惡性血液病患者T淋巴細(xì)胞亞群檢測研究

湯麗　任敏

【摘要】 目的：分析惡性血液病患者的外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化及其檢測價值。方法：選取2012年1月-2015年12月筆者所在醫(yī)院收治的惡性血液疾病患者40例（A組）、良性血液病患者34例（B組）和正常人30例（C組）作為研究對象，檢測和比較三組的T淋巴細(xì)胞亞群變化。結(jié)果：A組和B組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+較C組均明顯降低，且A組明顯低于B組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；A組和B組的CD8+及CD16+、CD56+較C組均明顯提高，且A組明顯高于B組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：血液病患者存在不同的免疫功能失調(diào)，且以惡性血液病患者更為嚴(yán)重，T淋巴細(xì)胞亞群檢測對于良惡性血液病的診斷鑒別、臨床治療決策與預(yù)后評估具有重要指導(dǎo)意義。

【關(guān)鍵詞】 惡性血液病； 免疫功能； T淋巴細(xì)胞亞群

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.31.030 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2016）31-0057-02

血液病史至血液協(xié)同原發(fā)或繼發(fā)性疾病，患者的臨床表現(xiàn)主要為發(fā)熱、出血及貧血等。臨床根據(jù)其良惡性主要分為良性與惡性血液病兩類，其中，惡性血液病主要有急性白血?。ˋL）、慢性白血?。–L）、多發(fā)性骨髓瘤（MM）、淋巴瘤（LM）等，嚴(yán)重威脅人類生命健康[1]。T淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)的重要細(xì)胞，在正常生理狀態(tài)下其在體內(nèi)的數(shù)量及構(gòu)成比關(guān)系較為穩(wěn)定，而當(dāng)發(fā)生失調(diào)時可誘發(fā)多臟器系統(tǒng)疾病。臨床研究表明，在惡性疾病的發(fā)生及發(fā)展過程中均存在不同程度的T淋巴細(xì)胞亞群失衡，但關(guān)于其在惡性血液疾病患者中的變化特征，目前尚鮮見報道[2]。本文測定分析了40例惡性血液病患者的外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化，并與34例良性血液病、30例正常對照組進(jìn)行比較，旨在評估T淋巴細(xì)胞亞群變化在惡性血液病中的意義及檢測價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月-2015年12月筆者所在醫(yī)院收治的惡性血液疾病患者40例（A組）、良性血液病患者34例（B組）和正常人30例（C組）。A組中，男24例，女16例；年齡41～81歲，平均（53.90±3.35）歲；疾病類型： AL5例， CL6例， MM3例， LM18例，骨髓增生異常綜合癥3例，骨髓纖維化2例，骨髓增殖性疾病1例，霍奇金氏病1例，淋巴管瘤1例。B組中，男17例，女13例；年齡13～77歲，平均（49.76±3.36）歲；疾病類型：貧血10例，白細(xì)胞減少9例，血小板減少7例，血細(xì)胞減少3例，過敏性紫癜5例。C組中，男15例，女15例；年齡20～82歲，平均（52.13±3.45）歲。三組年齡與性別構(gòu)成比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 方法

受試者常規(guī)于清晨9∶00-10∶00采集外周靜脈血2 ml，應(yīng)用EDTA抗凝處理，在2 h內(nèi)檢查。向試管中分別加入40 μl相應(yīng)的單克隆抗體，包括CD3/CD4/CD8/CD16+CD56 TEST試劑，然后吸取100 μl待測樣本，加入1 ml PBS緩沖溶液，充分混勻以后，置于室溫避光條件下進(jìn)行孵育處理，15 min以后加入適量榮雪茹，再次混勻后置于室溫避光條件下反應(yīng)10 min，然后再加入2 ml PBS緩沖液進(jìn)行洗滌，常規(guī)離心，留取下層溶液，再次洗滌1次，然后加入500μl PBS緩沖溶液。完成樣本處理后，將其置入流式細(xì)胞儀（BD公司生產(chǎn) FACSCalibur型）進(jìn)行全自動分析，測定CD3+、CD4+、CD8+、CD16+CD56，并計算CD4+/CD8+。正常參考范圍：CD3+為60%～80%，CD4+為35%～55%，CD8+為20%～30%，CD4+/CD8+為1.4～2.0，CD16+CD56為7%～40%。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件包對本次研究相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

A組和B組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+較C組均明顯降低，且A組明顯低于B組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；A組和B組的CD8+及CD16+CD56較C組均明顯提高，且A組明顯高于B組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3 討論

