三磷酸胞苷二鈉注射液生產(chǎn)工藝篩選

張存國，孫 平 ，胡方鋒

(1.山東大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250012；2.山東魯抗中和環(huán)?？萍加邢薰?，山東 濟(jì)寧 272000；3.山東希爾康泰藥業(yè)有限公司,山東 濟(jì)寧 272100)

0 引 言

三磷酸胞苷二鈉注射液為核苷酸類藥物制劑，它的有效成分是三磷酸胞苷，能夠?qū)褂勺杂苫团d奮性氨基酸引起的神經(jīng)細(xì)胞損傷[1].還有利于改善和調(diào)節(jié)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和血管壁細(xì)胞膜性結(jié)構(gòu)的合成與構(gòu)建，臨床上主要用于治療多種原因引起的神經(jīng)系統(tǒng)疾病及血管硬化癥[2].由于具有這些獨(dú)特的藥理作用和治療機(jī)制，使它在防治腦血管病方面獨(dú)樹一幟[3].

根據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報道[1]，影響三磷酸胞苷二鈉注射液穩(wěn)定性的影響因素很多，但主要有溫度、所添加的穩(wěn)定劑和溶液的酸堿度.三磷酸胞苷二鈉(CTP)注射液不穩(wěn)定是由于三磷酸胞苷二鈉分子中的兩個磷酸酯鍵在水溶液中易水解，其水解速度受到溫度、pH的影響更甚，因此該注射液在生產(chǎn)和貯存過程中很容易脫掉磷酸鍵,降解成二磷酸胞苷(CDP)及一磷酸胞苷(CMP)而使有關(guān)物質(zhì)升高.

可見有關(guān)物質(zhì)是個比較難控制的問題，因此從有關(guān)物質(zhì)和制劑穩(wěn)定性方面考慮，在制劑工藝處方篩選研究中，分別考察了不同穩(wěn)定劑、溶液的pH、L-精氨酸用量、活性碳用量、滅菌條件等因素對制劑含量和有關(guān)物質(zhì)的影響 ， 而且對制劑的穩(wěn)定性進(jìn)行了同步考察，根據(jù)實(shí)驗結(jié)果選擇最佳處方及工藝.

1 實(shí)驗部分

1.1 材料

材料：三磷酸胞苷二鈉(杭州澳亞生物技術(shù)有限公司)，參照標(biāo)準(zhǔn)：國家標(biāo)準(zhǔn)WS1-XG-012-2001，L-精氨酸(石家莊精晶藥業(yè)有限公司)，檢驗標(biāo)準(zhǔn)：中國藥典2010版[4]二部.上市樣品：三磷酸胞苷二鈉注射液(濟(jì)南利民制藥有限公司)，批號12030611，檢驗標(biāo)準(zhǔn)：WS1-XG-013-2001.試制樣品(自制)，批號120906.

1.2 儀器

儀器：HH-S電熱恒溫水浴鍋(東臺市躍進(jìn)電器廠)，Water1525高效液相色譜儀,日本島津2450紫外-分光光度儀，LHU-213恒溫恒濕箱(ESPEC ENVIRONMENTAL EQUIPMENT公司)， YG-4藥物光照試驗儀(中國制劑國家工程研究中心)，F(xiàn)E20K梅特勒酸度計(上海梅特勒公司)，BCM-1000/BCM-1300型凈化臺(蘇州尚田潔凈技術(shù)有限公司)，YB-II型澄明度檢測儀(天津市拓普儀器有限公司)，BA-80型臺式蒸汽滅菌器(上海人和科學(xué)儀器有限公司)，ZX-10型半自動注射式液體灌裝機(jī)(廣州世峰電器有限公司).

