身無毒，所合成的糖脂也無毒無味，對人體沒有副作用，可以預(yù)測該類型的食品保鮮劑的開發(fā)具有廣闊的前景。