高效液相色譜法測定麻杏石甘合劑中甘草酸的含量*

馬　蘭

(天津市北辰區(qū)藥品檢驗所，天津　300400)

麻杏石甘合劑是天津市北辰區(qū)中醫(yī)院研制的制劑品種，由麻黃、炙甘草、苦杏仁等5味藥組成，具有鎮(zhèn)咳、祛痰的作用。甘草酸是炙甘草中主要成分，甘草酸對該制劑的功效具有很大的支持作用。本實驗建立了高效液相色譜法測定麻杏石甘合劑中甘草酸含量，可作為控制麻杏石甘合劑質量的有效手段。

1　儀器與試驗

1.1儀器美國LabAlliance高效液相色譜儀，分析之星工作站；色譜柱：Lanbo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；Sartorius BP190S、BP211D型電子天平。

1.2試藥甘草酸銨對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號110731-200306，供含量測定用，以甘草酸計含量為91.23%)，甲醇為色譜純(天津市康科德科技有限公司)，水為純化水(自制)，醋酸銨、冰醋酸均為分析純(天津金匯太亞化學試劑有限公司)；麻杏石甘合劑(由天津市北辰區(qū)中醫(yī)醫(yī)院提供，批號20121224、20121226、20121228，規(guī)格：100 ml/瓶)。

2　方法與結果

2.1色譜條件的確定

2.1.1檢測波長的確定《中國藥典》2010年版一部有關甘草酸含量測定方法，大多數(shù)采用250 nm[1]波長檢測。采用甘草酸銨對照品的甲醇稀溶液在波長為200～400 nm進行紫外光譜掃描，在252 nm處有最大吸收峰。故采用《中國藥典》檢測甘草酸常用波長250 nm為本實驗的檢測波長。

2.1.2流動相的考查本品采用了甲醇-0.2 mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸[1，2](62∶37∶1)，參照《中國藥典》2010年版一部啟脾丸項下的規(guī)定及相關文獻，選擇和《中國藥典》相同的流動相甲醇-0.2 mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸(62∶37∶1)作為本實驗的流動相。

2.1.3色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 參照《中國藥典》2010年版一部有關含量測定方法并根據(jù)以上考查制定了本含量測定方法的色譜條件，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.2 mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸(62∶37∶1)為流動相，檢測波長：250 nm，柱溫：40 ℃，流速：0.9 ml/min，理論塔板數(shù)按甘草酸峰計算應不低于2500。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取甘草酸銨對照品18.66 mg，置100 ml量瓶中，加60%甲醇稀釋至刻度，作為對照品貯備液，精密量取對照品貯備液3 ml，置10 ml量瓶中，加60%甲醇制成每1 ml含甘草酸0.051 07 mg的溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備精密量取供試品(20121224)3 ml，置25 ml量瓶中，加60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，靜置，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備 按照處方比例，取除去炙甘草的其他藥味，按制備工藝制得陰性樣品。按上述“2.2.2”項下方法制備陰性樣品溶液。分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，進樣20 μl進行測定，結果陰性無干擾。見圖1。

2.3標準曲線的制備精密吸取甘草酸銨對照品貯備液(0.1866 mg/ml)1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 ml，分別置10 ml的量瓶中，加60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，按“2.1.3”項下色譜條件分析，分別精密吸取20 μl注入液相色譜儀，記錄峰面積，以甘草酸對照品進樣量(μg/ml)為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，結果甘草酸在17.02～85.12 μg范圍內(nèi)線性關系良好,其回歸方程為Y=12 473.6X-21 219.6(r=0.999 9，n=6)。

2.4精密度試驗取對照品溶液(0.051 07 mg/ml)20 μl，按“2.1.3”項下色譜條件分析，連續(xù)進樣6次，測定甘草酸峰面積，測得甘草酸峰面積的RSD為0.66%，符合要求。

1.甘草酸

2.5重現(xiàn)性試驗取樣品(批號20121224)按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液5份，按“2.1.3”項下色譜條件分析，精密量取供試品溶液20 μl進樣，分別計算甘草酸含量，樣品中甘草酸平均含量為0.5054 mg/ml，RSD為0.61%，符合要求。

2.6穩(wěn)定性試驗精密量取供試品溶液(批號20121224)20 μl，于0、2、4、6和8 h進樣，測定甘草酸含量，其RSD為0.43%，結果表明供試品在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7回收率試驗 精密量取甘草酸銨對照品貯備液(0.1866 mg/ml)9份，每份5.0 ml，分別置25 ml量瓶中，各精密加入已測知含量的樣品(批號20121224)0.5、1和1.5 ml，用60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，按“2.1.3”項下色譜條件分析，計算回收率，結果平均回收率為102.1%，RSD為0.39%。結果見表1。

2.8樣品的測定 取3個批號的供試品(20121224、20121226、20121228)，按照“2.3.2”項下供試品溶液制備操作，按“2.1.3”項下色譜條件分析，進樣量20 μl，注入液相色譜儀，測定甘草酸含量。結果見表2。

表1　回收率測定結果

表2　樣品測定結果

3　討論

3.1提取溶劑的考查 本品采用60%甲醇作溶劑，參照《中國藥典》2010年版一部胃舒寧顆粒項下的規(guī)定，選擇和《中國藥典》相同的溶劑60%甲醇作為本品的溶劑。

3.2取樣量考查 取樣品(20121224)，分別精密量取1、3和5 ml至25 ml量瓶中，用60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，靜置，濾過，取續(xù)濾液，按“2.1.3”項下色譜條件分析，測定樣品中甘草酸含量。結果見表3。

表3　不同取樣量測定結果

上述結果顯示，取樣量為3 ml時甘草酸溶出更完全，故選擇3 ml為本實驗取樣量。

3.3溶劑用量考查 取上述同一批號樣品，分別精密量取3 ml至25 ml和50 ml量瓶中，用60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，按“2.1.3”項下色譜條件分析，測定樣品中甘草酸含量。結果見表4。

表4　不同溶劑用量測定結果

上述結果顯示，溶劑用量25 ml甘草酸溶出更完全，故溶劑用量選擇25 ml。

3.4不同色譜柱及不同儀器對含量測定的影響

3．4.1不同色譜柱對含量測定的影響 取樣品溶液，使用美國LabAllianceTM高效液相色譜儀，分別使用 Lanbo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)與Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，按照“2.1.3”項下色譜條件分析，測定樣品中甘草酸含量。結果見表5。

表5　不同色譜柱對含量測定的影響(n=2)

測定結果顯示，不同色譜柱對含量測定的影響很小。

3．4.2不同儀器對含量測定的影響取樣品溶液，使用Lanbo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，分別使用美國LabAlliance高效液相色譜儀和日本島津LC-2010A高效液相色譜儀，按照“2.1.3”項下色譜條件分析，測定樣品中甘草酸含量。結果見表6。

表6　不同儀器對含量測定的影響(n=2)

結果顯示，采用相同色譜柱不同儀器對測定結果影響很小。

3.5本方法簡便，專屬性好、重現(xiàn)性好，結果準確可靠，可用于麻杏石甘合劑的質量控制和分析。

1中國藥典[S].一部.2010：376

2馬玉彪，彭鐮心，鄒亮，等. 根痛平膠囊中甘草酸的含量測定[J].西南民族大學學報，2011,37(4)：625