2 處方篩選

2.1 穩(wěn)定劑的篩選

根據(jù)關(guān)于三磷酸胞苷二鈉注射液的有關(guān)穩(wěn)定性研究中的處方[3]，對(NaH2PO4+ Na2HPO4+EDTA-2Na)、(無水Na2CO3+NaHCO3+EDTA-2Na)、L-精氨酸和不加任何穩(wěn)定劑的幾種情況進(jìn)行了考察，比較加熱前和100 ℃水浴加熱20 min后主藥含量變化的幅度，結(jié)果如表1所示.

表1 不同穩(wěn)定劑對制劑穩(wěn)定性的影響Fig.1 Effect of different stabilizers on the stability of preparation

從表1中數(shù)據(jù)可以看出，L-精氨酸作為穩(wěn)定劑加熱前后含量下降的幅度最小，有關(guān)物質(zhì)較少，故選擇L-精氨酸作為穩(wěn)定劑.

2.2 L-精氨酸用量的影響

根據(jù)L-精氨酸在水中的溶解性能，考察了0.5%、1.0%、2.0% 、4.0% 、6.0%，L-精氨酸用量對制劑穩(wěn)定性的影響，結(jié)果如表2所示.

表2 L-精氨酸用量對制劑穩(wěn)定性影響

從表2中數(shù)據(jù)可以看出，精氨酸用量>4%時，加熱前后pH值基本無變化；精氨酸用量<4%時，加熱后pH值降低.精氨酸用量為4%時，加熱前后含量下降幅度最小，有關(guān)物質(zhì)最小，故選擇精氨酸用量為4%.

2.3 溶液pH的影響

國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中三磷酸胞苷二鈉注射液的pH值規(guī)定為7.5～9.0，在相同條件下100 ℃進(jìn)行加熱，考察不同pH值對制劑穩(wěn)定性的影響，結(jié)果如表3所示.

表3 pH值對制劑穩(wěn)定性影響

從表3中數(shù)據(jù)可以看出pH值越高對本品的穩(wěn)定性越好，但考慮到臨床使用的刺激性和安全性，最終選擇調(diào)節(jié)溶液pH在8.2～8.5之間.

2.4 活性碳用量的影響

考察了加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.02%、0.05%、0.1%、0.3%、0.5%活性碳在靜置40 min和煮沸15 min后的含量變化情況，結(jié)果如表4所示.

表4 不同活性碳用量對制劑含量影響

從表4中數(shù)據(jù)可以看出，活性炭不會對本品的pH值產(chǎn)生不良影響；當(dāng)活性炭用量質(zhì)量分?jǐn)?shù)>0.5%時對本品的制劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)基本無影響.因此，在本品的制備過程中，選擇了加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%活性炭，靜置40 min.

2.5 滅菌條件的影響

由于三磷酸胞苷二鈉原料對熱非常敏感，對本品考慮了121 ℃ 15 min加熱除菌和0.22 μm濾膜過濾除菌兩種方式滅菌，并且進(jìn)行了滅菌前后的比較，對外觀、總有關(guān)物質(zhì)、無菌檢查進(jìn)行了比較，結(jié)果如表5所示.

表5 滅菌條件影響

從表5中數(shù)據(jù)可以看出，本品對熱非常敏感，采用過濾除菌可保證無菌檢查合格的同時，保持樣品的穩(wěn)定.

3 試制樣品的配伍穩(wěn)定性

取本品 2支，批號:120906，分別加入100 mL葡萄糖注射液和100 mL氯化鈉注射液中，檢查有關(guān)物質(zhì)和含量，結(jié)果如表6所示.

從表6中數(shù)據(jù)可以看出，本品與葡萄糖注射液，氯化鈉注射液配伍，6 h內(nèi)穩(wěn)定,沒有配伍禁忌，符合注射液及輸液對穩(wěn)定性的要求.

