耳背靜脈放血治療扁平疣及對(duì)外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響

孫文倩　曹碧蘭　顏廷凱　曾霓　陶銳　陳曉紅　曾令芬　方寧

[摘要]目的：觀察耳背靜脈放血治療扁平疣的臨床療效及檢測(cè)其對(duì)外周血T細(xì)胞亞群的影響。方法：應(yīng)用耳背靜脈放血治療扁平疣患者35例，雙側(cè)耳背每周放血1次，療程15周。觀察療效并于治療前后抽取患者的靜脈血，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群。結(jié)果：完成隨訪的33例患者總有效率為84.85%?；颊咴谥委熐癈D4+和CD4+/CD8+比值明顯低于正常對(duì)照組（P<0.05，P<0.01）；治療后均顯著升高（P<0.01），與正常對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：耳背靜脈放血治療扁平疣有較好的臨床療效，可調(diào)節(jié)患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平，提高患者的細(xì)胞免疫功能，導(dǎo)致疣體脫落。

[關(guān)鍵詞]扁平疣；耳背靜脈放血；T淋巴細(xì)胞亞群；流式細(xì)胞儀

[中圖分類號(hào)]R752.5+2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1008-6455（2013）09-0950-03

扁平疣是由人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染引起的表皮良性贅生物，常侵犯青少年的顏面、手背及前臂，其發(fā)生、發(fā)展和消退與機(jī)體的免疫功能狀態(tài)密切相關(guān)，尤其是細(xì)胞免疫。治療上主要有物理治療（如激光、冷凍等），抗病毒治療及免疫療法（主動(dòng)免疫及被動(dòng)免疫）等。耳穴治療扁平疣在我國(guó)已有多年歷史，且療效確切，總有效率為70%～100%，平均為91%，但既往的研究主要局限于臨床療效觀察[1]。為探討耳穴療法治療扁平疣的免疫機(jī)制，本研究應(yīng)用耳穴療法中常用的耳背靜脈放血法治療扁平疣，并觀察臨床療效和檢測(cè)其治療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群的水平，從免疫學(xué)的角度了解耳背靜脈放血對(duì)扁平疣患者免疫狀態(tài)的影響。

1 資料和方法

1.1一般資料：實(shí)驗(yàn)組為2011年9月～2012年6月在遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院皮膚科門診就診的扁平疣患者35例，均符合扁平疣的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]，完成耳背靜脈放血治療患者33例，失訪2例。在完成隨訪的病例中，男性12例，女性21例，年齡9～47歲，平均（21.97±7.54）歲，病程2月～7年，平均（2.09±1.75）年；患者皮損主要發(fā)生于面部和手背，少部分為頸部和前臂。入選患者3個(gè)月內(nèi)未接受過(guò)干擾素、胸腺肽及IL-2等抗病毒及免疫調(diào)節(jié)劑治療，且2月內(nèi)均無(wú)突然增多、發(fā)紅、發(fā)癢等癥狀；不伴有自身免疫性疾病、嚴(yán)重的系統(tǒng)性疾病和其他病毒感染性疾病。正常對(duì)照組15例，均為健康志愿者，其中男性6例，女性9例，平均年齡（26.28±4.25）歲。兩組性別和年齡方面無(wú)明顯差異；所有患者及對(duì)照組成員均知情同意。

1.2 耳背靜脈放血治療方法：患者取坐位，選患者耳背上1/3近耳輪處明顯靜脈1支，揉搓使其充血，75%酒精消毒后用左手拇指、食指將耳背拉平，中指頂于下，右手持消毒刀片，迅速刺破血管，擠壓出血約10滴，血止后，再以1cm×1.5cm大小的兩層消毒紗布敷于傷口上，并用膠布固定。雙側(cè)耳背每周放血1次，療程15周，治療過(guò)程中若疣體脫落即停止治療。