免疫功能降低是惡性疾病患者普遍存在的現(xiàn)象，免疫功能紊亂程度與疾病的發(fā)生、發(fā)展及臨床轉(zhuǎn)歸均有緊密關(guān)系。臨床研究表明，惡性疾病患者的免疫功能紊亂以細(xì)胞免疫功能降低為主，可能是由于惡性疾病發(fā)生及發(fā)展過程中存在多種免疫因子合成或分泌增多，導(dǎo)致細(xì)胞功能免疫受到抑制[3]。T淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫主要群體，主要由胸腺生成，可起到免疫功能執(zhí)行與免疫功能調(diào)節(jié)雙重作用。其中，輔助性T細(xì)胞（Th）中主要標(biāo)志性細(xì)胞為CD3+及CD4+，具有抗腫瘤作用。一旦發(fā)生Th細(xì)胞亞群比例降低，多提示免疫功能低下，導(dǎo)致機(jī)體抵抗腫瘤、感染的能力降低[4]。目前，臨床對T淋巴細(xì)胞亞群的研究多關(guān)注傳染性肝炎患者的檢測，而對于惡性血液疾病的檢測目前尚報道較少。

惡性血液系統(tǒng)疾病中，以白血病最為常見，其屬于造血干細(xì)胞克隆性惡性疾病，發(fā)病過程中由于白血病細(xì)胞的分化成熟能力喪失，繼而停滯在各個不同的細(xì)胞發(fā)育階段，導(dǎo)致造血組織中大量白血病細(xì)胞聚集，同時還可累及其他臟器組織，影響造血功能，從而導(dǎo)致機(jī)體免系統(tǒng)功能紊亂[5]。ML在臨床中也較為常見，其發(fā)生及發(fā)展均與淋巴組織免疫應(yīng)答過程中，各類免疫細(xì)胞發(fā)生增殖分化有關(guān)，因此其實(shí)際上也是一種免疫系統(tǒng)相關(guān)性惡性腫瘤。臨床研究表明，免疫系統(tǒng)缺陷可能在ML的發(fā)生及發(fā)展過程中起著關(guān)鍵性作用。MM主要是由于骨髓中漿細(xì)胞發(fā)生異常增殖，導(dǎo)致骨骼被破壞，繼而造成單克隆免疫球蛋白產(chǎn)生，抑制正常多克隆免疫球蛋白的正常合成過程，繼而導(dǎo)致貧血等癥狀。相關(guān)研究資料顯示，MM患者存在多種免疫系統(tǒng)缺陷，其發(fā)生及發(fā)展與免疫細(xì)胞數(shù)量減少及免疫細(xì)胞功能障礙密切相關(guān)[6]。由此可見，免疫細(xì)胞紊亂在多種惡性血液疾病的發(fā)生及發(fā)展過程中均具有重要作用。外周血T淋巴細(xì)胞亞群能夠較為客觀地反應(yīng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)，且不同亞群的生理功能存在較大的差異，一旦T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量發(fā)生異常，多提示機(jī)體存在病理生理變化[7-8]。因此，測定外周血T淋巴細(xì)胞亞群比例能夠在較大程度上反映疾病狀態(tài)，這對于疾病的診斷、治療及病情評估均具有重要意義。甄禎等[9]研究表明，惡性血液病患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD3+CD16+CD56 T淋巴細(xì)胞比例均較正常對照組明顯降低，而CD8 T淋巴細(xì)胞明顯提高，其研究還發(fā)現(xiàn)，不同類型惡性血液疾病患者的T淋巴細(xì)胞亞群計數(shù)均與健康對照組比較差異顯著，表明惡性血液病患者存在明顯的細(xì)胞免疫功能失衡。本研究中，良性與惡性血液?。ˋ組與B組）患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均較健康對照組（C組）明顯降低，CD8+及CD16+CD56+均較C組明顯提高，與上述報道一致，證明了血液病患者存在不同程度的細(xì)胞免疫功能紊亂。而A組與B組比較，A組的T淋巴細(xì)胞亞群紊亂更為明顯，組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，進(jìn)一步證實(shí)惡性血液病患者的T淋巴細(xì)胞亞群紊亂較為明顯，細(xì)胞免疫功能降低嚴(yán)重，這對疾病診斷與治療具有重要意義。

綜上所述，良、惡性血液病患者存在不同程度的細(xì)胞免疫功能降低，而惡性血液病患的免疫功能缺陷或障礙更為嚴(yán)重。T淋巴細(xì)胞亞群檢測和分析對于良、惡性血液病的診斷鑒別、臨床治療決策與預(yù)后評估具有重要參考價值。

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（收稿日期：2016-07-28）