心肌三合一快速診斷試劑盒在手足口病患兒中的臨床應用

孔東輝，田瑾瑾，李肖宇，汪園琪，冀文娟，李 萍（安徽省亳州市人民醫(yī)院檢驗科 236800）

手足口?。℉FMD）是一種由腸道病毒引起的，臨床以手、足、口腔皰疹為特征的病毒感染性疾病。引發(fā)手足口病的腸道病毒有20多種（型），以柯薩奇病毒A16型（CoxA16）和腸道病毒71型（EV71）最常見。多發(fā)生于嬰幼兒，該病多數(shù)預后良好。個別患者可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等并發(fā)癥而導致死亡。有文獻報道該病還可引起心臟損害［1－2］。本文選擇手足口病流行期間本院住院的60例HFMD患兒為研究對象，分析血漿肌鈣蛋白I（cTnI）、肌酸激酶同工酶（CK－MB）檢測在手足口病患兒心肌損傷中的臨床價值。HFMD的及時診斷對HFMD治療和預后有重大意義。但心肌酶譜的定量檢測受實驗條件限制在某些醫(yī)院無法開展，而有條件開展檢測的醫(yī)院又很難做到全天開啟生化分析儀，且檢測時間相對較長，需靜脈采血，HFMD患兒多為3歲以下，靜脈采血患兒及家長不易接受且醫(yī)療風險較大。因此尋求一種簡便、快速、敏感性和特異性都高的檢測試劑和方法迫在眉睫。作者對cTnI、肌紅蛋白、CK－MB聯(lián)合檢測試劑盒進行了實驗觀察，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年4～6月來本院就診的確診HFMD患兒60例，所有病例均伴發(fā)熱，手、足、口均有斑丘疹、皰疹，符合《手足口病預防控制指南（2008年版）》診斷標準［3］。對照組為60例同期本院健康體檢兒童，年齡1～24月。

1.2 試劑 cTnI、肌紅蛋白、CK－MB聯(lián)合檢測試劑盒由杭州艾康生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 方法 （1）采集所有檢測對象血漿或末梢血標本進行檢測。（2）cTnI、肌紅蛋白、CK－MB聯(lián)合檢測試劑盒測定應用免疫層析法。測試時，將標本滴入試劑盒加樣孔，標本中如含有肌紅蛋白或cTnI或CK－MB，則標本中的心肌3項指標分別與預先包被在聚酯膜上的金標記的3項指標相應抗體結(jié)合，結(jié)合物在毛細效應下向上層析，隨后會被固定在膜上相應測試區(qū)內(nèi)的3項相應抗體結(jié)合捕獲，從而在相應測試區(qū)出現(xiàn)紫紅色條帶。如果是陰性標本，則相應測試區(qū)內(nèi)沒有紫紅色條帶出現(xiàn)。（3）cTnI、肌紅蛋白、CK－MB聯(lián)合檢測試劑盒測定按照試劑盒說明書進行操作。（4）數(shù)據(jù)處理分別計算出心肌3項指標的敏感性、特異性和正確診斷率［4］。

2 結(jié) 果

2.1 60例HFMD患兒cTnI陰性2例，肌紅蛋白陰性1例，CK－MB陰性1例；60例非HFMD患者cTnI陽性0例，肌紅蛋白陽性0例，肌酶激酶同工酶陽性1例。該例CK－MB陽性是由于嚴重溶血或黃疸對檢測造成負干擾。因此，應避免標本溶血。

2.2 血漿cTnI檢測的敏感性、特異性、診斷正確率分別為96%、95%、94%；肌紅蛋白分別為100%、91%、96%；CK－MB分別為98%、95%、97%。由于心肌3項指標均有很高的敏感性，cTnI、肌紅蛋白、CK－MB聯(lián)合檢測試劑盒檢測，能為臨床篩查HFMD心肌損傷提供重要的實驗依據(jù)。