1.3 療效判定標(biāo)準(zhǔn)：痊愈：皮損全部消退，無(wú)新出皮疹；顯效：皮損消退>70%；有效：皮損消退在3O%～7O%或有個(gè)別新出皮疹；無(wú)效：皮損無(wú)變化或消退不足30%?？傆行?（痊愈例數(shù)+顯效例數(shù)+有效例數(shù)）/總例數(shù)×100%。

1.4 樣本采集：無(wú)菌條件下分別采集患者治療前、治療后及正常對(duì)照組EDTA抗凝靜脈血2ml立即送檢。

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 儀器與試劑：FACSCalibur流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）。主要試劑：外周血CD4-FITC/CD8-PE/ CD3-PerCP三色抗體、FACS Lysing Solution紅細(xì)胞裂解液（均來(lái)自美國(guó)BD公司）。

1.5.2 實(shí)驗(yàn)操作：樣品測(cè)定管中加入熒光抗體CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PerCP20μl，抗凝血50μl混勻，避光靜置20min，再加入紅細(xì)胞裂解液200μl充分混勻，避光靜置15min后使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。激光室工作波長(zhǎng)488nm，F(xiàn)ITC受激發(fā)后發(fā)綠色熒光，PE受激發(fā)后發(fā)橙色熒光，PerCP受激發(fā)后發(fā)深紅色熒光，每份樣品檢測(cè)20 000個(gè)細(xì)胞。測(cè)定結(jié)果采用MultiSET功能軟件分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行治療前后配對(duì)t檢驗(yàn)，組間比較采用成組t檢驗(yàn)；以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。數(shù)據(jù)采用 x±s表示。

2 結(jié)果

2.1 臨床療效：33例患者治療后痊愈20例（60.61%）；顯效5例（15.15%）；有效3例（9.09%）；無(wú)效5例（15.15%）；總有效率為84.85%。其中治愈患者中有18例在治療4～8周后局部皮疹突然增大、發(fā)紅、發(fā)癢或出現(xiàn)新發(fā)皮疹（起效標(biāo)志），繼續(xù)治療2～3周后疣體脫落痊愈；2例患者皮疹消退無(wú)上述反應(yīng)過(guò)程，僅表現(xiàn)為原有皮疹逐漸變平至完全消退。治療過(guò)程中除有輕微疼痛外，療程結(jié)束后所有患者的耳背靜脈放血部位均未出現(xiàn)瘢痕和感染等任何不良反應(yīng)。

2.2 對(duì)外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響 患者在治療前CD4+和CD4+/CD8+比值明顯低于正常對(duì)照組（t=2.23，P<0.05；t=3.00，P<0.01）；而CD8+明顯高于正常對(duì)照組（t=2.66，P<0.05）；治療后與正常對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。治療前與治療后各指標(biāo)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），詳見(jiàn)表1。

3 討論

扁平疣是一種病毒感染性皮膚病。雖然本病有自愈傾向，但因主要發(fā)生于青少年的面部、手背及前臂等暴露部位，嚴(yán)重影響美觀和身心健康，因此患者的治療愿望仍十分迫切。從本文臨床就診情況看以年輕女性患者居多，這可能是女性追求美的積極性高于男性所致，然而目前并沒(méi)有證據(jù)表明扁平疣的發(fā)病與性別有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示耳背靜脈放血治療扁平疣的總有效率為84.85%；治療前其CD4+和CD4+/CD8+比值降低，而CD8+明顯升高；提示機(jī)體存在免疫平衡紊亂。治療后患者的CD4+細(xì)胞、CD4+/CD8+比值較治療前顯著升高，CD8+細(xì)胞水平顯著下降，與正常對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示耳背靜脈放血可以調(diào)節(jié)扁平疣患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平，恢復(fù)機(jī)體的免疫平衡，增強(qiáng)機(jī)體的抗病毒能力，最終導(dǎo)致疣體脫落。本結(jié)果與以往的文獻(xiàn)報(bào)道相似[1，3-5]。