表6 試制樣品與葡萄糖注射液的配伍穩(wěn)定性結(jié)果

4 穩(wěn)定性考察

根據(jù)以上研究結(jié)果的工藝及處方，制備了合格產(chǎn)品(1 000支量)，批號：120906.稱取L-精氨酸80.0 g，溶解于1 600 mL注射用水中；稱取三磷酸胞苷二鈉40.0 g，加入上述溶液中，攪拌溶解；用鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值至7.5～9.0，加注射用水至全量；加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%針用活性碳，攪拌后靜置約40 min；先用濾紙粗濾，再用0.22 μm微孔濾膜精濾兩次，測定中間體含量和pH值合格后安瓿灌封，包裝即得.

為了研究產(chǎn)品制劑的穩(wěn)定性，確定影響其穩(wěn)定性的因素及可能的降解產(chǎn)物，為制劑工藝、包裝和貯藏條件提供可行性依據(jù)，本實(shí)驗研究采取了比文獻(xiàn)中穩(wěn)定性考察方法[4]更加苛刻的試驗條件.根據(jù)中國藥典2010版藥物制劑穩(wěn)定性指導(dǎo)原則，本品為對溫度敏感的藥物，所以分別在溫度60 ℃、40 ℃、30 ℃、20 ℃、4 ℃和(4 500±500) lx強(qiáng)光照射條件下第0 d、5 d、10 d取樣對含量和有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了檢測分析，并且與上市制劑作了質(zhì)量對比.

4．1 高溫考察試驗

將供試品于60 ℃下放置10 d，于第5 d和第10 d取樣，按重點(diǎn)考察項目進(jìn)行檢測.結(jié)果供試品第5 d質(zhì)量分?jǐn)?shù)下降超過5%，則在40 ℃、30 ℃、20 ℃條件下分別同法進(jìn)行試驗.結(jié)果如表7～10所示.

表7 高溫試驗(60 ℃)測定結(jié)果

表8 高溫試驗(40℃)測定結(jié)果

表9 高溫試驗(30 ℃)測定結(jié)果

表10 高溫試驗(20 ℃)測定結(jié)果

從表7～10中數(shù)據(jù)可以看出，本品對溫度特別敏感，60 ℃、40 ℃、30 ℃、20 ℃條件下放置10 d，供試品含量下降均超過5%，有關(guān)物質(zhì)均明顯升高，表明本品不宜在室溫貯藏.

4.2 強(qiáng)光照射試驗

將供試品于照度為(4 500±500) lx條件下放置10 d，于第5 d和第10 d取樣，按重點(diǎn)考察項目進(jìn)行檢測.結(jié)果如表11所示.

表11 強(qiáng)光照射試驗測定結(jié)果

從表11中數(shù)據(jù)可以看出，在光照(4 500±500)lx條件下，本品基本穩(wěn)定，但是光照對本品有關(guān)物質(zhì)有一定的影響，所以本品應(yīng)該在暗處保存.

4.3 低溫試驗

將供試品于4 ℃下放置10 d，于第5 d和第10 d取樣，按重點(diǎn)考察項目進(jìn)行檢測，結(jié)果如表12所示.

表12 低溫(4 ℃)試驗測定結(jié)果

從表12中數(shù)據(jù)可以看出，本品在低溫環(huán)境下放置10 d，供試品含量和有關(guān)物質(zhì)基本無變化，比較穩(wěn)定，說明本品宜在低溫條件下貯藏.

4.4 結(jié) 果

根據(jù)以上影響因素試驗考察結(jié)果，本產(chǎn)品為對溫度特別敏感的藥物，并且參照中國藥典2010版，確定本品最佳保存條件應(yīng)在低溫4～8 ℃左右，涼暗處貯藏.