3 討 論

1957年新西蘭首次報道HFMD。我國于1981年上海首次報道本病。此后，各省均有本病報道。HFMD是由腸道病毒CoxA16、EV71引起的急性傳染病，多發(fā)生于學齡前兒童，尤以3歲以下齡組發(fā)病率最高?；颊吆碗[性感染者均為傳染源，主要通過消化道、呼吸道和密切接觸等途徑傳播。主要癥狀表現(xiàn)為手、足、口腔等部位的斑丘疹、皰疹，以每年5～7月為發(fā)病高峰，四季均可見散發(fā)病例。HFMD傳染性強，可在短期內(nèi)造成大流行，一般病程短而輕，多在1周內(nèi)痊愈。多數(shù)預后良好，少數(shù)病例可出現(xiàn)腦膜炎、腦炎、腦脊髓炎、肺水腫、循環(huán)障礙等，多由EV71感染引起。2008年5月2日衛(wèi)生部正式將HFMD納入丙級傳染病管理，加強了對本病的認識、研究和管理。該病不僅可引起心肌損害，亦可并發(fā)暴發(fā)性心肌炎導致死亡。王曉華［5］報道HFMD 1 698例，3例死于暴發(fā)性心肌炎。研究表明，HFMD嚴重期心肌酶譜明顯升高，其升高的程度與疾病嚴重程度呈正比，與預后密切相關(guān)［6］。當心肌損傷后，肌紅蛋白于起病后2h在血液中濃度升高，12h達高峰，24～48 h恢復正常，具有很高的陰性排除價值；心肌cTnI在起病后3～4h后升高，11～24h達高峰，7～10d降至正常；CK－MB在起病后4h內(nèi)升高，16～24h達高峰，3～4d恢復正常。因為心肌損害首先表現(xiàn)為心肌酶譜的改變，當達到一定程度時才出現(xiàn)電生理紊亂，才表現(xiàn)為心電圖異常。當心肌細胞損傷時，細胞質(zhì)天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、乳酸脫氫酶（LDH）、激酸激酶（CK）、CK－MB釋放入血，這時檢驗血清心肌酶譜會升高。AST廣泛分布于人體各組織、器官中，主要在心、肝、骨骼肌、腎、胰、脾、肺、紅細胞中，其中以心肌細胞含量最豐富。LDH廣泛存在于以心、腎、骨骼肌為主的人體組織內(nèi)，二者特異性不高；CK、CK－MB在心肌損傷2～6h開始升高，比其他酶出現(xiàn)早，并迅速升至高峰，2周左右即可恢復正常［7］，其中CK在骨骼肌中最多，其次是心肌、腦和平滑肌等組織中也有分布；而CK－MB是特異性同工酶，在心肌細胞中含量高，具有較高的特異性和敏感性，故它的升高可作為心肌損傷早期診斷指標。HFMD引起心肌酶譜升高可能與下列因素有關(guān)：（1）病毒感染直接作用導致心肌細胞壞死和炎癥細胞反應；（2）機體免疫反應可加劇心肌細胞的損傷；二者使得心肌細胞內(nèi)酶的釋放。LDH、CK、CK－MB是目前常用的與心肌損害有關(guān)的酶學檢查指標，其中CK－MB是心肌特異性同工酶，在心肌細胞中含量最高，正常血清中含量極微，當心肌細胞受損時釋放入血，對判斷心肌損害有高度特異性［8］。

一旦發(fā)現(xiàn)感染HFMD，則應將患兒隔離，以免傳染他人引起流行蔓延，應適當休息，清淡飲食，做好口腔和皮膚護理。如出現(xiàn)心肌酶升高，要提高警惕，盡早行胸片、心電圖等檢查以免延誤最佳治療時機［9］。

測定肌紅蛋白的方法很多，如分光光度法、電泳法。這些方法不能測定低于微克水平的肌紅蛋白；免疫化學法比較靈敏，但抗血清必須是對肌紅蛋白特異的；對流免疫電泳是一種定性方法，靈敏度只有2mg／mL，不適宜檢測心肌梗死；放射免疫試驗檢測肌紅蛋白、CK－MB靈敏度高，特異性強，但使用放射性同位素，會造成對環(huán)境的污染；膠乳增強透射比濁法測定肌紅蛋白、cTnl靈敏度高，特異性好，測定速度快，但需要自動生化分析儀，成本較高［10－11］。肌鈣蛋白測定多用免疫學方法，ELISA法適宜大批量檢測，CK－MB測定采用全自動電泳儀，成本較高；免疫抑制法敏感性高于電泳法，能用于急診，但需要生化分析儀。cTnI、肌紅蛋白、CK－MB聯(lián)合檢測試劑盒采用高度特異性的抗體－抗原反應及免疫層析分析技術(shù)。心肌3項指標在同一反應板上同時進行檢測，10～20min便可讀取結(jié)果。適合單個標本檢測且不需特殊設備。由于心肌3項指標在血液中升高、降至正常的時間不同，cTnI、肌紅蛋白、CKMB聯(lián)合檢測試劑盒則結(jié)合了肌紅蛋白高敏感性和cTnI和CK－MB的較高特異性，有利于提高診斷正確率。作者認為cTnI、肌紅蛋白、CK－MB聯(lián)合檢測試劑盒在篩查HFMD時，陰性結(jié)果在很大程度上排除了HFMD患兒心肌損傷的可能，而陽性結(jié)果則需結(jié)合臨床表現(xiàn)和心電圖檢查等進行綜合判斷。由于cTnI、肌紅蛋白、CK－MB聯(lián)合檢測試劑盒具有很高的敏感性、較高特異性和診斷正確率，且方法簡便、快速，標本容易采集，故可用于HFMD患兒心肌損傷的急診篩查，且能減少治療前的時間延誤，對HFMD患兒嚴密觀察心臟體征，對合并心肌損害早期發(fā)現(xiàn)，并予保護心肌、促進損傷心肌細胞迅速恢復正常功能，對預后起重要作用［12］。同時可給予營養(yǎng)心肌藥物以防止心肌損傷進一步加重或并發(fā)心肌炎 。HFMD患兒可檢測血漿或末梢血，適用于住院及門診患兒篩查，兩種采血方法供選擇，減少了患兒及家長不愿采靜脈血的痛苦，降低了醫(yī)療安全風險，有利于社會醫(yī)院和諧發(fā)展。

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