中醫(yī)認(rèn)為扁平疣主要是人體感受潮濕毒邪，內(nèi)動(dòng)肝火所致，其發(fā)生發(fā)展與內(nèi)在的臟腑功能及免疫、內(nèi)分泌、神經(jīng)等功能的失調(diào)密切相關(guān)[1，6]。耳廓上各耳穴與臟腑軀體的聯(lián)系是多途徑的，如耳穴針刺治療主要是通過(guò)神經(jīng)體液綜合調(diào)節(jié)來(lái)激發(fā)機(jī)體內(nèi)非特異性防御反應(yīng)，調(diào)動(dòng)體內(nèi)各種免疫因素，提高抗御病邪的能力[7]。皮膚作為一個(gè)內(nèi)分泌組織，具有神經(jīng)內(nèi)分泌的功能與其他系統(tǒng)互相影響共同維持機(jī)體的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。近年來(lái)神經(jīng)一內(nèi)分泌一免疫（Neuro-endocrine-immunity Net work，NEI）網(wǎng)絡(luò)的提出和研究[8]拉近了中醫(yī)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的距離；隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，已逐步認(rèn)為NEI網(wǎng)絡(luò)是生物體內(nèi)的精密、完整而且復(fù)雜的調(diào)節(jié)體系，正如針灸它本身并不提供任何外源性物質(zhì)，卻能通過(guò)NEI網(wǎng)絡(luò)，調(diào)節(jié)下丘腦一垂體一性腺（HPA）軸，產(chǎn)生一系列生理生化改變來(lái)維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，恢復(fù)機(jī)體的內(nèi)分泌、免疫等功能而達(dá)到治療疾病的目的，在病理情況下發(fā)揮其雙向調(diào)節(jié)作用[8-9]。

針對(duì)臨床療效的差異性，可能與多種因素有關(guān)，如宿主的主要組織相容性復(fù)合體（MHC）的多態(tài)性、患者感染HPV的類型和數(shù)量，以及患者的年齡、病程等，因此臨床呈現(xiàn)出個(gè)體之間不同的治療效果。但耳背靜脈放血治療扁平疣總體療效滿意，方法簡(jiǎn)單且不良反應(yīng)小，患者容易接受，值得臨床推廣。

[參考文獻(xiàn)]

[1]董勤.耳穴療法治療扁平疣的取穴思路與療效評(píng)價(jià)[J].新中醫(yī)，2008，40（1）：104-106.

[2]趙辨.中國(guó)臨床皮膚病學(xué)[M].南京：江蘇科學(xué)技術(shù)出版，2010：0413-0417.

[3]黃紅革.扁平疣患者穿刺置疣術(shù)治療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群和IL-2檢測(cè)的臨床意義[J].放射免疫學(xué)志，2007，2O（5）：438-439.

[4]仇萌，鄒先彪.黃芪注射液治療扁平疣療效觀察及對(duì)外周血T淋巴細(xì)胞亞群和白細(xì)胞介素-2的影響[J]. 中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2010，17（8）：7-8.

[5]曹碧蘭，郭瑞珍，肖慶邦，等.自體疣植入治療扁平疣及其相關(guān)機(jī)制研究[J].中華皮膚科雜志，2004，37（9）：525-527.

[6]董勤.耳穴療法治療扁平疣的作用特點(diǎn)探析[J].上海針灸雜志，2008，27（5）：44-45.

[7]黃麗春.耳穴診斷學(xué)[M].北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2004：317-319.

[8]付義，陳冰.神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫（NEI）網(wǎng)絡(luò)研究促進(jìn)中西醫(yī)交融[J].中華中醫(yī)藥刊，2008，26（4）：821-822.

[9]王春雷，吳金鵬，王軍.筋膜學(xué)說(shuō)解讀中醫(yī)經(jīng)絡(luò)實(shí)質(zhì)及針灸作用機(jī)制[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2008，14（4）：312-314

[收稿日期]2013-03-22 [修回日期]2013-04-24

編輯/張惠娟