5 結(jié)果與討論

在本品工藝篩選的同時，還分析了上市制劑，發(fā)現(xiàn)其總有關(guān)物質(zhì)達(dá)到了10%左右(標(biāo)準(zhǔn)為不得大于12%)，這是由于三磷酸胞苷二鈉不穩(wěn)定，加熱后會分解生成一磷酸胞苷鈉、二磷酸胞苷二鈉所致.可以推測上市制劑是采用加熱的方法除菌，為了使含量達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，三磷酸胞苷二鈉幾乎110%投料，這樣既損失原料而且有關(guān)物質(zhì)也偏高.而在本品工藝的篩選過程中，對穩(wěn)定劑、pH值、活性碳等因素進(jìn)行考察，重點(diǎn)考察了各個因素條件加熱后有關(guān)物質(zhì)的變化，在滅菌條件的考察過程中，考慮到本品對熱的敏感，采取了過濾除菌，相比上市制劑，有關(guān)物質(zhì)減少了很多，并且增加了原料的利用率，制備簡單，在4～8 ℃，涼暗處保存條件下穩(wěn)定，只是在制備過程中，對環(huán)境提出了很高的要求，要求在無菌條件下操作，這些在GMP車間完全可以達(dá)到.

三磷酸胞苷二鈉注射液是一種規(guī)格為2 mL:40 mg的輔酶類藥物，屬于已有國家標(biāo)準(zhǔn)藥物，收載于國家藥品監(jiān)督管理局頒布的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-XG-013-2001，參照上市制劑三磷酸胞苷二鈉注射液的生產(chǎn)廠家是濟(jì)南利民制藥有限公司.經(jīng)過專利查新，在不侵犯專利人權(quán)利的前提下，根據(jù)篩選不同的穩(wěn)定劑、活性炭、滅菌條件等因素篩選出最佳處方，按照處方制備出合格的制劑，對其影響因素項進(jìn)行了考察，得到了制劑的穩(wěn)定性結(jié)果及貯藏條件.對于所得制劑的含量及有關(guān)物質(zhì)分析方法參照了三磷酸腺苷二鈉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(中國藥典2010版[5])，經(jīng)過方法學(xué)驗證具有很高的精確性和可行性.

致 謝

本課題實(shí)驗得到了山東大學(xué)和山東希爾康泰藥業(yè)有限公司的資助以及相關(guān)同事的幫助，在此表示感謝！

參考文獻(xiàn)：

[1] 黃行鐵. 三磷酸胞苷二鈉注射液的穩(wěn)定性研究[J].醫(yī)藥工業(yè)，1985，16(1)：6-12.

HUANG Xing-tie. Stability study of Cytidine Disodium Triphosphate Injection[J].Journal of Pharmaceuticals, 1985，16(1)：6-12.

[2] 徐菁. HPLC法測定三磷酸胞苷二鈉注射液的含量[J].湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008,10(3)：57-58.

XU Jing. HPLC method for determining the content of Cytidine Disodium Triphosphate Injection[J].Journal of Hubei College of Traditional Chinese Medicine, 2008,10(3)：57-58

[3] 柳翠敬. 三磷酸胞苷二鈉注射液的穩(wěn)定性研究[J].藥學(xué)通報，1984，19(1)：37-40.

LIU Cui-jing. Stability study of Cytidine Disodium Triphosphate Injection[J].Chinese Pharmaceutical Bulletin, 1984，19(1)：37-40.

[4] 周愛軍. 遇油膨脹丁苯橡膠的配方設(shè)計與性能研究[J].武漢工程大學(xué)學(xué)報，2012，34(7)：41-44.

ZHOU Ai-jun. Preparation and properties of oil swelling polymerized styrene butadiene rubber[J].Journal of Wuhan Institute of Technology, 2012，34(7)：41-44.

[5] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:28-29.

[6] 周建華. 注射用三磷酸胞苷二鈉的處方設(shè)計及穩(wěn)定性考察[J]. 上海醫(yī)藥，2008，30(5)：224-226.

ZHOU Jian-hua. Prescription design and stability test of Cytidine Disodium Triphosphate Injection[J].Shanghai Medical and Pharmaceutical Journal, 2008，30(5)：224-226.